小鼠脑出血后不同时间点小胶质细胞极化状态的实验研究

目的观察小鼠脑出血后不同时间点小胶质细胞M1及M2型的转化,为促炎型M1型小胶质细胞向抗炎修复型M2型小胶质细胞的转化,减轻脑出血后神经功能损伤提供理论依据。方法选取健康雄性ICR小鼠48只,随机分为假手术组、脑出血组,每组按术后时间点不同随机分为1 d、3 d、7 d三个时间点,每个时间点8只。通过立体定位仪用微量注射器向尾状核注射Ⅳ型胶原酶0.5 U制备脑出血模型,假手术组注射等量生理盐水。各组于术后对应时间点参照改良Garcia评分量表进行神经功能缺损评分后灌注取脑,采用蛋白免疫印迹检测M1型小胶质细胞标志物肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6),M2型小胶质细胞标志物脑源性神经营养因子(brai n-derived neurotrophic factor,BDNF)、胰岛素样生长因子1(insulinlike growth factor 1,IGF-1)的含量;采用免疫荧光染色标记小胶质细胞M1型(Iba1+CD80)、M2型(Iba1+CD206),评价出血后血肿周围组织小胶质细胞活化状态。结果脑出血组1 d、3 d、7 d各时间点Garci a评分均较假手术组低,TNF-α、IL-6、BDNF及I GF-1的蛋白表达量均较假手术组增多(均P<0.01)。脑出血后1 d时M1型高于M2型小胶质细胞数量(38.33±1.53 vs 23.00±3.00,P=0.01);3 d时M1型同样高于M2型(66.33±3.06 vs 57.33±2.52,P=0.02);7 d时M1型低于M2型(33.67±1.15 vs 52.33±0.58,P<0.01)。结论脑出血急性期(1~3 d)以M1型小胶质细胞为主,脑出血亚急性期(7 d)以M2型小胶质细胞为主。

大鼠脑出血灶周围小胶质细胞极化的动态变化

目的探讨大鼠脑出血灶周围小胶质细胞极化的动态变化规律，为干预小胶质细胞的极化或研究其极化机制提供时间依据。方法健康雄性SD大鼠，随机分成sham组、脑出血4h、1d、3d、7d、14d组，每组6只。采用尾状核注射胶原酶法制备大鼠脑出血模型，分别于术后对应时间点灌注取脑；sham组注射等量生理盐水，于术后1d灌注取脑。采用免疫荧光染色法标记小胶质细胞Ⅰ型（Microglia type Ⅰ，M1；CD11b＋＋CD86＋）、小胶质细胞Ⅱ型（Microglia type Ⅱ，M2；CD11b＋ ＋Arg-1＋），评价血肿周围两种细胞数量的动态变化情况。结果（1）脑出血4h后已能检测到M1、M2，此时M1仍有部分突起存在；（2）MI在脑出血急性期（1—3d）及亚急性早期（3—7d）及慢性期（〉14d）占主要地位；M2在脑出血超急性期（24h内）及亚急性期晚期（7d）短时间内占有优势，4h时M2数量[（31．40±1．69）个]高于MI[（21．43±1．81）个]，差异有统计学意义（t=-4．085，P=0．002），7d时M2数量[（116．25±5．06）个]第二次超过M1[（85．75±7．32）个]，差异有统计学意义（t=-0．690，P=0．001）。结论M1在脑出血急性期、亚急性早期及慢性期占主要地位，M2于超急性期与亚急性晚期占有优势；于超急性期（如4h）与亚急性晚期（如7d）探讨M2的形成机制或于急性期（1～3d）干预M1的形成对于脑出血的治疗具有重要的临床意义。