Nrf2调控小胶质细胞功能转化在脑出血后血肿清除中的作用机制

目的探讨核因子红系相关因子2(Nrf2)介导的小胶质细胞功能转化在脑出血后血肿清除和功能恢复中的作用机制。方法通过注射Ⅳ型胶原酶复制小鼠脑出血模型。C57BL/6小鼠34只,随机分为对照组、脑出血组、脑出血+红曲素组、脑出血+血脂康组;雄性Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2^(-/-))C57BL/6小鼠8只,为脑出血+Nrf2^(-/-)组。采用改良Garcia评分评价神经功能;检测血红蛋白水平;采用Western blotting测定Nrf2、CD80、CD206、促炎因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、髓样细胞上表达的Ⅰ型受体(Trem1)和抗炎因子脑源性神经营养因子(BDNF)、髓样细胞上表达的Ⅱ型受体(Trem2)表达,采用免疫荧光测定Nrf2、CD80、CD206、Trem1和Trem2;采用Pearson法对Trem1、Trem2与改良Garcia评分,Trem2与血红蛋白进行相关性分析。结果与脑出血组比较,脑出血+红曲素组及脑出血+血脂康组的血红蛋白水平降低(P<0.05),改良Garcia评分增加(P<0.05),Trem2、CD206、BDNF相对表达量增加(P<0.05),Trem1、CD80、TNF-α相对表达量下降(P<0.05);脑出血+Nrf2^(-/-)组血红蛋白水平升高(P<0.05),改良Garcia评分降低(P<0.05),Trem2、CD206、BDNF相对表达量降低(P<0.05),Trem1、CD80、TNF-α相对表达量升高(P<0.05)。Trem1蛋白表达与改良Garcia评分呈负相关(r=-0.956,P<0.05),Trem2蛋白表达与改良Garcia评分呈正相关(r=0.936,P<0.05)。Trem2蛋白表达与血红蛋白呈负相关(r=-0.473,P<0.05)。结论Nrf2可通过调控小胶质细胞的功能转化,影响脑出血后血肿清除;Nrf2激动剂——红曲素及血脂康可通过上调Trem2、CD206、BDNF的表达强化小胶质细胞的吞噬功能,促进血肿产物的清除并促进神经修复;同时可下调Trem1及CD80、TNF-α的表达,抑制小胶质细胞的炎症反应,减轻出血后血肿及神经毒性而发挥神经保护作用。

自制复方中药汤剂灌胃对小鼠淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬功能的影响

目的:观察自制复方中药汤剂对实验小鼠淋巴细胞转化率和巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:取昆明小鼠40只,分为对照组、复方中药低剂量组(2.5mg/kg/天)、中剂量组(2.5mg/kg/天)和高剂量组(50mg/kg/天),连续灌胃给药15天后,采尾静脉血瑞氏染色观测淋巴细胞转化率,取腹腔液瑞氏染色观测巨噬细胞吞噬功能。结果:三种剂量复方中药均可明显提高淋巴细胞的转化率(与对照组比较,P<0.01)。各组巨噬细胞吞噬功能与对照组比较显著增强(P<0.01),且中剂量组明显高于低、高剂量组(P<0.05)。结论:复方中药汤剂灌胃对小鼠免疫功能有明显的调节和增强作用。

海马小胶质细胞激活在神经病理性疼痛致认知功能障碍中的作用

目的 探究海马小胶质细胞激活在神经病理性疼痛致认知功能障碍中的作用。方法 采用选择性坐骨神经分支损伤法(SNI)建立小鼠神经病理性疼痛模型,依据随机原则将36只雄性C57BL/6小鼠分为3组:假手术组(Sham组)、造模组(SNI组)、米诺环素组(SNI+mino组),每组12只。SNI+mino组术后连续21 d口服米诺环素(40 mg/kg),Sham组和SNI组每天口服等剂量饮用水。术前1 d及术后7、14、21 d使用机械缩足阈值检测疼痛行为,术后22 d使用旷场实验检测小鼠运动能力,Y迷宫实验和新物体识别实验检测认知功能。免疫荧光染色检测小鼠海马CA1区小胶质细胞标记物Iba-1、吞噬活性标记物CD68及突触标记物PSD95等表达情况,高尔基染色观察海马CA1区锥体神经元树突棘密度变化。结果 与同组术前1 d相比,Sham组和SNI+mino组术后7、14及21 d机械缩足阈值差异均无统计学意义(P>0.05),SNI组术后7、14及21 d机械缩足阈值均降低(P<0.01);与同时间点Sham组相比,SNI组小鼠术后7、14及21 d机械缩足阈值均下降(P<0.01),Y迷宫实验自发交替正确率降低(P<0.05),新物体识别实验辨别指数降低(P<0.05);与相应时间点SNI组相比,SNI+mino组小鼠术后7、14及21 d机械缩足阈值均升高(P<0.01),Y迷宫自发交替正确率增加(P<0.05),新物体识别实验辨别指数增加(P<0.05)。与Sham组相比,SNI组小鼠海马CA1区Iba-1+细胞数量增加(P<0.05),Iba-1+细胞中CD68的面积增加(P<0.05),小胶质细胞吞噬PSD95的比例增加(P<0.05),锥体神经元树突棘密度降低(P<0.01);与SNI组相比,SNI+mino组小鼠海马CA1区Iba-1+细胞数量降低(P<0.05),Iba-1+细胞中CD68的面积减少(P<0.05),小胶质细胞吞噬PSD95的比例降低(P<0.05),锥体神经元树突棘密度增加(P<0.01)。结论 神经病理性疼痛可致小鼠海马CA1区小胶质细胞激活,增加突触吞噬,最终导致认知功能障碍,而米诺环素可逆转这一过程。

小胶质细胞的吞噬功能在神经退行性疾病中的作用

小胶质细胞是中枢神经系统内的免疫细胞,当中枢神经系统受到内源性或外源性刺激时,小胶质细胞快速被激活为活化状态,活化的小胶质细胞在神经退行性疾病中发挥重要作用。小胶质细胞的吞噬功能是受体介导的吞食和消化凋亡神经元的过程,小胶质细胞还能够通过吞噬功能清除脑内特有的物质如鞘磷脂碎片和异常聚集的蛋白等。然而有研究显示小胶质细胞会吞噬活的神经元引起脑内神经元丢失。目前对于小胶质细胞的吞噬功能在神经退行性疾病中发挥保护作用还是损伤作用尚存在争议。本文主要综述小胶质细胞吞噬功能相关的机制和其在神经退行性疾病中的作用,为神经退行性疾病的治疗提供新的思路。

胰岛素样生长因子1(IGF-1)通过激活PI3K/AKT信号通路增强小鼠BV-2小胶质细胞的吞噬功能

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)对小鼠小胶质细胞吞噬功能的影响。方法脂多糖(LPS)腹腔注射建立小鼠急性中枢神经系统炎症模型,Western blot法检测脑组织中IGF-1和IGF-1受体(IGF-1R)的蛋白表达。使用LPS刺激BV-2小胶质细胞后,Western blot法检测IGF-1R的蛋白表达。体外培养BV-2细胞,在培养基中加入或未加入磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号阻断剂渥曼青霉素(wortmannin)的情况下,再加入IGF-1刺激24 h,加入荧光微球共同孵育2 h,流式细胞术检测BV-2细胞吞噬荧光微球的情况。IGF-1刺激BV-2细胞后,Western blot法检测细胞中AKT和磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS后,小鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R的表达均显著升高,同时LPS刺激也上调BV-2细胞IGF-1R的表达。随着IGF-1浓度的增加,BV-2细胞吞噬荧光微球的能力先逐渐增强后开始下降,在50 ng/mL的IGF-1刺激下BV-2细胞吞噬荧光微球的能力达到峰值。IGF-1刺激BV-2细胞后,细胞的AKT磷酸化水平逐渐上升。使用wortmannin阻断PI3K/AKT信号后,IGF-1促进BV-2细胞吞噬荧光微球的能力显著下降。结论IGF-1通过激活PI3K/AKT信号途径促进BV-2细胞的吞噬作用。

小胶质细胞的吞噬功能在神经退行性疾病中的作用

小胶质细胞是中枢神经系统内的免疫细胞,当中枢神经系统受到内源性或外源性刺激时,小胶质细胞快速被激活为活化状态,活化的小胶质细胞在神经退行性疾病中发挥重要作用。小胶质细胞的吞噬功能是受体介导的吞食和消化凋亡神经元的过程,小胶质细胞还能够通过吞噬功能清除脑内特有的物质如鞘磷脂碎片和异常聚集的蛋白等。然而有研究显示小胶质细胞会吞噬活的神经元引起脑内神经元丢失。目前对于小胶质细胞的吞噬功能在神经退行性疾病中发挥保护作用还是损伤作用尚存在争议。本文主要综述小胶质细胞吞噬功能相关的机制和其在神经退行性疾病中的作用,为神经退行性疾病的治疗提供新的思路。

星形胶质细胞可转化为功能性神经细胞

据Heinrich C[PLoS Biology,2010,8（5）：e1000373]德国慕尼黑大学、亥姆霍兹慕尼黑中心组成的一个研究小组报道,使用特殊的转录因子可使大脑皮层的星形胶质细胞转化为功能性神经细胞。

短链脂肪酸对术后认知功能障碍老龄大鼠小胶质细胞吞噬突触的影响

目的评价短链脂肪酸对术后认知功能障碍(POCD)老龄大鼠小胶质细胞吞噬突触的影响。方法健康雄性SD大鼠48只,18月龄,体质量520~650 g,采用随机数字表法分为4组(n=12):对照组(C组)、短链脂肪酸组(S组)、POCD组(P组)和POCD+短链脂肪酸组(PS组)。在S组和PS组大鼠饮水中加入短链脂肪酸(mmol/L,丙酸钠25.9、丁酸钠40、乙酸钠67.5),自由饮水28 d。第29天,P组和PS组大鼠采用4%~5%七氟烷麻醉诱导,3%七氟烷麻醉维持,行胫骨骨折内固定术,制备大鼠POCD模型。于术后7 d时行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期、穿越原平台位置次数、平均游泳速度和原平台所在象限停留时间。水迷宫实验结束后,麻醉后处死大鼠取完整大脑。高尔基染色分析海马组织CA1区神经元树突棘数量和密度。免疫荧光检测海马组织CA1区突触后致密蛋白95(PSD95)和补体组分蛋白1q(C1q)的表达。结果与C组比较,P组和PS组大鼠穿越原平台位置次数减少,原平台所在象限停留时间缩短,逃避潜伏期延长,海马CA1区树突棘数量和密度、树突与同心圆交点数减少,PSD95表达下调,C1q表达上调(P<0.05);与P组比较,PS组大鼠穿越原平台位置次数增多,原平台所在象限停留时间延长,逃避潜伏期缩短,海马CA1区树突棘数量和密度、树突与同心圆交点数增加,PSD95表达上调,C1q表达下调(P<0.05)。结论短链脂肪酸减轻老龄大鼠POCD的机制与降低小胶质细胞吞噬突触有关。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1通过β-连环蛋白/激活转录因子6α通路对高糖诱导的小鼠小胶质细胞吞噬功能影响的研究

目的 探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)通过β-连环蛋白(β-catenin)/激活转录因子6α(ATF6α)通路,参与调控高糖(HG)诱导的小鼠小胶质(BV2)细胞吞噬功能障碍的分子机制。方法 体外培养BV2细胞,构建慢病毒LOX-1RNAi载体(LV-LOX-1)及慢病毒空载体(LV-Con),分为正常对照(NC)组、HG组、LV-LOX-1组和LV-Con组。LV-LOX-1及LV-Con感染BV2细胞后,用HG(25 mmol/L葡萄糖)培养24 h后,记为HG+LV-LOX-1组和HG+LV-Con组,分别使用15μmol/L的β-catenin抑制剂(FH535)和ATF6α抑制剂(AEBSF)处理HG+LV-LOX-1及HG+LV-Con感染的BV2细胞24 h后,记为HG+LV-LOX-1+FH535组、HG+LV-Con+FH535组、HG+LV-LOX-1+AEBSF组、HG+LV-Con+AEBSF组。荧光显微镜、RT-PCR和Western blot判断转染效率。CCK-8检测细胞活力,RT-PCR和Western blot检测各组LOX-1、β-catenin、ATF6α、乳脂肪球表面生长因子Ⅷ(MFG-E8)m RNA及蛋白表达。结果 LV-LOX-1重组体感染细胞72 h后,LV-LOX-1、LV-Con组细胞出现大量绿色荧光,NC组细胞无绿色荧光。与NC组比较,HG组LOX-1、ATF6α mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),MFG-E8、β-catenin mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组MFG-E8、β-catenin mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),LOX-1、ATF6α mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+FH535组ATF6α mRNA和蛋白及p-β-catenin、p-ATF6α蛋白表达升高(P<0.05),MFG-E8、β-catenin mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+AEBSF组MFG-E8m RNA和蛋白表达升高(P<0.05),ATF6α mRNA和蛋白及p-ATF6α蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LOX-1、MFG-E8、β-catenin、ATF6α参与调控BV2细胞吞噬功能,LOX-1通过β-catenin/ATF6α信号通路促进HG诱导的BV2细胞吞噬功能障碍。

IL-38对小胶质细胞活化和吞噬能力的调控作用及机制

目的近年来阿尔茨海默病的发病率居高不下,已成为我国目前和今后数十年面临的严重问题。β类淀粉样肽(Aβ)在大脑堆积是导致阿尔茨海默病的原因之一。小胶质细胞既是大脑的免疫细胞,又是大脑的垃圾清理细胞。而在阿尔茨海默患者中,小胶质细胞清除细胞碎片和蛋白沉积物的能力减弱,导致淀粉样蛋白β斑块积聚。本研究主要探究IL-38对小胶质细胞活化和吞噬能力的调控作用及其机制,为阿尔茨海默病的防治找到新线索。方法采用免疫荧光法观察原代Wistar近交系大鼠小胶质细胞IL-38及其受体IL-1R1,IL-1RL2和IL-1RAPL1的表达。将原代大鼠小胶质细胞分为2组:正常对照组和IL-38实验组,对照组无处理,实验组分别以1,25和50μg·L-1IL-38蛋白处理24 h,以50μg·L-1IL-38蛋白处理6,12,24和36 h,采用荧光计数法检测小胶质细胞对Aβ和葡聚糖的吞噬能力,q PCR法检测小胶质细胞炎性因子(IL-1β,IL-6,INos及Tnf-α)和抗炎因子(IL-10,Arg1及Mrc1)的表达。Westren蛋白印迹法检测IL-38蛋白刺激和LY294002抑制PI3K后PI3K-RAC1通路蛋白及磷酸化水平改变。将PAP小鼠分为2组,每组8只,通过脑立体定位分别注射AAV-Control和AAV-IL-38,采用免疫荧光法观察两组脑内斑块的大小和分布,通过新物体识别和旷场实验等观察2组行为学改变。结果 IL-38及其受体在小胶质细胞中均有表达,且IL-1RL2表达较高;小胶质细胞经50μg·L-1IL-38蛋白刺激24 h后吞噬Aβ和葡聚糖增多,Arg1和Mrc1表达增多,提高PI3K和AKT的磷酸化水平和RAC1和CDC42的表达,但抑制PI3K后未出现上述变化;脑定位注射AAV-IL-38后PAP小鼠斑块减少,提高新物体识别能力。结论 IL-38通过激活PI3K-RAC1通路促进小胶质细胞的吞噬功能。

壮尔颗粒对小鼠细胞免疫功能的影响

目的观察壮尔颗粒(Zhuang'erGranules,ZG)对小鼠细胞免疫功能的影响。方法用氢化可的松建立免疫抑制小鼠模型,灌胃7d后,采用体外法测定小鼠巨噬细胞吞噬功能,形态学检测法测定小鼠淋巴细胞转化率。结果与对照组相比较,ZG对正常小鼠和免疫抑制小鼠均具有显著增强巨噬细胞吞噬功能和提高淋巴细胞转化百分率的作用(P<0.05),且作用呈量效关系。结论ZG具有一定的提高小鼠细胞免疫功能的作用。

小胶质细胞参与新生儿缺氧缺血性脑损伤所致突触异常的研究

目的:探讨新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后突触异常的机制。方法:采用改良的Rice-Vannucci法建立C57BL/6J和CX3CR1GFP转基因小鼠的HIBD模型。用TTC染色、HE染色、Fluoro-Jade B(FJB)染色、体重称量和行为学测试确定HIBD模型建立成功。Western blot检测吞噬相关蛋白和突触相关蛋白在脑内的表达。通过免疫荧光染色法检测突触与小胶质细胞的关系。结果:HIBD后,损伤同侧大脑出现神经元核固缩、核碎裂、核溶解;FJB染色结果显示坏死神经元增多;体重和行为学评分降低;吞噬相关蛋白溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和髓系细胞触发受体2(TREM2)及突触相关蛋白突触致密蛋白95(PSD95)表达增加,神经元核抗原(NeuN)表达减少;免疫荧光结果显示CD11b+细胞在梗死边缘区表达LAMP1和PSD95;共聚焦显微观察证实小胶质细胞在HIBD后表达TREM2,且与突触蛋白(SYP)共定位。结论:HIBD后脑内驻留巨噬细胞——小胶质细胞的吞噬功能被激活,并通过TREM2上调吞噬功能而介导突触丢失,进而在HIBD后的行为异常中发挥作用。

小胶质细胞在神经精神性狼疮发病机制中的研究进展

神经精神性狼疮(neuropsychiatric systemic lupus erythematosus,NPSLE)是系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)累及神经系统而产生各种神经、精神症状的一组严重并发症。目前NPSLE的发病机制尚不明确,可能与多种免疫反应相关。小胶质细胞(microglia,MG)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)的免疫细胞。本文总结了MG参与SLE中枢神经受累的证据,并对MG通过吞噬作用和神经毒性作用参与NPSLE发生发展的相关研究进行综述,以期为进一步探索NPSLE的发病机制,研究NPSLE的有效治疗方法提供新的思路与线索。

大蒜素对小鼠免疫功能的影响

研究了大蒜素对小鼠免疫功能的影响。结果表明大蒜素具有明显增强小鼠腹腔ＭΦ的吞噬功能，提高Ｔ淋巴细胞转化率及增强ＮＫ细胞的活性。大蒜素具有明显增强机体细胞免疫功能的作用。

当归补血汤粗多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

目的 :观察当归补血汤多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法 :用环磷酰胺致免疫抑制小鼠进行实验。结果 :当归补血汤多糖可显著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数 ,促进溶血素及溶血空斑形成 ,促进淋巴细胞转化。结论 :当归补血汤多糖有较好的免疫兴奋作用。

平消片对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 :研究平消片对荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫功能的影响。方法 :观察荷S180 肉瘤小鼠在给予不同剂量平消片后其脾脏指数、腹腔巨噬细胞吞噬率、植物血凝素诱导的淋巴细胞转化率和抗体效价的变化。结果 :平消片 0 1、0 2、0 4g/kg能增强荷瘤小鼠的抗体效价 ,提高其吞噬率和淋巴细胞转化率 ,抑制脾脏重量的减轻和肿瘤的生长。结论

灌喂大豆蛋白胃蛋白酶酶解物对大鼠免疫功能的影响

经碱提酸沉法制备大豆蛋白,胃蛋白酶水解,茚三酮法测定水解液水解度,系统观察了灌喂1mL的5mg/mL的大豆蛋白酶解物对大鼠免疫功能的影响。结果表明:大豆蛋白水解液含氮量为(2.15±0104)mg/mL,水解度为14.49%,平均肽链长度为6.9。灌喂21d后,发现胸腺、脾脏指数较对照组分别上升了24%(P<0101)和32%(P<0101);灌喂大豆蛋白酶解物能显著促进大鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性;该组比对照组A570上升67%(P<0101);大鼠外周血淋巴细胞转化明显增强,试验组较对照组上升了82.8%。能显著提高大鼠血清抗体的血凝抑制效价(hemagglutination inhibition titer,HI),试验组比对照组HI值上升了33.3%,差异极显著(P<0101);试验组的肠腔sIgA水平较对照组上升了34.3%,差异极显著(P<0101);灌喂大豆蛋白酶解物能极显著提高血液IL22和Leptin水平。试验结果表明灌喂大豆蛋白酶解物能增强大鼠免疫功能,主要是酶解肽的生物活性的作用结果,并非营养调节作用的结果,酶解物对大鼠消化代谢影响不大。