小胶质细胞活化在脊髓损伤中的中医研究进展

脊髓损伤(SCI)是脊柱骨科常见的严重的中枢神经系统疾患,其发病机制复杂,发病率呈上升趋势,迄今为止,临床上尚未形成具体的诊疗方案。阴阳失衡是脊髓损伤发生发展的基础。脊髓损伤发生后,小胶质细胞受到刺激,通过经典激活状态和替代激活状态,极化为M1、M2小胶质细胞,这两种不同的状态在脊髓损伤过程中发挥不同的作用,与中医阴阳学说中的阴阳平衡、相互对立相对应。研究表明,小胶质细胞不仅在神经元的营养和维护中发挥重要作用,同时在脊髓损伤后的修复和再生中也起着举足轻重的作用。因此,治疗脊髓损伤应以此为依据,调整脊髓内环境,达到阴阳平衡状态,进而促进脊髓神经修复。本文从中医阴阳理论出发,探讨小胶质细胞在脊髓损伤后炎症反应中的作用,为临床中医治疗SCI提供理论依据。

银杏内酯调节SIRT1/HMGB1信号通路对血管性认知障碍大鼠小胶质细胞活化的影响

目的:探讨银杏内酯调节信息调节因子相关酶1(SIRT1)/高迁移率族蛋白B1(HMGB1)信号通路对血管性认知障碍大鼠小胶质细胞活化的影响。方法:选用SPF级雄性SD大鼠,体质量210~240 g,通过结扎双侧颈总动脉制备血管性认知障碍大鼠模型,将成模动物随机分为模型组、银杏内酯低剂量(6 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)组、SIRT1抑制剂EX527(5 mg/kg)组、银杏内酯高剂量(12 mg/kg)+EX527(5 mg/kg)组,每组10只。另取10只大鼠,仅分离颈总动脉,但不进行结扎,设为假手术组。药物干预14 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能;TUNEL染色检测大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率;免疫荧光染色检测大鼠脑组织小胶质细胞活化情况,比较M1标志物CD16与M2标志物Arg-1阳性细胞数;ELISA检测大鼠血清PGE_2、IL-1β、IL-18水平;免疫印迹法检测大鼠脑组织M1标志物(CD16、CD32)、M2标志物(CD206、Arg-1)及SIRT1/HMGB1信号通路相关蛋白(SIRT1、HMGB1)表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、CD206、HMGB1、Arg-1蛋白表达和CD16、Arg-1阳性细胞数显著升高,脑组织SIRT1蛋白表达显著降低,血清PGE_2、IL-1β、IL-18水平显著升高,穿台次数显著减少,目标象限停留时间显著缩短(P<0.05)。与模型组比较,银杏内酯低、高剂量组大鼠大脑皮质及海马神经元凋亡率及脑组织CD16、CD32、HMGB1蛋白表达和血清PGE_2、IL-1β、IL-18水平显著降低,穿台次数显著增多,目标象限停留时间显著延长,Arg-1阳性细胞数及脑组织CD206、Arg-1、SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.05)。EX527可逆转高剂量银杏内酯的作用(P<0.05)。结论:银杏内酯可通过上调SIRT1表达而抑制HMGB1信号激活,从而抑制小胶质细胞活化,促使其M2极化,抑制血管性认知障碍大鼠炎症,进而提升其认知能力。

缺血性脑卒中大鼠学习记忆功能、海马组织氧化应激、小胶质细胞活化的变化情况分析

目的 分析缺血性脑卒中大鼠学习记忆功能、海马组织氧化应激、小胶质细胞活化的变化情况。方法 选择50只SD大鼠,采用随机数字表法选择其中20只进行大脑中动脉阻塞模型造模(成功16只,作为大脑中动脉阻塞组);选择17只大鼠分离迷走神经、右侧颈总动脉、颈内动脉后缝合(成功16只,作为假手术组);空白对照组13只,大鼠腹腔注入0.9%氯化钠溶液,未进行手术。行Morris水迷宫实验,提取海马组织,检测其中的总抗氧化能力(TAOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧化酶1(HO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)及络氨酸蛋白激酶受体B(TrkB)水平。结果 与空白对照组、假手术组相比,大脑中动脉阻塞组干预后第1~5天的逃避潜伏期时间、游泳距离明显较长,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、假手术组相比,大脑中动脉阻塞组初始角度明显高,穿越平台次数、跨越目标象限距离占整个游泳距离百分比、跨越目标象限时间占整个游泳时间百分比明显较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组、假手术组相比,大脑中动脉阻塞组海马组织丙二醛水平均明显较高,海马组织TAOC、GSH-Px、SOD、Nrf2、HO-1、BDNF、TrkB水平均明显较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与假手术组以上各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 缺血性脑卒中大鼠的学习记忆功能明显降低,可能与海马组织TAOC、GSH-Px、SOD、Nrf2、HO-1水平降低,丙二醛升高,小胶质细胞活化BDNF、TrkB水平降低有关。

桂枝加葛根汤对神经炎症小鼠皮层小胶质细胞活化和神经元保护作用的研究

目的研究桂枝加葛根汤(GGD)对脂多糖(LPS)诱导的神经炎症小鼠皮层小胶质细胞活化及神经元损伤的保护作用及其机制。方法将63只雄性ICR小鼠随机分成5组:正常对照组(Control组,n=13)、模型组(Model组,n=13)、桂枝加葛根汤低剂量组(GGD-low组,n=10)、桂枝加葛根汤高剂量组(GGD-high组,n=14)、二甲基四环素阳性对照组(Positive control组,n=13)。腹腔注射LPS(0.33μg/g)建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)神经炎症小鼠模型;GGD-low组(6 g/kg)和GGD-high组(12 g/kg)给予小鼠GGD灌胃治疗,共4周;阳性对照组给予二甲基四环素(0.05 g/kg)腹腔注射,共3天,药物治疗结束后小鼠处死前4 h注射LPS造模。分别采用免疫荧光法观察桂枝加葛根汤对神经炎症小鼠皮层小胶质细胞活化和神经元密度的影响;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测皮层促炎细胞因子TNF-α和IL-1β含量。结果 LPS诱导后Model组小鼠神经炎症反应加剧,与Control组相比,皮层小胶质细胞数量增多、胞体肿大、突起回缩但分支增多,活化现象显著,而皮层NeuN阳性神经元密度明显减少,胞浆着色淡,细胞轮廓模糊;桂枝加葛根汤治疗后,与Model组相比,GGD-high组小胶质细胞活化现象明显抑制,数量少,分支也少,而皮层神经元密度增加,尤其GGD-high组密度增加更显著,胞浆染色加深明亮,说明桂枝加葛根汤对皮层的神经元损伤具有一定保护作用。LPS诱导后皮层TNF-α和IL-1β含量与Control组相比显著增高(P<0.05,P<0.01);桂枝加葛根汤治疗后与Model组小鼠比较,GGD-high组小鼠皮层TNF-α含量显著降低(P<0.05),GGD-low和GGD-high组皮层IL-1β含量均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论桂枝加葛根汤对LPS诱导的神经炎症小鼠皮层神经元损伤具有一定保护作用,其机制可能与抑制皮层小胶质细胞活化和调节促炎细胞因子TNF-α和IL-1β含量的作用有关。

脑出血后小胶质细胞活化与神经元DNA损伤的关系

目的 探讨脑出血 (intracerebral hemorrhage,ICH )后小胶质细胞的激活与神经元 DNA损伤 (主要是凋亡 )的关系。方法 应用立体定向技术 ,将自体不凝血注入大鼠尾状核制备 ICH模型 ,将动物随机分为假手术组、ICH组 ,分别在不同时间点断头取脑 ,连续切片作 TUNEL染色和小胶质细胞组化染色。结果 ICH后 6h血肿周边组织可见 TUNEL 阳性细胞 ,72 h达高峰 ,1周时仍有较多量表达 ;小胶质细胞在 ICH后 6h表达明显增多 ,48h达到高峰 ,2周时仍有少量表达 ,各组与假手术组之间比较差异显著 (P<0 .0 1) ;ICH后的 TUNEL阳性细胞与小胶质细胞的表达呈正相关 (r=0 .718,P<0 .0 5)。结论 ICH后小胶质细胞的活化可导致大鼠神经细胞

杏仁核损毁对神经病理性疼痛大鼠疼痛症状及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的：探讨损毁基底外侧杏仁核（Basolateral amygdala,BLA）对神经病理性疼痛大鼠疼痛症状及脊髓小胶质细胞活化的影响.方法：选择60只200～250 g纯种雄性SD大鼠,采用坐骨神经慢性缩窄手术（Chronic constriction injury,CCI）制备神经病理性疼痛模型,随机分为3组（n=20）：模型组（Model）,模型＋BLA损毁组（Model＋BLA lesions）和模型＋假手术组（Model＋sham）,模型＋ BLA损毁组于CCI术后7天采用立体定位辅助下将损毁电极插入BLA行阳级损毁.同时选取20只同周龄大鼠作空白对照组（Blank）,模型＋假手术组则仅行立体定位并插入未通电的损毁电极.观察各组CCI术前2d、术后1、4、7、11、14、17及21 d固定时间点的自发性痛行为,采用von Frey纤维和热辐射法分别测量以上时间点的机械性缩足反射阈值（Withdrawal mechanical threshold,MWT）和热刺激爪退缩阈值（Thermal withdrawal latency,TWL）;采用荧光免疫组化法检测术后21天脊髓大麻素受体2（Cannabinoid receptor 2,CB2）及特异表达补体C3受体（Complement receptor 3,OX-42）的荧光积分光密度（Integral opticaldensity,IOD）来评价脊髓小胶质细胞的活化情况;酶联免疫吸附法检测脊髓血浆肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平来评价炎症反应情况.结果：与空白组相比,模型组的MWT和TWL水平降低,脊髓小胶质细胞CB2和OX-42的IOD增强及脊髓TNF-α和IL-1β水平升高;BLA损毁后可改善以上异常,模型＋BLA损毁组的MWT和TWL水平升高,脊髓小胶质细胞CB2和OX-42的IOD的增强及脊髓TNF-α和IL-1β水平的升高均被抑制,均优于模型组和模型＋假手术组（P＜0.05）,但与空白组的差异仍有统计学意义（P＜0.05）.结论：损毁BLA可改善神经病理性疼痛大鼠的疼痛症状,同时对脊髓小胶质细胞活化有抑制作用并降低炎症反应.

大鼠脑缺血再灌注时小胶质细胞活化与外源性巨噬细胞补充(英文)

目的:观察脑缺血再灌注时小胶质细胞的活化和外源性巨噬细胞来源。方法:阻塞大鼠大脑中动脉2h再灌注0.5～48h制成脑缺血模型,凝集素GSI-B4组化法观察小胶质细胞/巨噬细胞在脑组织的分布、免疫组化观察室管膜细胞增殖及分化。结果:再灌注0.5h,可见大量形态各异的GSI-B4阳性的小胶质细胞与巨噬细胞,随后下降,12～48h数量持续增高,并呈不同的形态。各实验组,室管膜及室管膜下层有细胞增殖核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)强阳性细胞。杏仁核、杏仁皮质核、视前区及其软脑膜有PCNA强阳性细胞和GSI-B4强阳性阿米巴样巨噬细胞。再灌注24h组,有PCNA与白细胞共同抗原45RB(leukocytecommonantigen,CD45RB)双标阳性的细胞。结论:缺血再灌注时,不同损伤区域小胶质细胞形态呈明显的异形性,外源性巨噬细胞可能来自脑膜巨噬细胞和室管膜及室管膜下层的增生、浸润和迁移。

外泌体源性microRNA-124对急性创伤性脊髓损伤大鼠脊髓小胶质细胞活化及炎症反应的影响

目的观察外泌体(Exos)源性microRNA-124(miR-124)对急性创伤性脊髓损伤(ASCI)大鼠脊髓小胶质细胞(MG)活化及炎症反应的影响。方法取对数期HEK239细胞,分为空白组、转染组。空白组不处理,转染组转染miR-124-mimics质粒。从35只大鼠中随机选取10只仅咬除椎板显露脊髓,不进行损伤处理,设为假手术组;其余25只复制ASCI模型,模型复制成功20只,随机分为ASCI组、实验组,每组10只。分离含有miR-124的Exos,鉴定后用于后续实验。模型复制成功后24 h,实验组经尾静脉注射Exos 3×10^(9)个微粒,假手术组及ASCI组注射等量PBS溶液。实时荧光定量聚合酶链反应检测脊髓组织miR-124的表达;流式细胞术检测脊髓组织MG占比;酶联免疫吸附试验检测脊髓组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;Western bloting检测脊髓组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、P2X7蛋白的表达。结果转染组miR-124相对表达量高于空白组(P<0.05)。与假手术组、ASCI组比较,实验组脊髓组织miR-124相对表达量升高(P<0.05)。与假手术组比较,ASCI组脊髓组织Iba-1^(+)/CD32^(+)、Iba-1^(+)/CD206+占比均升高(P<0.05);与ASCI组比较,实验组脊髓组织Iba-1^(+)/CD32^(+)占比降低(P<0.05),Iba-1^(+)/CD206+占比升高(P<0.05)。与假手术组比较,ASCI组脊髓组织TNF-α、IL-6、IL-8升高(P<0.05);与ASCI组比较,实验组脊髓组织TNF-α、IL-6、IL-8降低(P<0.05)。与假手术组比较,ASCI组脊髓组织NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白相对表达量升高(P<0.05);与ASCI组比较,实验组脊髓组织NLRP3、Caspase-1、P2X7蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论Exos源性miR-124可促进ASCI大鼠脊髓M1型MG转化为M2型,减轻炎症反应,推测其作用机制与抑制P2X7-NLRP3/Caspase-1信号通路活性有关。

P2X4Rs在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及炎症反应中的作用

P2X4受体（P2X4 receptor，P2X4R，P2X4Rs）是ATP受体（P2-purinoceptors，P2）的一个亚型，广泛分布在中枢神经系统，其中脑内主要分布于海马、嗅球及大脑皮层等。研究发现脑缺血缺氧情况下，损伤后的神经元释放ATP至胞外，激活其配体门控性通道P2X受体，进一步激活小胶质细胞，而过度活化的小胶质细胞可释放一氧化氮合酶、促炎因子等物质介导炎症反应进一步损伤神经元，而阻断小胶质细胞的过度活化可减少炎症因子的释放，降低缺血导致的神经损伤。因此抑制小胶质细胞的过度活化、调控小胶质细胞表面或细胞内表达的受体或蛋白分子、拮抗小胶质细胞产生的神经毒性因子、促进小胶质细胞分泌神经保护性物质、阻断小胶质细胞介导的炎症反应等成为脑缺血治疗的新思路。本文对P2X4受体在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及其介导炎症反应中的作用作一综述。

黄体酮对小胶质细胞活化的影响

目的观察黄体酮对体外培养小胶质细胞活化的抑制作用。方法取新生SD大鼠皮层,分离、纯化、培养小胶质细胞,脂多糖(LPS)诱导其活化,ELISA法检测活化前后细胞培养上清液内TNFα、IL-1β水平的变化。结果黄体酮干预组小胶质细胞培养上清液内TNFα、IL-1β的表达水平明显低于LPS处理组。结论黄体酮可以显著减少上清液内炎症介质的水平,抑制体外培养小胶质细胞的活化。

轮环藤碱对小胶质细胞活化的抑制作用研究

考察了轮环藤碱对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞过度活化的抑制作用.培养BV2小鼠小胶质细胞系,以脂多糖(1μg/mL)激活小胶质细胞,同时给予不同浓度的轮环藤碱(0.1~10μmol/L)处理细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法测定细胞释放一氧化氮(NO)水平,酶联免疫吸附分析实验(ELISA)检测细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平.进一步在无细胞体系中考察了轮环藤碱对NO的直接清除能力;以及对DPPH、羟自由基(·OH)、过氧亚硝酸根离子自由基(ONOO-)和超氧阴离子(·O-2)自由基的清除作用.结果表明,轮环藤碱可显著抑制LPS激活的小胶质细胞释放NO及三种炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),且对细胞存活率无明显影响;此外,轮环藤碱对NO、DPPH、·OH、ONOO-和·O-2自由基均具有显著清除能力.综上,轮环藤碱可能对小胶质细胞过度激活引起的神经炎性相关疾病具有潜在的防治作用.

小鼠早期脓毒性脑病中小胶质细胞活化的探索研究

脓毒性脑病是决定脓毒症死亡率的关键因素。虽然脑中炎症反应与脓毒性脑病的发生相关,但其分子机制尚不清楚。本文针对早期脓毒性脑病中小胶质细胞是否活化进行探索性研究。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症小鼠模型,将小鼠大脑皮层样本经组织免疫荧光化学染色后,在激光共聚焦显微镜下观察小胶质细胞免疫荧光强度变化情况,并与假手术组对比,通过形态上的变化来确认小胶质细胞的活化情况。结果发现在模型组小鼠中小胶质细胞的数量较对照组增多,荧光强度增大且出现小胶质细胞胞体变大,揭示了小胶质细胞被激活。

视网膜小胶质细胞活化模型的建立

目的: 建立视网膜小胶质细胞培养、纯化和鉴定的方法,以观察视网膜小胶质细胞活化后的形态和功能变化,探讨活化的小胶质细胞在糖尿病视网膜病变时的可能作用。方法: 以细菌内毒素脂多糖 (LPS)活化小胶质细胞,通过免疫细胞化学及con focal显微镜技术、流式细胞术、MTT、ELISA等方法观察视网膜小胶质细胞形态、数量和功能的变化。结果: 视网膜小胶质细胞纯度在 96%以上,LPS激活的小胶质细胞发生形态改变,CD11b表达上调,释放细胞因子TNF α,而细胞数量无明显改变。结论: 从细胞免疫表型、纯度、形态学和分泌功能等方面都证明,本方法是一种稳定、高效的小胶质细胞分离纯化方法。

鞘内注射右美托咪定对骨癌痛大鼠脊髓小胶质细胞活化及Toll样受体的影响

目的探讨鞘内注射右美托咪定(DEX)对骨癌痛大鼠脊髓小胶质细胞活化的影响。方法通过向健康雄性SD大鼠(200~250 g)胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞液制备骨癌痛(BCP)模型后进行鞘内置管,将45只成功诱导BCP大鼠模型随机分组(n=15):高剂量DEX(DEX-H)组、低剂量DEX(DEX-L)组及生理盐水(NS)组,DEX-H与DEX-L组分别于鞘内注入6μg·kg-1·d-1或3μg·kg-1·d-1(注射体积均为10μl),同时选取15只同周龄大鼠作对照(C),其余两组鞘内注入等体积生理盐水。于鞘内注射前后对4组进行行为学检测来分析DEX对BCP大鼠机械缩足阈值(MWT)和缩足热潜伏期(WTL)的影响,采用荧光免疫组化法检测各组鞘内注射7 d后的脊髓小胶质细胞特异表达补体C3受体(OX-42)的荧光积分光密度(IOD),酶联免疫吸附法检测脊髓肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β水平,免疫印迹检测脊髓Toll样受体(TLR)4及TLR2蛋白水平。结果与C组相比,NS组鞘内注射0~7d的NMT和WTL降低,脊髓小胶质细胞OX-42的IOD、脊髓TNF-α和IL-1β水平及Toll样受体表达均升高(P<0.05);给予DEX鞘内注射可改善BCP大鼠的以上异常指标(P<0.05),但与C组均有统计学差异(P<0.05);且DEX-H组的以上指标均优于DEX-L组(P<0.05)。结论鞘内注射DEX对BCP大鼠有较好的镇痛作用并抑制了脊髓小胶质细胞活化,可能与其缓解炎症反应及降低Toll样受体表达有关。

基于miR-223/NLRP3轴研究柚皮素对氧诱导视网膜病变中小胶质细胞活化的影响

目的基于微小RNA(miR)-223/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴探讨柚皮素(NAR)对氧诱导视网膜病变(OIR)中小胶质细胞活化的影响。方法150只7日龄(P7)C57BL/6J幼鼠分为常氧组、OIR组、NAR组、NAR+阴性对照组、NAR+miR-223拮抗剂组,每组30只。除常氧组外,其余各组幼鼠及其母鼠在P7~P12移至氧气体积分数(75±2)%封闭氧箱中,连续5 d,P12返回正常氧环境中;常氧组在正常氧环境中常规饲养。NAR组幼鼠腹腔注射100 mg/(kg·d)NAR,NAR+阴性对照组在NAR基础上P12尾静脉注射2.5 mg/kg miR-223拮抗剂阴性对照,NAR+miR-223拮抗剂组在NAR基础上P12尾静脉注射2.5 mg/kg miR-223拮抗剂,常氧组、OIR组每天腹腔注射等体积CMC、P12尾静脉注射等体积生理盐水。实时荧光定量PCR(RT-qRCR)检测视网膜中miR-223水平;幼鼠眼底行荧光素眼底血管造影(FFA);苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜形态;免疫荧光检测视网膜中小胶质细胞标志物钙离子结合蛋白-1(Iba-1)情况;Western blot检测视网膜中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素(IL)-1β及IL-18蛋白表达情况。结果OIR组出现血管破裂,荧光漏在视网膜中,视网膜泛白,血管出现收缩,视网膜厚度变厚、细胞排列松散,部分出现细胞缺失现象、血管新生现象;NAR组、NAR+阴性对照组血管破裂现象缓解,视网膜泛白现象减轻,但视网膜细胞仍松散;NAR+miR-223拮抗剂组血管破裂,荧光漏在视网膜中,视网膜泛白明显,视网膜细胞松散严重、细胞缺失明显。与常氧组相比,OIR组视网膜中miR-223水平降低(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平升高(P<0.05);与OIR组相比,NAR组、NAR+阴性对照组视网膜中miR-223水平升高(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平降低(P<0.05);分别与NAR组、NAR+阴性对照组相比,NAR+miR-223拮抗剂组视网膜中miR-223水平降低(P<0.05),视网膜中Iba-1水平、NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白水平升高(P<0.05)。结论NAR能够升高miR-223的表达进而抑制NLRP3炎症体的表达,从而缓解小胶质细胞过度活化现象,实现对OIR的缓解。

甘草酸铵对带状疱疹后遗神经痛大鼠GLP-1R/IL-10/β-内啡肽通路及脊髓背角小胶质细胞活化的影响

目的探究甘草酸铵对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠脊髓背角小胶质细胞活化,及胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)/白细胞介素-10(IL-10)/β-内啡肽(β-endorphin)通路的影响。方法将60只大鼠随机分成5组:对照组、模型组、甘草酸铵低剂量组(50 mg/kg)、甘草酸铵中剂量组(100 mg/kg)和甘草酸铵高剂量组(200 mg/kg),每组12只。除对照组外,其余各组均用树脂毒素(RTX)诱导,构建PHN大鼠模型,并进行相应的药物处理。检测各组大鼠对机械刺激和热刺激的敏感性;免疫荧光检测大鼠脊髓背角组织小胶质细胞的活化;ELISA法检测脊髓背角中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;Western blot法检测大鼠脊髓背角中GLP-1R、IL-10、β-endorphin蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠缩爪热潜伏期(PWTL)值、小胶质细胞活化数量、IL-1β、TNF-α含量、及GLP-1R、IL-10、β-endorphin蛋白水平显著升高(P<0.05),缩爪机械阈值(PWMT)值显著降低(P<0.05);与模型组相比,甘草酸铵各剂量组大鼠PWMT值、小胶质细胞活化数量、GLP-1R、IL-10、β-endorphin蛋白水平显著升高(P<0.05),PWTL值及IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.05)。结论甘草酸铵可促进PHN大鼠小胶质细胞活化,激活GLP-1R/IL-10/β-内啡肽信号通路,减少促炎细胞因子水平,减轻PHN疼痛反应。

TRPM2通道对氧糖剥夺再灌注后小胶质细胞活化的影响及机制

目的探究瞬时受体电位M2(transient receptor potential melastatin 2,TRPM2)通道对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)后小胶质细胞活化的影响及分子机制。方法采用线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞/再灌注模型(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R),分为野生假手术组、TRPM2敲除假手术组、野生模型组和TRPM2敲除模型组,灌注切片,免疫荧光观察在体小胶质细胞形态。提取原代小胶质细胞,免疫荧光鉴定纯度,利用原代小胶质细胞建立(OGD/R)模型,将细胞分为野生对照组、野生模型组、野生模型+TRPM2通道抑制剂(ACA)组、TRPM2敲除对照组、TRPM2敲除模型组,使用免疫荧光观察OGD/R造模后小胶质细胞活化形态改变。在BV2细胞中建立OGD/R模型,将细胞分为空白对照组、模型组、模型+TRPM2通道抑制剂(ACA)组,利用活性氧检测试剂盒检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,使用酶联免疫吸附试剂盒检测细胞炎性因子分泌情况,钙成像检测细胞胞内钙含量。结果小鼠MCAO/R造模后,野生模型组在体小胶质细胞激活显著,TRPM2敲除模型组在体小胶质细胞激活受到抑制。原代小胶质细胞OGD/R造模后,野生模型组活化形态明显,TRPM2敲除模型组、野生模型+ACA组细胞活化受到抑制。BV2细胞OGD/R造模后,与空白对照组相比,模型组ROS水平上调(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)分泌量增多(P<0.05)、胞内钙含量升高(P<0.05);与模型组相比,模型+ACA组的ROS水平下降(P<0.05)、TNF-α和IL-6分泌量减少(P<0.05)、胞内钙含量降低(P<0.05)。结论TRPM2通过钙离子在OGD/R中调控小胶质细胞活化及炎性因子分泌量。

鞘内注射Quinpirole对骨癌痛大鼠镇痛及脊髓小胶质细胞活化的影响

目的探讨鞘内注射Quinpirole(QNP)对骨癌痛大鼠镇痛及脊髓小胶质细胞活化的影响。方法选取健康成年雄性SD大鼠60只通过胫骨骨髓腔内注射Walker256乳腺癌细胞液制备骨癌痛模型。将骨癌痛大鼠随机分为高剂量10μg/kg QNP(QNP-H)、低剂量5μg/kg QNP(QNP-L)及生理盐水(NS)3组,每组20只;QNP采用每日鞘内注射方式,注射体积为10μl。选取20只同周龄大鼠作对照(C),NS组和C组仅给予等体积生理盐水。分别于治疗前、治疗1、3、5、7d后对各组进行行为学检测,分析以上观察时间点大鼠的机械缩足阈值(MWT)和缩足热潜伏期(WTL);采用免疫组化法检测脊髓离子钙接头蛋白分子-1(Iba-1)染色以及特异表达补体C3受体(OX-42)和大麻素受体2(CB2)的荧光积分光密度(IOD);酶联免疫吸附法检测脊髓肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-1β水平;Western blotting检测脊髓Toll样受体-4(TLR-4)及受体-2(TLR-2)蛋白表达水平。结果与C组相比,其余3组各观察时间点的MWT、WTL降低;Iba-1染色程度、OX-42和CB2的IOD、脊髓TNF-α和IL-1β水平、TLR-4和TLR-2水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。在骨癌痛大鼠模型中,QNP-H组、QNP-L组在上述指标与NS组的差异均有统计学意义(P<0.05);且QNP-H组均优于QNP-L组(P<0.05)。结论鞘内注射QNP对骨癌痛大鼠有较好的镇痛作用,同时可降低脊髓小胶质细胞活化及炎症反应。

小檗碱对TLR4蛋白表达和小胶质细胞活化的作用

目的研究小檗碱对Toll样受体-4(TLR4)蛋白表达和小胶质细胞活化的作用,探讨小檗碱调控脑缺血后炎症反应的可能机制。方法给予10μM小檗碱预处理小胶质细胞BV2,再经200ng/ml脂多糖(LPS)刺激24h后,分别用免疫印迹和免疫荧光染色方法检测TLR4、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的表达变化。结果免疫印迹结果显示,LPS刺激BV2细胞活化后,TLR4蛋白表达显著升高,iNOS和TNF-α表达明显增多。而小檗碱显著抑制了TLR4蛋白的表达升高,并降低了iNOS和TNF-α的蛋白水平。免疫荧光结果显示,LPS刺激BV2细胞后,在TLR4蛋白表达较高的细胞中,iNOS的表达水平也较高;小檗碱同时降低了两种蛋白的表达。结论小檗碱抑制了LPS刺激小胶质细胞活化后炎症因子的产生,该作用可能与降低TLR4蛋白的升高有关。