采用HPLC-ELSD法分析小诺霉素及其有关物质

目的:建立小诺霉素及其有关物质的分析方法,为该类药提供质量控制标准。方法:应用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)分析了小诺霉素及其有关物质。采用的色谱条件如下:DiamonsiL C_(18)(150 mm×4.6mm,5μm)柱,流动相为0.2mol·L^(-1)三氟醋酸-甲醇(94:6),流速为0.6mL·min^(-1),漂移管温度为110℃,气体流速为2.80L·min^(-1)。结果:在选定的色谱条件下,小诺霉素和庆大霉素复合组分(包括小诺霉素产品中的主要杂质C_(1a))可达到很好的分离,小诺霉素与C_(1a)的非衍生化分离尚属首次。小诺霉素峰面积的对数与进样量的对数间呈较好的线性关系(r=0.9999),小诺霉素的平均回收率为101.3％(RSD=1.6％),最低检出量为100ng。结论:方法快速、简便,重现性好,可用于控制小诺霉素中的有关物质含量。

反相高效液相色谱法测定硫酸小诺霉素的含量

采用国产高效液相色谱仪测定硫酸小诺霉素含量,可在8分钟内完成色谱分析.本法以内标法定量,样品加邻苯二甲醛试液,发生胺缩醛反应,生成具有紫外吸收的衍生产物,用醋酸乙酯定量提取,进样10μl进行色谱分析。该法采用国产YWG-C_(18)H_(37)10μm键合相为填料的反相色谱柱,乙腈∶无水甲醇∶0.1％三羟基甲基氨基甲烷(1∶5∶1)混合溶媒作流动相;流速1.5ml/min,用紫外检测器254nm检测。在灵敏度0.05时,检测限为4μg/ml,在10～140μg/ml范围内呈线性,变异系数为1.65％,回收率为102.2±1.8％。本法操作简便、灵敏、测定结果准确。

小诺霉素单组份菌种选育及发酵条件研究

以棘孢小单孢菌Ａ－２３为出发菌株，用常规诱变育种为主，结合综合处理方法，如原生质体，紫外线照射，电融合再生，激光照射，在８－甲氧基补骨酯素存在下用近紫外光照射，氯化锂和紫外线复合处理等方法，以及自然分离纯化，经多代选育，得到高产菌株ＭＳ—１１６，其发酵后小诺霉素主组分含量为８５％以上；同时研究了最佳发酵条件和培养基配方，进行了３０ｔ发酵罐放大试验。

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌突变菌株原生质体形成、再生及融合的研究

甘氨酸（Ｇｌｙ）的加入将会影响棘孢小单孢突变型菌株孢子发芽和菌丝生长，其影响程度与甘氨酸浓度及菌丝培养基成份有关，在Ⅱ号培养基中，０．３％Ｇｌｙ对菌丝形态的改变十分明显，而０．５％Ｇｌｙ能抑制孢子发芽。消色肽酶（ａｃｈｒｏｍｏｐｅｐｉｔｉｄａｓｅ）与溶菌酶（ｌｙｓｏｚｙｍｅ）联合作用比单一溶菌酶制备的原生质体形成率和再生率有明显提高。再生培养基以原分离培养基补充０．２ｍｏｌ／Ｌ蔗糖为宜，其再生频率可达到１５％。采用ＰＥＧ４０００，４２％（ｗ／ｖ）为助融剂，直接法检出融合重组体，其重组频率可达０．５％～１．０％，重组体中大部分苗株的次级代谢特性与亲株有较大差异，在再生菌落筛选中获得一些优良菌株，其小诺霉素产率较原亲株有显著提高。

高效液相色谱法测定小诺霉素的血药浓度

用CLC-ODS.C18柱作高效液相色谱测定小诺霉素血药浓度并做兔静注后的药代动力学研究。这一方法检测限0.2ng,最小检测血药浓度达0.1μg/ml,线性范围1～20μg/ml。小诺霉素和内标氯氮平的保留时间分别为6.8min和8.3min。方法准确、灵敏、快速,适用于小诺霉素药代动力学研究和血药浓度监测。3只新西兰兔单次静注小诺霉素10mg后,药时曲线经计算机自动拟合,符合二室开放模型。主要药动学参数为t1/2α=0.536±0.01h,t1/2β=2.59±0.98h,Vc=0.204±0.051L/kg,CL=0.18±0.026L/kg。

利用抗自身代谢物特性进行小诺霉素高产菌种选育

经过紫外诱变处理小诺霉素产生菌,利用菌株抗自身代谢物特征,在添加3 000 u.mL-1小诺霉素的分离培养基上选育获得小诺霉素生产突变株201-9#-76,其摇瓶发酵单位比出发菌株提高了34.39%,小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1 a=5∶5提高到C2b∶C1 a=7∶3.

通过获得链霉素抗性基因突变株筛选小诺霉素高产菌株

通过链霉素对小诺霉素产生菌 (Micromonospora purpura) 49 1 2 #菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 3种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理 ,诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的改良高氏平板上 ,获得大量的链霉素抗性基因突变株 ,然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选小诺霉素高产菌株 ,获得小诺霉素菌株 49 1 2 3菌株。在摇瓶条件下 ,其产小诺霉素生物活性单位比出发菌株 49 1 2 #的摇瓶发酵单位提高了 40 %以上。小诺霉素的组分比由出发菌株的C2b∶C1a的 5∶5提高到 8∶2。C2b有效组分提高了 30 %;链霉素抗性基因突变与小诺霉素发酵单位突变之间 ,小诺霉素正突变率达到 40 %,负突变率达 2 6%。

HPLC-ESI-IT-MS^n法快速推定硫酸小诺霉素中有关物质的结构

目的:建立测定硫酸小诺霉素中有关物质的HPLC-ESI-IT-MSn方法,并对检出的有关物质结构进行鉴定。方法:用宽pH范围的Gemini NX C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱,以[水-氨水-冰醋酸(96∶3.6∶0.4)]-甲醇(80∶20)为流动相,分离样品,并用ESI-IT-MSn检测,质谱条件:ESI离子源,离子源温度350℃,雾化室压力40psi,干燥气流速10L·min-1,正离子检测方式;结构鉴定方法根据有无杂质对照品而异:有对照品的有关物质,采用比对有关物质与对照品的色谱保留时间、一级质谱、二级质谱的方法进行鉴定;对无对照品的有关物质,则采用被称为"诊断碎片离子推断策略"的结构推定方法,即通过解析庆大霉素C1a、小诺霉素、依替米星的二级质谱,对该类化合物的二级质谱裂解规律进行归纳,找出同类物质的特征碎片离子,用于推定检出的有关物质结构。结果:从硫酸小诺霉素原料中检出15个有关物质,对其中14个的结构进行了归属,结果显示,硫酸小诺霉素原料中有关物质分别为庆大霉素A、B、C组分及它们同分异构体或同系物、西索米星及其同系物、小诺霉素的部分降解产物及部分新化合物。结论:建立的HPLC-ESI-IT-MSn方法可用于硫酸小诺霉素中有关物质的结构快速推定,该法为小诺霉素的工艺优化和质量标准提高提供了快速、可靠的分析手段。

荧光分光光度法测定小诺霉素

小诺霉素具有微弱荧光，被高碘酸钠在沸水中氧化后水解形成醛基，可与乙酰丙酮及氨基在一定条件下生成一种具有强荧光的衍生物。此衍生物在常温下可稳定40min以上，其荧光强度较小诺霉素显著增强，且最大激发波长和发射波长分别红移33nm和68nm。在1．0×10^-8～1．0×10^-7mol／L浓度范围内，小诺霉素的荧光强度与其浓度呈良好的线性关系，相关系数r为0．9925。方法用于实际样品的测定，结果较为满意。

小诺霉素在小鼠的时辰毒性及时辰药代动力学

小鼠自实验前２Ｗｋ置于标准的明期和暗期下饲养，自由进食饮水。急性毒性昼夜节律实验剂量为小诺霉素７５０ｍｇ．ｋｇ－１，ｉｐ，于１ｄ中６个不同时间给药；选择９：００和２１：００做昼夜ＬＤ５０实验和昼夜药动学实验（剂量为１００ｍｇ．ｋｇ－１，ｉＰ）。结果：小诺霉素的急性毒性呈昼夜节律性变化，明期毒性大于暗期，９：００死亡率（０．７）最高，１７：００死亡率（０．２５）最低。９：００组和２１：００组ＬＤ５０±Ｌ９５分别为５６２．２±４８．４ｍｇ·ｋｇ－１和６７８．１±５３．８ｍｇ·ｋｇ－１。与２１：００组比较，９：００组在用药后０．５和１ｈ血药浓度较高，ＡＵＣ较大，提示小诺霉素毒性的昼夜节律性变化与其药动学昼夜节律变化有关。

血清、尿液中小诺霉素的单扫描示波极谱测定

研究了在硼砂－氢氧化钠介质（ｐＨ值为１２．０）中小诺霉素甲醛衍生物的极谱行为，并讨论了其电极过程。在最适条件下，小诺霉素浓度在２．０×１０－７～４．０×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１范围内与峰电流值呈线性关系，相关系数为０．９９９４。本法无需前处理即可用于血清、血浆、尿液、胃炎合剂、口腔溃疡液等实样中痕量小诺霉素测定。回收率均在９０～１１０％之间，相对标准偏差小于４．２％。

曲利本蓝光度法测定西索米星及小诺霉素的含量

建立了测定小诺霉素及西索米星的曲利本蓝分光光度法.在酸性介质中,曲利本蓝(TRB)与西索米星(SISO)、小诺霉素(MIC)反应生成蓝色离子缔合物.最大正吸收波长位于680(SISO)和682 nm(MIC),表观摩尔吸光系数(ε)为1.12×104(SISO)和7.10×103(MIC)L.mol-1.cm-1,线性范围为0.1-9.0(SI-SO)和0.2-8.4 mg/L(MIC);最大负吸收波长均位于588 nm,表观摩尔吸光系数(ε)为7.80×103(SISO)和1.40×104(MIC)L.mol-1.cm-1,线性范围为0.1-9.0(SISO)和0.1-9.3 mg/L(MIC);当用双波长叠加测定时,灵敏度会更高.探讨了适宜的反应条件、主要分析化学性质、络合比及应用.

浅谈小诺霉素

浅谈小诺霉素周茂金，梅任奎，苏美英（山东泰安市中心医院２７１０００）小诺霉素（ＭｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎＭＣＲ）是国际八十年代理想的第三代氨基甙类抗生素。经过近几年的临床初步应用，认为该药具有抗菌谱广、杀菌力强、耐药性小及安全性大等特点。１药动学ＭＣＲ...

几种酸性染料与小诺霉素的显色反应及应用

目的：建立测定小诺霉素（MIVC）含量的方法。方法：利用几种酸性染料与MINC的显色反应，建立分光光度法测定其含量。结果：在酸性条件下，刚果红（COR）、依文恩蓝（EVB）及滂胺天蓝（POB）与MINC反应生成红色或蓝色缔合物，最大显色波长为678nm（EVB）和692nm（POB），线性范围分别为0．2～8．4，0．2～7．5mg·L^-1，表观摩尔吸光系数分别为8．3×10^3，5．2×10^3L·mol^-1·cm^-1；最大褪色波长为502-620nm，线性范围分别为0．1～7．5，0．1～9．3，0．1～8．4mg·L^-1，表观摩尔吸光系数（ε）分别为2．34×10^4，4．05×10^4，2．06×10^4L·mol^-1·cm^-1；当EVB和PDB体系用双波长叠加测定时，ε值分别为4．90×10^4，2．56×10^4L·mol^-1·cm^-1。结论：CUR褪色法，EVB、PDB显色法和褪色法以及双波长叠加法均可用于市售药物中小诺霉素含量的测定。

小诺霉素临床研究进展

小诺霉素临床研究进展李晖，康秉学，贺浪冲，车锡平（审）（西安医科大学第一附属医院妇产科新生儿组７１００６１）小诺霉素（ｍｉｃｒｏｎｏｍｉｃｉｎ．ＭＣＲ）又称相模湾霉素（ｓａｇａｍｉｃｉｎ．ＳＧＭ）．其抗菌谱与庆大霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素等相似，其...

小诺霉素的临床应用

小诺霉素于1982年1月首次在日本上市。我国1987年经卫生部批准投入市场,定名小诺霉素(Micronomicin,MCR),MCR 用其硫酸盐,白色或类白色的疏松固体,对温度和酸碱度的变化都较稳定,其水溶液不需冷藏保存。

小诺霉素产生菌棘孢小单孢菌的原生质体诱变育种

通过对菌株产量分布参数的统计学分析，棘抱小单孢菌７４＃被选作原生质体诱变育种的出发菌株．获得小诺霉素含量为８０％的高产突变株的概率以紫外线对原生质体悬液３０秒诱变处理为最高（２２．８％），５株高产突变株的小诺霉素组份与效价平均分别比出发菌株提高３３．３％与５１．２％．初步探讨了甘氨酸对原生质体化的作用机理以及原生质体诱变与再生处理提高小诺霉素产生菌生产能力的机理．

小诺霉素治疗细菌性角膜溃疡疗效分析

目的：观察国产小诺霉素（ＭＮ）治疗细菌性角膜溃疡的效果。方法：用小诺霉素（５０００ｕ／ｍｌ）治疗细菌性角膜溃疡３２眼，对照组用庆大霉素（１万ｕ／ｍｌ）治疗２３眼，分别用相应滴眼剂点眼，每日６次，严重者以相应药物结膜下注射。结果：小诺霉素组３２眼中３１眼治愈，占９７％，治愈时间平均５．９ｄ；庆大霉素组２３眼中１８眼治愈，占７８．３％，平均１６ｄ治愈。庆大霉素组结膜下注射有明显局部疼痛，结膜充血，水肿，角膜溃疡延迟愈合等毒副反应，少数患者仅结膜下注射１～２次即出现听力障碍，立即停药可恢复，小诺霉素组未见明显不良反应。结论：小诺霉素治疗细菌性角膜溃疡较庆大霉素效果好，毒副作用小，可考虑为治疗细菌性眼病的首选药。

小诺霉素不良反应55例分析

目的:探讨小诺霉素发生不良反应的影响因素及预防措施。方法:检索1994年至2005年国内医药学期刊报道的小诺霉素不良反应病例并进行分析。结果:小诺霉素的不良反应主要为过敏性休克、神经肌肉阻滞及肾损害。结论:临床注重小诺霉素抗菌活性的同时应重视其不良反应。