海兰褐壳蛋鸡小黄卵泡颗粒细胞全长转录组测序分析

【目的】获取鸡小黄卵泡颗粒细胞(granulosa cells of small yellow follicle,SYFG)全长转录组数据,为深入挖掘鸡卵泡发育内在分子调控信息提供参考。【方法】采用PacBio高通量测序平台,对海兰褐壳蛋鸡SYFG进行测序、过滤、聚类和矫正原始数据,获取全长转录本序列。通过生物信息学软件对全长转录本数据进行功能注释、转录因子注释、编码区序列(coding sequence,CDS)预测、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)预测筛选、简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)检测及可变剪接(alternative splicing,AS)和选择性多聚腺苷酸化(alternative polyadenylation,APA)分析。【结果】通过测序共获得52311条海兰褐壳蛋鸡SYFG全长转录本,长度主要分布于1~3500 bp。通过与GO、KEGG、COG、NR、Swiss-Prot和Pfam数据库比对,对转录本序列进行注释,其中GO数据库注释了26525条转录本,KEGG数据库注释了25233条转录本,COG数据库注释了31303条转录本,NR数据库注释了34284条转录本,Swiss-Prot数据库注释了30701条转录本,Pfam数据库注释了24622条转录本。此外,经鉴定或预测,还获得了559个转录因子、40944个CDS、14699个lncRNAs、7种类型的SSR、28423个AS和2747个APA事件。【结论】本研究获得了鸡SYFG全长转录组测序数据,提升了转录本的数量和长度,完善了转录本的功能注释,分析了AS和APA事件的类型,揭示了转录本的复杂性,为进一步从转录组水平解析鸡卵泡发育的分子调节机制提供数据支持。

黄体生成素促进鸡小黄卵泡膜细胞增殖的作用机理

利用产蛋鸡小黄卵泡膜细胞培养模型研究黄体生成素（LH）对等级前发育的小黄卵泡膜细胞增殖的影响以及LH作用的信号转导途径。单层培养的外层膜细胞用LH（0.1～100μg/L）、蛋白激酶A（PKA）激活剂forskolin（FRSK,0.1～10μmol/L）及抑制剂H89（0.01～1μmol/L）或蛋白激酶C（PKC）激活剂佛波酯（PMA,0.1～10nmol/L）及抑制剂H7（0.01～1μmol/L）单独或共同处理,36 h后测定膜细胞增殖的变化。结果显示,LH和FRSK促进小黄卵泡膜细胞的增殖,且LH的促增殖作用可被H89阻断,而PMA无显著的促进作用,且H7不能阻断LH的促增殖作用。由此推断LH的促小黄卵泡外层膜细胞增殖作用主要是通过PKA途径进行的。

不同类型蛋鸡品种卵巢及卵泡发育变化规律分析

研究旨在分析地方特色蛋鸡与高产蛋鸡卵巢及卵泡发育规律,为地方鸡种质资源开发利用提供参考依据。以神丹6号绿壳蛋鸡和海兰褐蛋鸡为素材,分析13~60周龄卵巢及各级卵泡发育变化规律。13~28周龄每周、30~40周龄每两周、40~60周龄每4周每个鸡种随机选择12只左右母鸡进行屠宰,分别统计等级卵泡(直径>8mm)、小黄卵泡(直径4~8mm)和大白卵泡(直径2~4mm)的数量和重量,并将上述卵泡去除后对卵巢基部进行称重作为卵巢重。结果显示:两个鸡种在开产前卵巢和大白卵泡发育缓慢,而开产后迅速发育,神丹6号绿壳蛋鸡在16周龄时有小黄卵泡发育,海兰褐蛋鸡在17周龄时有小黄卵泡发育,整体上海兰褐蛋鸡卵巢发育的整齐度优于神丹6号绿壳蛋鸡。产蛋率50%至60周龄期间神丹6号绿壳蛋鸡和海兰褐蛋鸡卵巢重分别为4.33g和5.15g,小黄卵泡数分别为13.2个和15.2个,等级卵泡数分别4.9个和6.0个,上述指标神丹6号绿壳蛋鸡均显著低于海兰褐蛋鸡(P<0.05),而神丹6号绿壳蛋鸡大白卵泡数为19.9个,显著高于海兰褐蛋鸡的17.7个(P<0.05)。结果表明:卵巢重、小黄卵泡数和等级卵泡数在地方特色蛋鸡和高产蛋鸡产蛋期具有显著差异是导致产蛋性能差异的重要因素。

甜菜碱对产蛋后期蛋鸡生产性能、蛋品质和抗氧化能力的影响

旨在研究甜菜碱对产蛋后期蛋鸡生产性能及抗氧化功能的影响。选择108只500日龄的海兰褐壳蛋鸡,随机分为3组,每组3个重复,每个重复12只。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮的基础上分别添加1 000、3 000 mg·kg^(-1)甜菜碱,试验期42 d。试验结束时,采集鸡蛋、血清、卵巢和小黄卵泡颗粒细胞。结果发现:1)与对照组相比,日粮添加甜菜碱线性提高了产蛋后期蛋鸡的产蛋率和平均蛋重(PL<0.01),且线性提高了蛋白高度、蛋黄颜色、蛋黄重量(PL<0.05)。2)与对照组相比,日粮中添加甜菜碱,血清中Prog水平呈显著线性升高(PL<0.01),FSH和LH水平呈线性和二次升高(PL<0.01;PQ<0.05)。3)日粮中添加甜菜碱,线性提升了产蛋后期蛋鸡血清中SOD、GSH-Px活性和卵巢中T-AOC水平、SOD和CAT活性,线性降低了MDA水平(PL<0.05),同时线性和二次曲线提升了血清中T-AOC水平和CAT活性,降低了MDA含量(PL<0.01;PQ<0.01)。此外,日粮中添加甜菜碱线性提高颗粒细胞中SOD、HO-1基因表达量(PL<0.01),二次曲线提高了Nrf2基因的表达水平(PQ<0.01),线性和二次曲线提高了NQO1基因的表达水平(PL<0.01;PQ<0.01),且显著提升了CAT基因的表达水平(P<0.05)。综上,日粮中添加甜菜碱能够增加血清中的激素水平和血清、卵巢中抗氧化酶的活性,促进小黄卵泡颗粒细胞抗氧化相关基因的表达,提高其抗氧化能力,进而提高产蛋后期蛋鸡的生产性能,且高剂量的添加效果优于低剂量。