固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)对小鼠Ⅰ型葡萄糖载体(mGLUT1)的表达调节

目的探讨SREBP1c对mGLUT1表达的影响。方法采用分子克隆技术,将SREBP1c和mGLUT1cDNA分别克隆到表达载体pSVsport和pGL3b上。SREBP1c与mGLUT1克隆载体同时或单独转染NIH3T3细胞,然后应用荧光素酶活性测定法、RTPCR及Northernblot等方法测定SREBP1c对mGLUT1的启动子活性调节及mRNA表达的影响。结果实验结果表明,SREBP1c可激活mGLUT1启动子的活性,并且可增加内源性mGLUT1的mRNA表达水平。结论SREBP1c可增强mGLUT1的表达,可能介导胰岛素对mGLUT1的调节过程。

Troglitazone对小鼠Ⅱ型葡萄糖载体和Ⅰ型葡萄糖载体mRNA表达的影响

目的探讨Troglitazone对小鼠Ⅱ型葡萄糖载体(mGLUT2)和I型葡萄糖载体(mGLUT1)mRNA表达的影响。方法采用分子克隆技术,将过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)和维甲酸类受体X(RXRα)及mGLUT2和mGLUT1cDNA分别克隆到表达载体pCMX和pGL3b上。PPARγ与RXRα及mGLUT2与mGLUT1克隆载体转染NIH3T3细胞,处理或不处理Troglitazone,应用荧光素酶活性测定法及RNA印迹等方法测定Troglitazone对mGLUT2和mGLUT1重组体荧光素酶活性调节及对mRNA表达的影响。结果Troglitazone可激活mGLUT2和mGLUT1重组体荧光素酶的活性,并且可增加mR-NA的表达水平。结论Troglitazone可增强mGLUT2和mGLUT1的表达,可能参与PPARγ对mGLUT2和mGLUT1的调节过程。

Troglitazone对小鼠Ⅰ型葡萄糖载体表达的影响

目的:探讨Troglitazone对小鼠I型葡萄糖载体(mGLUT1)表达的影响。方法:采用分子克隆技术,将过氧化物酶体增殖物受体γ(PPARγ)和维甲酸类受体X(RXRα)及mGLUT1 cDNA分别克隆到表达载体pCMX和pGL3b上。PPARγ与RXRα及mGLUT1克隆载体转染NIH 3T3细胞,处理或不处理Troglitazone,应用荧光素酶活性测定法及RNA印迹等方法测定Troglitazone对mGLUT1重组体荧光素酶活性调节及对mRNA表达的影响。结果:Troglitazone可激活mGLUT1重组体荧光素酶的活性,并且可增加mGLUT1的mRNA表达水平。结论:Troglitazone可增强mGLUT1的表达,可能参与PPARγ对mGLUT1的调节过程。

小鼠BMPRⅠb基因慢病毒载体构建及转染神经干细胞

目的:构建携带小鼠BMPRⅠb基因的慢病毒载体,并转染神经干细胞,为研究BM-PRⅠb在BMPs调控神经干细胞分化中作用奠定基础。方法:利用RT-PCR从小鼠脑组织中获得BMPRⅠb基因,然后定向插入慢病毒表达质粒,进行双酶切及测序鉴定。将鉴定成功的重组慢病毒质粒和另外两种辅助质粒共转染包装细胞,收集、浓缩慢病毒并检测其滴度。利用获得的慢病毒载体转染NSCs,并观察目的基因表达情况。结果:RT-PCR产物经电泳及测序证实克隆成功BM-PRⅠb基因,酶切及测序鉴定成功构建重组慢病毒质粒,共转染293T细胞72h后大部分细胞表达绿色荧光,病毒滴度为5×108 TU/ml。慢病毒感染后的NSCs表达绿色荧光且BMPRⅠb mRNA表达上升。结论:成功构建BMPRⅠb基因慢病毒载体,并成功转染NSCs。