不同接种量荧光素酶标记小鼠乳腺癌细胞4T1在小鼠体内生长及肺转移的比较

目的采用活体成像技术比较四种剂量荧光素酶标记肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况,为光学标记肿瘤模型的药物筛选或机制研究提供参考资料。方法以荧光素酶作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107细胞/mL,2×107细胞/mL,5×107细胞/mL和1×108细胞/mL四种剂量,取0.1 mL接种于BALB/c小鼠右侧第二对乳腺脂肪垫内,制作小鼠原位乳腺癌模型,比较肿瘤细胞在小鼠体内生长及肺转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,在致瘤性方面和亲代细胞无明显差别,四种剂量细胞接种BALB/c小鼠后,均有肿瘤生长,接种第28天时,四种剂量接种的原位移植瘤大小没有明显差别,但接种两个高剂量肿瘤细胞的小鼠组各有2只小鼠死亡;接种后31 d,发现四种剂量接种的原位移植瘤均发生不同程度的转移,随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,接种后42 d,小鼠陆续发生死亡。结论根据转移和死亡情况,确定接种1×106个细胞/只不仅肺转移明显,而且存活时间一般超过45 d,比高剂量接种存活时间长,为最佳肺转移剂量。

小鼠乳腺癌细胞4T1对不同品系小鼠乳腺癌模型的影响

目的:将小鼠乳腺癌细胞4T1接种到两种不同品系的小鼠脂肪垫,观察植瘤小鼠的生物学状态、成瘤大小、转移情况以及生存周期等指标,为建立不同品系小鼠的乳腺癌模型提供参考。方法:将小鼠乳腺癌细胞4T1胰酶消化去除上清,用PBS洗两遍,最后用生理盐水调整细胞数量为1×10~6个,分别接种到裸鼠和BABL/c小鼠的脂肪垫。比较各组老鼠的成瘤率、成瘤时间以及生存期等实验指标。结果:原位注射1×10~6个4T1细胞时两组均能成瘤,但是裸鼠的成瘤率高于BABL/c小鼠;裸鼠的成瘤大小明显大于BABL/c小鼠;裸鼠的生存期明显短于BABL/c小鼠;裸鼠出现肺转移结节明显多于BABL/c小鼠。结论:不同免疫能力的小鼠对接种相同数量的细胞数可能会产生不同的实验结果,在选择构建小鼠乳腺癌模型的时候一定要综合考虑所选用品系的小鼠是否会对实验结果带来影响。

水疱性口炎病毒对小鼠乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、移植瘤生长与肺转移的影响

目的:探究野生型水疱性口炎病毒印第安纳株(VSV-IN)对小鼠三阴性乳腺癌4T1细胞移植模型小鼠的免疫调节及肿瘤转移的影响。方法:VSV以MOI=1、MOI=10、MOI=100感染4T1细胞12、24、48 h后,CCK-8法检测4T1细胞死亡率,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qPCR检测细胞中E-cadherin、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达。于雌性BALB/c小鼠脂肪垫接种1×10^(6)个/mL的4T1细胞0.1 mL,构建4T1细胞荷瘤小鼠模型,待小鼠肿瘤体积达200 mm3,分别向移植瘤内注射PBS、紫杉醇(TAX)(15 mg/kg)、VSV-IN(1×10^(6)pfu/只),每周1次。给药4次后,处死小鼠、剥离完整移植瘤组织,测量肿瘤体积及质量,肺组织病理切片经H-E染色后观察肿瘤肺部转移结节,流式细胞术检测脾组织中T细胞亚群比例,ELISA法检测小鼠血清IL-6及TNF-α水平,利用GEPIA在线分析乳腺肿中迁移相关蛋白mRNA的表达,免疫组化法检测肿瘤中MMP-2、MMP-9与E-cadherin的表达,利用蛋白-蛋白对接技术预测VSV-IN的G蛋白、M蛋白与ERK2、E-cadherin的亲和力。结果:经MOI=10、100的VSV-IN处理48 h后,4T1细胞死亡率显著高于对照组(均P<0.01);与对照组相比,VSV-IN组(MOI=10)细胞迁移率明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA的相对表达量明显降低(P<0.05);与对照组小鼠相比,VSV-IN组移植瘤生长较对照组减缓且终点体积显著减小(P<0.05),VSV-IN组小鼠肺转移结节数量显著减少[(12.86±1.86)vs(24±3.67)个,P<0.01],脾内CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例显著升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6含量显著升高(均P<0.01);GEPIA分析发现在乳腺癌中E-cadherin、MMP-9表达水平均高于癌旁组织(P<0.05);VSV-IN组小鼠肿瘤细胞内MMP-9表达明显低于对照组(P<0.05);VSV-IN的G、M蛋白与ERK2的结合自由能分别为–11.7 kcal/mol、–6.4 kcal/mol。结论:野生型VSV-IN可抑制4T1细胞荷瘤小鼠的移植瘤生长及转移,这可能与其促进抗肿瘤免疫及调控迁移相关蛋白表达有关。

白藜芦醇通过下调LRP5/6表达抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖

目的通过体外实验研究白藜芦醇(RES)抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的作用机制。方法将处于对数生长期小鼠乳腺癌4T1细胞消化后接种于3.5 cm细胞皿中,分别加入0、2.5、5、10、20μmol/L的RES干预72 h,使用倒置显微镜拍照观察法和台盼蓝计数法检测RES干预后细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测低密度脂蛋白相关受体结合蛋白5(LRP5)、低密度脂蛋白相关受体结合蛋白6(LRP6)蛋白表达量。再将细胞分为对照组、RES组,分别加入0μmol/L和前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预72 h,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)核蛋白表达量。接着将细胞分为siCtr组、siLRP5组、siLRP6组、siβ-catenin组,siCtr组给予正常培养,siLRP5组加入LRP5小干扰RNA(siRNA)沉默LRP5基因,siLRP6组加入LRP6 siRNA沉默LRP6基因,siβ-catenin组加入β-catenin siRNA沉默β-catenin基因,使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述4组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。最后将细胞分为Vector组、Vector+RES组、LRP5组、LRP5+RES组、LRP6组、LRP6+RES组、N端缺失的β-catenin突变体组(β-cateninΔN组)、β-cateninΔN+RES组,Vector组给予正常培养,Vector+RES组加入前述所筛选的最佳干预浓度的RES干预,LRP5组加入过表达LRP5质粒,LRP5+RES组加入过表达LRP5质粒联合RES最佳干预浓度,LRP6组加入过表达LRP6质粒,LRP6+RES组加入过表达LRP6质粒联合RES最佳干预浓度干预,β-cateninΔN组加入过表达β-cateninΔN质粒,β-cateninΔN+RES组加入过表达β-cateninΔN质粒联合10μmol/L的RES干预。使用倒置显微镜拍照和台盼蓝计数检测上述8组细胞密度和活细胞浓度;Western blot检测LRP5、LRP6和β-catenin蛋白表达量。结果与0μmol/L RES组比较,10、20μmol/L RES组细胞密度和活细胞浓度均降低(P<0.05),对LRP5、LRP6蛋白表达下调显著(P<0.05),故后续选用10μmol/L浓度的RES进行干预。与对照组比较,RES组β-catenin核蛋白表达量下调(P<0.05);与siCtr组比较,siLRP5组、siLRP6组和siβ-catenin组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector组比较,Vector+RES组细胞密度和活细胞浓度降低(P<0.05);与Vector+RES组比较,LRP5+RES组、LRP6+RES组和β-cateninΔN+RES组细胞密度和活细胞浓度升高(P<0.05)。结论白藜芦醇可阻止小鼠乳腺癌4T1细胞增殖,其机制与通过下调LRP5、LRP6表达抑制Wnt/β-catenin信号通路激活有关。

BALB/c小鼠乳腺癌4T1细胞株移植模型的建立

目的:应用来源于BALB/c小鼠的4T1乳腺癌细胞株建立BALB/c小鼠乳腺癌模型,选择最佳的模型制作方法。方法:90只BALB/c小鼠随机分为3组,每组30只,分别接种1×106ml-1、1×107ml-1、1×108ml-14T1乳腺癌细胞株细胞悬液。每组小鼠再随机分两组分别接种于胸壁和侧腹壁。比较各组的成瘤时间、成瘤率和8周存活率,并用C-erbB-2免疫组化法检查肿瘤病理状态。结果:细胞浓度为1×107ml-1时,肿瘤成瘤率高,生长稳定;4T1细胞不同部位接种不影响成瘤率及生长;C-erbB-2免疫组织化学检查均为阳性。结论:应用1×107ml-1浓度的4T1细胞进行接种是最佳的模型制作方法。

5-FU对小鼠乳腺癌4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞的富集作用

目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础。方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小鼠后取肿瘤组织制成细胞悬液,并接种小鼠制备下一代小鼠荷瘤模型,5-FU处理及再次传代方法同上,共传4代。对照组小鼠给予生理盐水注射,其余处理同模型组。流式细胞术检测各代肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例,Hoe-chast 33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫组化法检测CD55和ALDH1蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成,小鼠致瘤实验检测不同肿瘤细胞的致瘤能力。结果:各代对照组小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例为(11.5±0.9)%,SP细胞比例为(9.7±1.3)%,ALDH1表达阴性,CD55强阳性表达细胞数为(0.6±0.3)%,乳腺癌细胞微球体比例为(0.5±0.2)%;5-FU处理组4代小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例分别为(49.8±1.2)%、(56.8%±1.7)%、(66.4±1.5)%、(69.0±1.6)%,SP细胞比例分别为(25.0±1.2)%、(42.6±2.8)%、(58.4±2.1)%、(61.3±2.6)%,ALDH1阳性表达细胞比例为(3.8±0.7)%、(14.1±2.4)%、(25.2±3.1)%、(27.5±2.7)%,CD55强阳性细胞比例为(7.8±1.6)%、(10.1±2.0)%、(15.6±1.4)%、(17.3±1.9)%,乳腺癌细胞微球体形成比例为(5.9±0.4)%;两组各相应指标之间差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。5-FU作用后富集了肿瘤干细胞的第3代肿瘤细胞的致瘤作用显著强于对照组细胞(P<0.05)。结论:5-FU作用并通过荷瘤小鼠体内传代能够富集小鼠乳腺癌4T1细胞株中的肿瘤干细胞样细胞。

小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定

目的：无血清培养基（serum-free medium,SFM）悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基（serum-supplemented medium,SSM）,观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44^＋CD24^-/low和Hoechst33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例,小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果：4T1细胞在SFM中能够存活、增殖,并形成细胞球,细胞球可连续传代,若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44^＋CD24^-/low细胞比例为6.4%68.9%,侧群（side population,SP）细胞比例为7.3%61.2%,均显著高于SSM中培养的4T1细胞（P〈0.05）;随着SFM中细胞球传代次数增加,CD44^＋CD24^-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示,富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论：乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球,4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。

山慈菇提取液对小鼠4T1乳腺癌细胞抑制作用机制的研究

探索山慈菇提取液对小鼠4T1细胞抑制作用机制。采用水煎法制备山慈菇提取液,MTT比色法检测小鼠4T1细胞的增殖活性,Annexin V/PI双染流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡。结果表明,山慈菇提取液对4T1细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.05),并呈剂量依赖关系。山慈菇提取液诱导小鼠4T1细胞凋亡效果明显,并有剂量依赖性。山慈菇提取液对小鼠乳腺癌细胞有明显的增殖抑制和诱导其细胞凋亡的作用。

苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

目的研究苦豆子总生物碱对小鼠乳腺癌4T1细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用。方法苦豆子总生物碱提取并纯化,处理成澄清的药物溶液后用于细胞给药。CCK-8法测定不同浓度的苦豆子总生物碱作用24h后4T1细胞存活率。流式细胞术检测给药24h后4T1细胞凋亡率。结果与对照组比较,实验组药物浓度为5.00mg/mL时,4T1细胞存活率为63.05%;药物浓度为10.00mg/mL时,4T1细胞存活率为20.30%,随着给药浓度的增加,细胞存活率呈明显下降趋势。实验组药物浓度为6.25mg/mL时,细胞凋亡率为11.4%;药物浓度为10.00mg/mL时,细胞凋亡率为41.7%,随着给药浓度的增加,细胞凋亡率明显增加。结论苦豆子总生物碱能诱导细胞凋亡,对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖有明显抑制作用。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。

Reversine对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和凋亡的调控及相关作用机制的研究

目的研究reversine对小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖和凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞株,分别用不同浓度的reversine干预4T1细胞24、48 h,应用CCK-8法检测reversine对4T1细胞株的增殖抑制情况,计算半数抑制浓度IC50值;流式细胞术检测reversine对4T1细胞凋亡情况的影响;Western blot法检测细胞中Caspase-3、bax、bcl-2、TGF-β1、TIMP1和MMP9蛋白的表达情况。结果 CCK-8结果显示reversine可以抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖,并呈现时间剂量依赖关系。流式细胞检测结果显示低浓度组(10μg/m L)、中浓度组(25μg/m L)和高浓度组(50μg/m L)的细胞总凋亡率分别为(4.65±1.04)%,(11.68±0.69)%和(15.11±2.09)%;Western blot结果显示,应用reversine干预后,4T1细胞活化的Caspase-3表达增加(P<0.001),bax与bcl-2蛋白表达下降(P<0.001),bax/bcl-2比值增大(P<0.001),TGF-β1表达无差异(P>0.05),TIMP1、MMP9和Aurora B蛋白表达下调(P<0.01)。结论 Re-versine可以抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖,诱导细胞凋亡,reversine可以通过TIMP1/MMP9通路抑制4T1细胞的增殖。

二甲双胍联合compound C对小鼠4T1乳腺癌细胞增殖和细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨二甲双胍及单磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制剂（compound C）对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖及细胞周期蛋白D1（cyclin D1）表达的影响。方法 选取小鼠乳腺癌4T1细胞体外培养,分别以完全培养基为空白组,4T1细胞为对照组,在细胞培养中分别加入浓度为2.5、5、10、20、40 mmol/L的二甲双胍为实验组1-5,以10 mmol/L的二甲双胍联合20μmol/Lcompound C的为实验组6,20μmol/L compound C的为实验组7。检测各组细胞株增殖情况及细胞内cyclin D1的表达。结果 二甲双胍作用24、48 h时,实验组1与对照组存活率无显著差异（P〉0.05）,实验组2-5细胞存活率显著低于对照组（P〈0.05）;72 h时,实验组1-5存活率均显著低于对照组（P〈0.05）;实验组3、4、5在24、48、72 h时,各组cyclin D1的相对表达量均显著低于对照组（P〈0.05）;各组48 h时cyclin D1的相对表达量显著低于24 h时（P〈0.05）;72 h时cyclin D1的相对表达量显著低于各组48 h时（P〈0.05）;实验组3 cyclin D1的相对表达量显著低于对照组（P〈0.05）,实验组6、7在各时间点与对照组比较无显著差异（P〉0.05）。结论 二甲双胍能抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖,而compound C对其有拮抗作用;二甲双胍对小鼠乳腺癌4T1细胞cyclin D1蛋白表达有下调作用。

银杏多糖对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖及GLUT家族基因表达的影响

目的探讨银杏多糖对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法用不同浓度的银杏多糖处理对数生长期的小鼠乳腺癌4T1细胞,分别用MTT法和台盼蓝拒染法检测银杏多糖对4T1细胞增殖的抑制和细胞毒性作用;用DAPI核染色检测银杏多糖对4T1细胞凋亡的影响;qRT-PCR检测银杏多糖对4T1细胞葡萄糖转运蛋白家族基因表达的影响。结果银杏叶和银杏外种皮多糖呈剂量时间依赖性抑制4T1细胞增殖,并且随着银杏多糖剂量的增加,细胞活力明显下降、毒性明显增强,细胞凋亡增加。qRTPCR结果显示,银杏多糖可以明显降低葡萄糖转运蛋白1的基因表达。结论银杏多糖可抑制4T1细胞的增殖和诱导细胞凋亡,并通过调节葡萄糖转运蛋白家族基因表达,干预癌细胞的能量代谢,提示银杏多糖对4T1细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用可能通过干预葡萄糖转运蛋白基因的表达实现的。

萝卜硫素对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化、增殖和迁移的影响研究

背景与目的:组蛋白去乙酰化酶5(histone deacetylase 5,HDAC5)在乳腺癌组织中异常高表达,其与赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine specific demethylase,LSD1)协同促进乳腺癌细胞增殖和迁移。通过萝卜硫素(sulforaphane,SFN)下调HDAC5表达,观察其对小鼠乳腺癌4T1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、增殖和迁移的影响。方法:采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法分析SFN对4T1细胞增殖的影响。采用乳酸脱氢酶释放实验检测SFN的细胞毒性。采用pcDNA3.1(+)-FLAG-HDAC5质粒转染4T1细胞,通过G418筛选获得单个细胞克隆,再以蛋白质印迹法(Western blot)鉴定HDAC5蛋白稳定高表达的单克隆细胞系。采用划痕实验和transwell法分析过表达HDAC5以及SFN处理对4T1细胞迁移和侵袭的影响。采用Westernblot检测SFN处理对4T1细胞EMT标志物上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)、神经钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响。以4T1细胞的BALB/c小鼠移植瘤为模型,观察SFN对4T1细胞体内成瘤性、转移的影响及其与HDAC5表达的关系。采用免疫组织化学法检测小鼠原位肿瘤及肺转移瘤组织中Ki-67增殖指数。取荷瘤小鼠心、肝、肾组织,采用H-E染色检测SFN对荷瘤小鼠的毒性作用。结果:SFN能够抑制4T1细胞增殖(P<0.01),并抑制4T1细胞体外迁移和侵袭,而外源性过表达HDAC5可部分拮抗SFN对4T1细胞迁移和侵袭的抑制作用。SFN处理显著下调4T1细胞中HDAC5、MMP-9、N-cadherin和vimentin的表达,同时上调E-cadherin的表达。结论:SFN处理显著抑制4T1细胞在小鼠体内的成瘤性和肺转移,下调小鼠原位肿瘤和肺转移瘤组织中的Ki-67阳性率。过表达HDAC5可拮抗SFN对4T1细胞体内成瘤性和肺转移的抑制作用。SFN的抗乳腺癌作用与其诱导的HDAC5表达下调以及由此介导的EMT抑制作用密切相关。

膈俞穴注射4T1细胞构建小鼠乳腺癌模型的实验研究

目的：探讨膈俞穴注射乳腺癌4T1细胞构建小鼠乳腺癌模型的可行性。方法：清洁级4~6周龄雌性BALB/c小鼠16只,随机分为膈俞穴组和右肩胛组各8只,膈俞穴组将小鼠乳腺癌4T1细胞悬液接种于BALB/c小鼠左侧膈俞穴,右肩胛组接种于右侧肩胛部作为对照,观察两组小鼠成模时间、成瘤率、小鼠的远期存活率以及肿瘤生长曲线。结果：膈俞穴组小鼠的成瘤时间快于右肩胛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;肿瘤生长曲线显示膈俞穴组肿瘤生长速度明显高于右肩胛组,且后期两组之间的差距越来越明显（P〈0.05）,但两组成瘤率及远期存活率均无差异。结论：膈俞穴注射乳腺癌4T1细胞可成功复制小鼠乳腺癌模型,且成模时间短。

颗粒蛋白前体(PGRN)促进小鼠乳腺癌4T1细胞上皮间质转化与侵袭和迁移

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对小鼠乳腺癌4T1细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用1μg/mL PGRN处理乳腺癌4T1细胞24 h,通过Transwell^(TM)侵袭实验检测4T1细胞的侵袭能力、划痕实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR检测4T1细胞上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的mRNA水平,Western blot法检测4T1细胞E-cadherin、vimentin、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平。采用1μg/mL PGRN与ERK1/2信号通路抑制剂U0126(10μmol/L)同时处理4T1细胞后,前述方法检测4T1细胞侵袭及迁移能力及E-cadherin、vimentin与p-ERK蛋白表达的变化。结果乳腺癌4T1细胞经PGRN处理后,其侵袭及迁移能力明显增强;E-cadherin表达下降,vimentin表达升高,p-ERK1/2的表达增强;抑制ERK1/2信号通路后,PGRN促进乳腺癌4T1细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的能力被明显抑制。结论PGRN可通过促进EMT及激活ERK1/2通路促进乳腺癌4T1细胞的侵袭及迁移。

优降宁与多柔比星协同抑制小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞的增殖和迁移

目的研究赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine-specifc demethylase 1,LSD1)抑制剂优降宁(Pargyline)与化疗药物多柔比星(Doxorubicin)联合应用对小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外实验以小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞为模型,以CCK-8法、乳酸脱氢酶释放实验、Chou-Talay法、划痕实验、Transwell实验、Western blot等试验方法检测两药联合对4T-1细胞增殖、侵袭、迁移的影响;构建荷瘤小鼠模型研究两药联用对4T-1细胞体内增殖的影响。结果优降宁和多柔比星可有效抑制4T-1细胞增殖、迁移和侵袭,两药联用具有协同效应,且无明显细胞毒性。体内实验证明,与单用药组相比,两药联用可明显抑制乳腺癌的体内增殖并延长三阴性乳腺癌4T-1细胞荷瘤小鼠的生存期。结论优降宁与多柔比星联合应用对小鼠乳腺癌4T-1细胞的增殖、迁移和侵袭具有协同抑制效应,具有用于临床三阴性乳腺癌治疗的潜在价值。

Decorin提升小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性

目的评价高表达核心蛋白聚糖(Decorin)的小鼠乳腺癌细胞系4T1对正常小鼠脾细胞的免疫激活效应,明确Decorin对抗肿瘤免疫的调节作用。方法采用携带Decorin基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad.DCN感染小鼠乳腺癌细胞系4T1。与小鼠脾细胞共培养3 d后,通过流式细胞术检测小鼠脾细胞的CD4+T细胞、CD8+T细胞、T记忆细胞(Tm)和T调节细胞(Treg)的百分比;利用实时定量PCR(qPCR)技术检测Th1类细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的表达,Th2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的表达,以及与杀伤相关基因穿孔素与颗粒酶B的表达。结果与小鼠乳腺癌细胞系4T1共培养后,小鼠脾细胞CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、Treg细胞比例无明显改变,但Tm细胞比例显著升高;同时,细胞因子、穿孔素和颗粒酶B表达下调。但是,病毒感染的4T1细胞,特别是Ad.DCN感染的4T1细胞可显著抑制Treg细胞,并部分逆转细胞因子表达的下调。结论Decorin高表达可增强正常小鼠脾脏细胞对乳腺癌细胞系4T1的免疫响应性,从而激活抗肿瘤免疫反应。

薯蓣丸对化疗4T1乳腺癌小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的评价薯蓣丸对化疗后4T1乳腺癌小鼠免疫功能的影响,并探讨其作用机制。方法随机将32只BALB/c小鼠分为对照组、模型组、化疗组、中药组,每组8只。除对照组外,其余组注射4T1细胞悬液复制荷瘤模型。成瘤后第1天化疗组、中药组小鼠予以多西他赛治疗,1次/7 d,共21 d;注射多西他赛后第2天对中药组小鼠行中药灌胃,1次/d,共21 d。治疗完成后处死小鼠取脾脏研磨,用流式细胞仪检测小鼠脾脏中CD4^+、CD8^+、CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)表达水平。结果与模型组比较,化疗组、中药组CD4^+、CD8^+、CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞表达水平降低,CD4^+/CD8^+比值升高(P<0.05);与化疗组比较,中药组CD4^+细胞表达水平、CD4^+/CD8^+比值升高,CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞表达水平降低(P<0.05)。结论薯蓣丸能改善化疗后乳腺癌小鼠免疫功能。

贝母素甲、贝母素乙对4T1乳腺癌细胞炎性微环境的干预调节作用

目的:研究贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞的干预抑制及对其肿瘤炎性微环境的调节作用。方法:CCK-8检测贝母素甲、乙对4T1细胞抑制率;ELISA法检测炎性相关因子TGF-β、VEGF、MMP-9、MCP-1的分泌量;RT-PCR检测TGF-β、VEGF、MMP-9mRNA表达情况。结果:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有抑制作用;贝母素甲、乙可分别下调4T1细胞TGF-β,VEGF、MCP-1及MMP-9分泌量(P<0.05,P<0.01);贝母素甲、乙可降低4T1细胞TGF-β、VEGF等mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论:贝母素甲、乙对4T1乳腺癌细胞具有显著抑制作用,可通过抑制炎性相关因子的释放调节微环境。