一种利用B淋巴细胞建立的小鼠体细胞基因治疗模型

将外源基因转染宿原代B淋巴细胞，可以对诸如腺苷脱氨酶(ADA)缺乏症等疫病产生直接的疗效．也因为基因转染的B淋巴细胞可以释放某些产物至血液中而对某些遗传病如血友病等产生一定的疗效。并且由于B淋巴细胞具有抗原性提呈能力，外源基因的转染可以增强机体对某些肿瘤及病毒的免疫反应。由于目前大多数将外源基因转染淋巴细胞的方法依赖于将这些细胞的体外扩增及药物筛选，

应用体细胞基因转移技术建立的遗传性极度高血脂小鼠模型

目的 利用体细胞脂蛋白脂酶 (lipoproteinlipase ,LPL)有益变异体基因转移方法 ,救治原本在出生后两天内全部死亡的LPL基因敲除纯合子小鼠。方法 以腺病毒为载体 ,在初生小鼠肌肉内表达LPL基因有益突变体 ,观察救治存活后成年动物的表型变化。结果 本法救治纯合子小鼠的成功率达到 75 % ,大大高于以野生型LPL基因救治的国外研究。存活的成年纯合子小鼠表现为极度高脂血症。结论 利用LPL基因突变体进行体细胞基因转移可成功救治LPL基因敲除纯合子小鼠 ,并建立了极度高脂血症动物模型。

在SCTD—hu小鼠体内模仿人淋巴前体细胞基因治疗

由于伦理和实际操作等原因，许多应用造血干细胞作为靶细胞的基因治疗不能直接在人体内进行实验。建立一种体内系统，使转染基因的人造血干细胞能重建T系淋巴细胞功能对于包括AIDS在内的T淋巴细胞疾病的基因治疗具有重要意义。SCID-hu小鼠是将人类胎儿胸腺和肝移植入严重联合免疫缺路(SCID)小鼠体内，形成接合的胸腺／肝。

表达HBx的肝前体细胞的小鼠肝内移植模型的构建

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GFP转染小鼠肝前体细胞,再经小鼠门静脉注射后3、7、14 d取血清和肝组织,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化情况,观察绿色荧光蛋白表达情况,免疫组织化学法观察HBx阳性染色,并取表达高峰在第7天的肝组织,进行Western blot法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测HBx的蛋白及mRNA表达。结果成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。结论成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,操作可靠,重复性好,效果稳定,不仅对探讨原发性肝癌的发生机制奠定了基础,也为肿瘤动物模型的构建提供了新的思路。

MB49小鼠膀胱癌模型和腺病毒基因治疗

膀胱癌是最有希望进行免疫和基因治疗的疾病。瑞典Uppsala大学的LoskogA等人在英国LabAnim杂志上发表了C57BL／6小鼠MB49小鼠膀胱癌新模型，该模型通过皮下接种方式获得，具有转移性。作者用腺病毒载体携带不同的转导增强子来增强体内基因转录强度，并最终筛选出肿瘤检测和治疗或靶向定位的候选基因。MB49肿瘤在小鼠中生长很快。这个皮下接种的模型可以在一周内检测到肿瘤，并且可以监测每天的生长速度。MB49细胞通过尾静脉注射后，在16天内转移到肺部。注入膀胱后，MB49细胞可以存活20-40天。腺病毒载体可以用作基因转移的工具。到目前为止，作用最强的转移增强子是Clorpactin，也叫oxvchlorosene。MB49细胞还能表达肿瘤相关抗原如膀胱癌-4、前列腺干细胞抗原和前列腺的6-跨膜上皮细胞抗原。如果对膀胱的基因修饰和已知肿瘤抗原可以用于肿瘤治疗的话，MB49模型就可以用作对肿瘤进行免疫基因治疗的一个新途径。

基因治疗长期改善DMD模型小鼠的肌力

一项新的研究结果显示,给肌萎缩的模型小鼠体内注射携带某蛋白基因的病毒载体,能使肌萎缩模型小鼠的肌块以及肌力得到长期改善. ……

基因治疗可以恢复全色盲小急鼠模型的锥体视觉

佛罗里达大学医学院的William W．Hauswirth博士及其同事于5月21目的《自然医学》（Nature Medicine，2007．）杂志上报道，基因治疗可恢复全色盲小鼠模型的锥体视觉。

人干细胞“年轻化”蛋白被发现骨关节炎或可用基因治疗

我国研究人员首次鉴定出人间充质干细胞“年轻化”蛋白CBX4,该蛋白具有稳定人干细胞核仁异染色质结构、维持细胞年轻化的作用。更为重要的是,在小鼠模型中,基于该蛋白过表达的基因治疗可显著缓解骨关节炎的病理表型。骨关节炎是退行性骨关节病,与机体衰老密切相关。我国40岁以上群体骨关节炎患病率近50%,目前尚无安全有效的治疗方法。间充质干细胞的衰老和耗竭被认为是骨关节炎的主要诱因之一,揭示干细胞衰老的分子机制将为有效干预骨关节炎提供线索和靶标。这项研究发现,CBX4是维持人间充质干细胞年轻态的重要分子开关。在组织水平,向骨关节炎小鼠的关节腔中注射CBX4过表达慢病毒能降低衰老细胞比例、抑制炎症反应、刺激软骨再生,从而有效缓解骨关节炎的病理过程。该研究在老年医学和再生医学中具有重要应用前景。

NIH关于基因治疗研究现状的分析

今年二月,作者赴美,专访Maryland州Bethes-da城美国国家健康研究院(NIH)。NIH资助的科学研究多为细胞分子生物医学。自1951年建院以来,经NIH资助而获诺贝尔奖的院内外学者达103人。近年。

IL-21基因治疗小鼠H22细胞皮下移植肝癌模型的效果评价

用已构建的mIL-21/pcDNA3.1重组质粒对H22细胞建立的小鼠肝癌模型进行基因治疗,观察IL-21对小鼠体内抗肿瘤免疫应答的影响及对小鼠生存的影响。采用BALB/c小鼠左腋皮下注射腹水型肝癌细胞株H22细胞建立小鼠移植肝癌模型,给荷瘤小鼠瘤体内注射mIL-21/pcDNA3.1进行基因治疗,MTT比色法检测IL-21对荷瘤小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性的影响,观察治疗后荷瘤小鼠生存情况及肿瘤生长情况的改变。病理检测结果显示,成功建立了小鼠移植型肝癌模型,MTT比色法显示基因治疗后小鼠T细胞增殖水平及NK细胞杀伤活性显著升高,荷瘤小鼠肿瘤生长速度减慢,生存期显著延长。IL-21基因治疗肝癌荷瘤小鼠可显著提高荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫应答水平,抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠生存期。

表达白细胞介素-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用

目的:探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法:构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12,ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达,淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性;分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒DNA,观察各组小鼠存活时间、肿瘤体积变化及各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性。注射质粒DNA后1月进行瘤体组织病理学观察。结果:mIL-12基因治疗组与空载体对照组相比,肿瘤生长显著受抑制(F=4.10,P=0.03),小鼠存活期显著延长(X2=4.48,P=0.03),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。质粒DNA瘤内注射1月后,pDC511mIL-12组肿瘤病灶炎性细胞浸润明显,病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论:瘤内注射mIL-12表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤生长,能提高机体抗肿瘤免疫应答。

Vasostatin基因重组腺病毒载体的构建及其对胰腺癌生长的抑制作用

目的 以复制缺陷型腺病毒为载体 ,构建vasostatin基因重组腺病毒 ,并观察其对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 以人肌肉cDNA文库为模板应用PCR的方法扩增出vasostatin的DNA片断 ,定向插入腺病毒穿梭质粒 pshuttle CMV经酶切、测序鉴定正确后 ,电穿孔法将重组穿梭质粒转化E .coliBJ5 183 AdEasy 1感受态细菌 ,行细菌内同源重组。将抗性筛选和酶切鉴定正确的重组质粒 pAd CMV vasostatin转染 2 93细胞进行包装。病毒扩增纯化后 ,病毒感染人胰腺癌细胞 ,RT PCR和Western印迹法检测vasostatin的表达状况。复制人胰腺癌裸鼠移植瘤模型 ,瘤内注射 10 7pfupAd CMV vasostatin、10 8pfupAd CMV LacZ及PBS ,观察移植瘤的生长曲线及瘤重。 结果 PCR产物电泳后可见长度为 5 6 0bp左右的目的条带 ;酶切及测序鉴定表明穿梭质粒 pshuttle CMV中插入了vasostatin的DNA片断 ;卡那霉素抗性筛选及PacI酶切鉴定证实腺病毒重组质粒 pAd CMV vasostatin构建成功 ;转染 2 93细胞 7天后观察到细胞病理学效应出现。PCR鉴定表明重组腺病毒中含有vasostatin片断。RT PCR和Western印迹法证实vasostatinmRNA及蛋白的表达。治疗后 3周 pAd CMV vasostatin组移植瘤的体积及瘤重均显著小于 pAd CMV LacZ组及PBS组。

转基因生物的研究状况及其商品开发

本文介绍了一系列应用重组核酸技术产生转基因生物的实例。着重介绍了在适宜的真核系统中生产某些重组生物分子的特殊优越性。讨论了人类基因疗法,和转基因动物及植物的培育。

血友病鼠模型的构建及研究进展

血友病是一种单基因遗传性疾病,主要发病机制为编码凝血因子的基因突变所导致凝血因子减少。临床表现为反复出血,严重时可危及生命,尚不能治愈。目前正在研究的基因治疗则具有治愈血友病的可能。在基因治疗的研究中,动物模型是必不可少的基础支持条件。血友病鼠模型因其自身特点,如便于运输,研究费用少于其它大型动物等,在众多动物模型中脱颖而出,成为血友病动物模型研究的热点。血友病鼠模型的构建经过20多年的历程,逐渐成熟。极大地促进了血友病基因治疗的发展,现就血友病鼠的构建及研究进展予以综述。

体内原位基因组编辑——介绍一种新的基因治疗技术

近几年，随着人工设计和合成的锌指核酸酶（zinc finger nucleases，ZFNs）及转录激活因子样效应物核酸酶（transcription activator-like effector nucleases，TALENs）等技术的建立和发展，对高等动物包括人类在内的基因组DNA可以进行体内原位改造或修饰。这项技术也称在体基因组编辑（in vivo genomeediting）。今年7月14 日Nature杂志发表的一篇研究论文，报道了在血友病小鼠模型上利用ZFN技术对模型小鼠肝脏细胞基因组进行在体编辑，

肌肉萎缩症基因治疗新突破

美国密苏里大学研究人员成功研制了一种针对进行性假肥大性肌肉萎缩症（DMD）的新型基因治疗方案。该基因治疗方案已在小鼠模型上获得成功，下一步将在大型实验动物中进行临床前试验。

局部secretoneurin基因治疗加速糖尿病伤口愈合

血供减少、神经病变和生长因子的表达减弱，严重影响糖尿病伤口愈合。血管生成神经肽secreloneurin已在不同的动物模型上被证实可以通过增加伤口区域的血管数量来改善组织灌注。胸部secretoneurin琏因治疗在dlVdb精尿病小鼠全层损伤的伤口上得到验证。最近研究发现，secretoneurin 基因治疗也提高了心肌梗死大鼠模型的左心事功能，埘心脏功能的积极影响主要是由于在梗死组织边境i）〈=毛细m管数量的增加？由于受损的皮肤微血管是糖尿病患者的伤口愈合紊乱的主要风险之一，假设局部secretoneurin堪冈治疗可能会对2型糖尿病小鼠模型的伤口愈合产生积极的影响。

B7-H3基因与三氧化二砷联合治疗肿瘤的协同效应

目的探讨联合三氧化二砷(As2O3)与B7-H3基因治疗肿瘤的协同效应。方法分别建立小鼠肝癌的大肿瘤和多发肿瘤模型,序贯法瘤内注射真核表达质粒pcDNA3.1-Flag-B7-H3和As2O3,监测大肿瘤及多发性肿瘤的生长情况;免疫组织化学和免疫印记(Westernblot)检测B7-H3基因的表达;CD31免疫组织化学染色评估抗肿瘤血管化的效果;TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果单用B7-H3基因或As2O3治疗大肿瘤只能使肿瘤暂时缩小而不能消退;联合治疗不但可以治愈大肿瘤,而且可以根除多发性肿瘤。免疫组织化学及Westernblot检测结果表明B7-H3基因在肿瘤细胞内表达。联合治疗使肿瘤组织的微血管密度显著减少(P<0.01),肿瘤细胞的凋亡显著增加(P<0.01)。结论联合治疗可以有效地根治大肿瘤和多发性肿瘤。

Animal models of melanoma: a somatic cell gene delivery mouse model allows rapid evaluation of genes implicated in human melanoma

The increasing incidence and mortality associated with advanced stages of melanoma are cause for concern. Few treatment options are available for advanced melanoma and the 5-year survival rate is less than 15%. Targeted therapies may revolutionize melanoma treatment by providing less toxic and more effective strategies. However, maximizing effectiveness requires further understanding of the molecular alterations that drive tumor formation, progression, and maintenance, as well as elucidating the mechanisms of resistance. Several different genetic alterations identified in human melanoma have been recapitulated in mice. This review outlines recent progress made in the development of mouse models of melanoma and summarizes what these findings reveal about the human disease. We begin with a discussion of traditional models and conclude with the recently developed RCAS/TVA somatic cell gene delivery mouse model of melanoma.