肺腺癌和正常肺组织中抗p21^(ras)单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3的免疫反应性比较

目的比较抗p21ras的单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3在肺腺癌和正常肺组织中的免疫反应性,为该抗体的临床应用奠定基础。方法用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3对30例肺腺癌和30例正常肺组织进行免疫组化SP法染色,计算各样本的阳性细胞百分率和HSCORE分值,比较两组间的免疫反应性差异。结果单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌发生免疫反应的百分率分别为83.33%(25/30)、93.33%(28/30)、63.33%(19/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数均为100%;平均HSCORE评分分别为127.50分、280.25分、158.50分。与正常肺组织发生免疫反应的百分率分别为26.67%(8/30)、16.67%(5/30)、33.33%(10/30);阳性样本的平均阳性细胞百分数分别为7.75%、7.50%、8.05%;平均HSCORE评分分别为7.75分、7.50分、8.05分。单克隆抗体KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3与肺腺癌免疫反应阳性样本的平均阳性细胞百分数比较,3者之间差异无统计学意义(P>0.05);3者阳性样本的平均HSCORE分值比较:KGH-R2比KGH-R1、KGH-R3有更强的免疫反应性(P<0.05)。结论 KGH-R1、KGH-R2、KGH-R3单克隆抗体与肺腺癌组织的免疫反应性强于正常肺组织,其中KGH-R2免疫反应性最强,可进一步开发为肺腺癌的治疗性抗体。

抗P21蛋白特定位点单克隆抗体的制备及鉴定

用相当于ras p21蛋白质氨基酸序列56～64位的合成肽与血蓝蛋白偶联作为抗原,利用B淋巴细胞杂交瘤技术成功地得到了分泌抗P21蛋白的单克隆抗体杂交瘤系SE_(11)及EB_(2411)。其抗体亚型分别为IgG_3及IgG_(2a)。本文着重研究了EB_(2411)单抗与人肿瘤细胞的反应性。免疫组化技术检测结果表明,EB_(2411)单抗与人肝癌_(7402)、乳腺癌_(MCF)、胃癌_(823)、肺腺癌_(A2)及肺鳞癌_(78)等细胞系均呈阳性反应。肺癌、肝癌及结肠癌亦呈现不同程度的阳性反应,而与结肠息肉及肺癌癌旁的正常肺泡的反应为阴性。用放射免疫沉淀-SDS-PAGE技术检测Ha-ras_(12val)转化的细胞HR-1,证明EB_(2411)单抗与p21蛋白反应。

抗p21ras单克隆抗体KGH-R1在乳腺癌组织中的免疫反应性

目的研究p21ras的单克隆抗体KGH-R1对乳腺癌组织的特异性,为临床应用奠定基础。方法选取56例正常乳腺组织、55例乳腺普通型导管增生、33例乳腺不典型增生、35例乳腺导管原位癌和60例浸润性乳腺癌组织,用本实验室制备的广谱抗p21ras单克隆抗体KGH-R1进行免疫组化染色,计算各样本的阳性细胞百分率和HSCORE分值,比较各组免疫反应性的差异。结果 KGH-R1单克隆抗体与71.67%(43/60)乳腺浸润癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率66.29%,平均HSCORE评分131.64分,KGH-R1抗体和HSCORE分值与浸润癌患者年龄、性别、淋巴结转移、ER、PR状态无关(P>0.05)。与62.86%(22/35)的原位癌发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率59.18%,平均HSCORE评分86.75分。与57.58%(19/33)的不典型增生导管上皮发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率46.83%,平均HSCORE评分54.86分。与49.09%(27/55)的普通型导管增生组织发生免疫反应,阳性样本的平均阳性细胞率23.15%,平均HSCORE评分21.95分。但KGH-R1单克隆抗体仅与少数(12/56)的正常乳腺组织发生微弱免疫反应(HSCORE<30分)。结论 KGH-R1单克隆抗体具有较好的乳腺癌特异性,可以进一步开发为治疗性抗体。

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆菌中进行表达。EL ISA和 Western印迹检测其与血小板的结合特性。结果 VH、VL 可变区基因符合小鼠抗体可变区特征 ,SZ- 2 1Sc Fv基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外 ,主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过变性和复性后 ,该单链抗体保留了与血小板特异结合的能力。结论成功表达了 SZ- 2 1单链抗体 ,该小分子抗体具有特异结合血小板的能力 ,有望用于抗血栓治疗。

小鼠H-Y单克隆抗体ELISA检测方法的建立

以纯系 BAL B/ c雄性小鼠脾细胞腹腔注射免疫同系雌性小鼠 9次 ,获得的抗血清经雌、雄鼠脾细胞吸收后用于精子细胞毒性试验 ,测得 H- Y抗血清效价为 1/ 16 0。选取免疫应答最好的雌鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,用精子细胞毒性方法筛选效价较高的细胞株制备腹水 ,建立优化的 EL ISA反应条件。优化后的 EL ISA反应条件为 :抗原4℃过夜 ,加 H- Y抗血清 37℃反应 12 0 m in,加 HRP- Ig G 37℃反应 30 min,加 TMB 2 5℃ 30 min。优化后的 EL ISA与常规 EL ISA比较 ,可以明显降低阴性吸光值 ,检测灵敏度从 1/ 32 0上升为 1/ 12

抗HIV核心蛋白p24单克隆抗体的研制及鉴定

抗ＨＩＶ核心蛋白ｐ２４单克隆抗体的研制及鉴定王宏伟金宁一刘仔郭军庆郭志儒毛春生李萍殷震（解放军农牧大学研究所病毒室，长春１３００６２）人Ｉ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）是导致人获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）的主要病原［１］。对ＨＩＶ１感染的诊断，常...

抗禽白血病p27抗原单克隆抗体的制备与鉴定

检测p27抗原的检测试剂在禽白血病的研究和防治方面有着极其重要的作用。为研究国产的禽白血病诊断试剂,利用禽白血病各亚群病毒的p27蛋白很保守的特点,我们将原核表达的禽白血病p27蛋白作为抗原,免疫8周龄的BALB/C小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得三株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过Western_blotting和ELISA的结果分析证明,三株单抗与原核表达得p27蛋白和禽白血病各亚群病毒反应,而不与禽流感病毒等反应。可以看出,这三株单抗在ALV的抗原分析、血清学诊断和疫苗质量监测以及禽白血病污染细胞检测等方面有着极其重要的应用价值。

抗CD49d单克隆抗体与rhG CSF动员的外周血干细胞移植重建小鼠造血功能的比较研究

为比较研究抗CD49d单克隆抗体和重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的外周血干细胞对造血功能重建的影响 ,经放、化疗预处理的BALB/c小鼠分别接受经生理盐水(对照组 )、rhG CSF(实验 1组 )、抗CD49d单克隆抗体 (实验 2组 )动员的同系小鼠的外周血干细胞移植 ,观察受体小鼠的 4周存活率、外周血白细胞 (WBC)、骨髓有核细胞 (BMNC)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM)及脾集落形成单位 (CFU S)等指标。结果显示 ,实验 1、2组小鼠的 4周存活率、WBC、BMNC ,CFU GM和CFU S均明显高于对照组(P <0 0 1) ,实验 1、2组之间比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示抗CD49d单克隆抗体或rhG CSF均能动员小鼠外周血干细胞 ,并能重建同系小鼠的造血功能。

荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体

以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。

抗P-糖蛋白单克隆抗体逆转人肾癌多药耐药的实验研究

目的 :证实抗P 糖蛋白单克隆抗体 (JSB 1 )能逆转人肾癌的天然多药耐药 (MDR)性。方法 :对经过病理证实的 36例肾透明细胞癌采用RT PCR方法检测mdr 1表达水平 ,高表达的为耐药组 ,无或低表达的为敏感组 ,给予阿霉素与JSB 1处理 ,并采用MTT法评价细胞毒作用。结果 :JSB 1对肿瘤细胞无明显的细胞毒作用 ;但具有逆转肾癌对阿霉素 (ADR)的耐药 ,并且在耐药 (糖蛋白过表达MDR)的肾癌细胞中 ,效果更明显 (P <0 .0 1 )。结论 :JSB

抗4-1BB单克隆抗体诱导肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外表达IFN-γ

目的 研究肾癌细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞在体外经抗4 - 1BB(肿瘤坏死因子受体家族成员)单克隆抗体诱导刺激后IFN γ的表达水平。方法 以BCG和高聚生作为佐剂,用6 0 Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(肿瘤引流淋巴结tumor draininglymphnode,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL 2、抗CD3、抗CD2 8、抗4 1BB小鼠单克隆抗体激活,然后利用流式细胞术(FACS)检测细胞内IFN γ(干扰素Ⅱ型)的表达水平。结果 应用4 - 1BB单抗刺激的实验组有抗瘤活性的T细胞比例明显提高,其中T淋巴细胞分泌IFN γ的水平达到4 8.2 3% (P <0 .0 1)。结论 抗4 1BB单抗体外刺激肿瘤细胞致敏的小鼠腹股沟淋巴结T细胞后,T淋巴细胞内表达IFN γ水平提高。

抗p53融合蛋白单克隆抗体的性质鉴定

目的 :研制出能特异与p5 3结合的单克隆抗体 ,使对 p5 3的检测得到更为广泛的应用。 方法 :以原核表达的 p5 3-GST融合蛋白为免疫原 ,常规方法作细胞融合 ,间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)双筛和免疫组织化学(IHC)筛选 ,将能稳定分泌抗人p5 3单抗的杂交瘤细胞株的细胞上清 (命名为M12 6 )与常用p5 3进口单抗PAB180 1(ZYMED公司 )作对比实验。结果 :此单抗适用于ELISA、IHC、免疫印迹及免疫沉淀等方面的研究 ,并且在一定程度上优于PAB180 1。结论 :新制备的单抗M12 6可考虑取代进口单抗PAB180 1而用于p5 3的表达及突变研究。

分离小鼠腹水中抗HBs/a单克隆抗体杂交瘤细胞制备小鼠腹水

探讨利用从小鼠腹水中分离获得的单克隆抗体杂交瘤细胞 ,大量制备小鼠单克隆抗体腹水的方法 :收集已接种单克隆抗体杂交瘤细胞的小鼠腹水 ,用淋巴细胞分离液离心分离腹水中的杂交瘤细胞 ;再将此分离出的杂交瘤细胞 ,注入其他小鼠腹腔又制得腹水。每只小鼠分离得到的杂交瘤细胞可供 5只小鼠腹腔注射 ,平均每只小鼠产腹水 3.97m l。

抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞重建辐射损伤小鼠造血的初步研究

目的 观察抗VLA-4单克隆抗体动员的外周血干细胞对辐射损伤小鼠造血重建的效果。方法 8.5 Gy^(60)Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经生理盐水(实验1组)及抗VLA-4单克隆抗体(实验2组)动员的外周血干细胞移植,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMN),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标。结果 实验2组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、实验1组,差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论 抗VLA-4单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞,并能成功重建辐射损伤小鼠的造血功能。

R-藻红蛋白荧光标记小鼠抗人CD4/CD8单克隆抗体

R-藻红蛋白(R-PE)是一种新型荧光标记探针,具有优良的荧光特征。本实验采用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4/CD8单克隆抗体,再将活化后的R-PE和CD4/CD8单克隆抗体以一定比例混合,使之发生交联反应,交联产物经SephacrylS-300柱分离纯化。结果显示:用R-PE标记的抗CD4/CD8单抗,经流式细胞仪(简称FACS)分析可以检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原和CD8抗原的表达,且R-PE标记的抗CD4/CD8单抗特异性保持完好,荧光强度较高,可以形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。

犬瘟热病毒截短P蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备针对犬瘟热病毒（canine distemper virus，CDV）P1蛋白的单克隆抗体（McAb），本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB／c小鼠，并将其脾淋巴细胞与SP2／0进行融合，用CDV包被ELISA板，

抗IL-17A单克隆抗体对系统性硬化病小鼠纤维化病变的抑制作用及其机制

目的观察抗白介素17A(IL-17A)单克隆抗体对系统性硬化病(SSc)小鼠纤维化病变的影响,并探讨其相关机制。方法将24只小鼠随机分为正常对照组、模型组、抗体组、同型对照组,每组6只。模型组于背部中央区域皮下注射博来霉素(BLM),抗体组注射BLM+抗IL-17A单克隆抗体,同型对照组注射BLM+同型对照抗体,正常对照组注射磷酸盐缓冲液,共3周。取其皮肤和肺组织,观察病理变化;测量皮肤厚度,进行皮肤炎症评分和肺炎症、纤维化评分;采用实时荧光定量PCR法检测皮肤和肺组织IL-17A、转化生长因子β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA相对表达量。结果正常对照组皮肤无明显炎症细胞浸润及胶原增生,肺泡结构正常。模型组真皮层和肺泡间隔明显增厚,皮肤胶原明显增生;肺间质内有大量炎症细胞浸润,纤维组织增生,可见胶原束形成。同型对照组皮肤和肺组织病理改变与模型组相似。抗体组皮肤增厚,皮肤和肺组织炎症细胞浸润,肺纤维组织增生,但程度均轻于模型组和同型对照组。与正常对照组比较,模型组、抗体组、同型对照组皮肤厚度和炎症评分、肺炎症和纤维化评分均升高,皮肤和肺组织IL-17A、TGF-β1、CollagenⅠmRNA相对表达量均升高,但模型组和同型对照组均高于抗体组(P<0.05或<0.01)。模型组和同型对照组上述指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论抗IL-17A单克隆抗体可抑制SSc小鼠的皮肤和肺纤维化病变;减少TGF-β1和CollagenⅠ生成可能是其作用机制。

避孕性抗孕酮单克隆抗体在小鼠子宫组织的定位

本期封面照片的提供者王明伟博士是我国留学英国剑桥的青年科技工作者,他的论文被许多国家授奖,并应邀去许多国家和地区讲学。王博士早年在国内时,既是本刊的读者,又是本刊的作者,迄今一直与本刊保持着联系,本期发表的《避孕性抗孕酮单克隆抗体在小鼠子宫组织的定位》及照片,即是他的工作成果之一。我们在此预祝王博士今后在科研中取得更大的成绩,为祖国争光,为人类多作贡献。

抗转化生长因子β_2抗体对青光眼术后滤过泡成纤维细胞增殖及p21、cyclinD1表达的影响

背景:研究表明,转化生长因子β2在青光眼滤过性手术后滤过泡瘢痕形成过程中起着重要的作用。目的:实验拟观察抗转化生长因子β2抗体对体外培养的滤过泡成纤维细胞增殖及p21、cyclinD1表达的影响。设计、时间及地点:开放性实验,于2007-06在广东医学院附属医院整形科完成。材料:取自青光眼小梁切除术后失败滤过泡进行手术修复时切除下来的瘢痕组织。患者均为男性,年龄23～35岁。8例患者术前、术中均未接受抗瘢痕药物治疗。方法:将瘢痕组织进行原代细胞培养,获得成纤维细胞。将浓度为0(对照),0.01,0.1,1,10mg/L抗转化生长因子β2抗体作用于成纤维细胞24h,半数抑制浓度(IC50)抗转化生长因子β2抗体分别处理0(对照),24,48,72h。主要观察指标:四甲基偶氮唑盐法及免疫组织化学法观察抗转化生长因子β2抗体对成纤维细胞的增殖及p21、cyclinD1表达的作用。结果:①随着抗转化生长因子β2抗体作用浓度的增加及作用时间的延长,抗体对成纤维细胞具有明显抑制作用。②随着抗转化生长因子β2抗体作用浓度、时间增加cyclinD1阳性表达减少,弱阳性表达增加;而p21强阳性表达明显增多,且在细胞核的表达也增多(P<0.01);在不同的作用浓度及时间,p21与cyclinD1表达呈显著负相关(r=-0.91,r=-0.85,P<0.05),两者与细胞的增殖抑制显著相关(r=0.76,P<0.05)。结论:抗转化生长因子β2抗体可能通过诱导p21蛋白合成,下调cyclinD1的表达从而抑制成纤维细胞的增殖。

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。