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piR-16744对缺氧—复氧诱导的小鼠原代心肌细胞焦亡作用及机制研究
被引量:
3
1
作者
王飞
陈鑫哲
+1 位作者
王凯
单婵
《青岛大学学报(自然科学版)》
CAS
2022年第2期5-11,共7页
为探究piR-16744对H/R诱导的NMCs焦亡作用及机制,体外构建NMCs的H/R模型,设置缺氧6 h、12 h、24 h复氧6 h的时间梯度。使用RT-qPCR检测piR-16744的表达水平,WB检测焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-C、Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18的表达...
为探究piR-16744对H/R诱导的NMCs焦亡作用及机制,体外构建NMCs的H/R模型,设置缺氧6 h、12 h、24 h复氧6 h的时间梯度。使用RT-qPCR检测piR-16744的表达水平,WB检测焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-C、Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平,LDH和PI染色检测细胞死亡率。结果显示,H/R 6/6 h时,NMCs中焦亡相关蛋白的表达水平最高。抑制NMCs中piR-16744的表达可促进焦亡相关蛋白表达,细胞死亡率升高;过表达piR-16744则抑制焦亡相关蛋白的表达,细胞死亡率降低;同时抑制piR-16744和Caspase-1的表达,焦亡相关蛋白的表达水平相较于单独抑制piR-16744组降低。研究表明piR-16744可通过依赖Caspase-1的经典焦亡信号通路调控NMCs焦亡。
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关键词
PIRNA
细胞
焦亡
小鼠原代心肌细胞
GSDMD
心肌
损伤
下载PDF
职称材料
心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的CREG蛋白表达载体的构建及鉴定
2
作者
栾波
李杰
+5 位作者
段岩
张娜
霍煜
梁卓
闫承慧
韩雅玲
《现代生物医学进展》
CAS
2011年第19期3610-3614,共5页
目的:构建心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)启动子启动E1A基因阻遏子(cellular repressorof E1A-stimulated genes,CREG)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达载体。...
目的:构建心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)启动子启动E1A基因阻遏子(cellular repressorof E1A-stimulated genes,CREG)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达载体。绿色荧光蛋白作为报告基因,方便在心肌细胞中直接观察CREG蛋白的表达,为心肌特异性转CREG基因动物模型制备提供载体。方法:用BamH I和EcoR I双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1中,构建pCREG-EGFP-N1;根据Genebank中公布的α-MHC基因的启动子序列,人工合成pUC57-α-MHC启动子基因序列,经Ase I和Nhe I双酶切得到启动子α-MHC,亚克隆入pCREG-EGFP-N1中替代原CMV启动子,构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1,测序鉴定。用脂质体法将该质粒转染体外培养的小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果:成功构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1质粒,酶切及测序结果正确;成功转染入原代培养小鼠心肌细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。结论:重组质粒pα-MHC-CREG-EGFP-N1体外转染入原代培养小鼠心肌细胞后,目的基因能够在心肌细胞中有效表达,检测方法简便可靠,为下一步建立心肌细胞特异性表达CREG的过表达转基因小鼠、深入探讨CREG在心肌疾病发生中的生物学功能研究奠定了基础。
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关键词
α-MHC
启动子
CREG
质粒构建
转染
小鼠原代心肌细胞
原文传递
题名
piR-16744对缺氧—复氧诱导的小鼠原代心肌细胞焦亡作用及机制研究
被引量:
3
1
作者
王飞
陈鑫哲
王凯
单婵
机构
青岛大学转化医学研究院
出处
《青岛大学学报(自然科学版)》
CAS
2022年第2期5-11,共7页
基金
国家自然科学基金青年项目(批准号:21708021)资助。
文摘
为探究piR-16744对H/R诱导的NMCs焦亡作用及机制,体外构建NMCs的H/R模型,设置缺氧6 h、12 h、24 h复氧6 h的时间梯度。使用RT-qPCR检测piR-16744的表达水平,WB检测焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-C、Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平,LDH和PI染色检测细胞死亡率。结果显示,H/R 6/6 h时,NMCs中焦亡相关蛋白的表达水平最高。抑制NMCs中piR-16744的表达可促进焦亡相关蛋白表达,细胞死亡率升高;过表达piR-16744则抑制焦亡相关蛋白的表达,细胞死亡率降低;同时抑制piR-16744和Caspase-1的表达,焦亡相关蛋白的表达水平相较于单独抑制piR-16744组降低。研究表明piR-16744可通过依赖Caspase-1的经典焦亡信号通路调控NMCs焦亡。
关键词
PIRNA
细胞
焦亡
小鼠原代心肌细胞
GSDMD
心肌
损伤
Keywords
piRNA
pyroptosis
NMCs
GSDMD
myocardial injury
分类号
R542.2 [医药卫生—心血管疾病]
下载PDF
职称材料
题名
心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的CREG蛋白表达载体的构建及鉴定
2
作者
栾波
李杰
段岩
张娜
霍煜
梁卓
闫承慧
韩雅玲
机构
沈阳军区总院全军心血管病研究所心内科
第四军医大学西京医院心内科
出处
《现代生物医学进展》
CAS
2011年第19期3610-3614,共5页
文摘
目的:构建心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)启动子启动E1A基因阻遏子(cellular repressorof E1A-stimulated genes,CREG)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达载体。绿色荧光蛋白作为报告基因,方便在心肌细胞中直接观察CREG蛋白的表达,为心肌特异性转CREG基因动物模型制备提供载体。方法:用BamH I和EcoR I双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG基因,亚克隆入增强绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1中,构建pCREG-EGFP-N1;根据Genebank中公布的α-MHC基因的启动子序列,人工合成pUC57-α-MHC启动子基因序列,经Ase I和Nhe I双酶切得到启动子α-MHC,亚克隆入pCREG-EGFP-N1中替代原CMV启动子,构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1,测序鉴定。用脂质体法将该质粒转染体外培养的小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观测绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测CREG蛋白的表达。结果:成功构建pα-MHC-CREG-EGFP-N1质粒,酶切及测序结果正确;成功转染入原代培养小鼠心肌细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,Western blot检测到CREG蛋白的表达。结论:重组质粒pα-MHC-CREG-EGFP-N1体外转染入原代培养小鼠心肌细胞后,目的基因能够在心肌细胞中有效表达,检测方法简便可靠,为下一步建立心肌细胞特异性表达CREG的过表达转基因小鼠、深入探讨CREG在心肌疾病发生中的生物学功能研究奠定了基础。
关键词
α-MHC
启动子
CREG
质粒构建
转染
小鼠原代心肌细胞
Keywords
α -MHC
Promoter
CREG
Plasmid Construction
Transfection
Mouse Primary Cardiomyocyte
分类号
Q95-3 [生物学—动物学]
R54 [医药卫生—心血管疾病]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
piR-16744对缺氧—复氧诱导的小鼠原代心肌细胞焦亡作用及机制研究
王飞
陈鑫哲
王凯
单婵
《青岛大学学报(自然科学版)》
CAS
2022
3
下载PDF
职称材料
2
心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的CREG蛋白表达载体的构建及鉴定
栾波
李杰
段岩
张娜
霍煜
梁卓
闫承慧
韩雅玲
《现代生物医学进展》
CAS
2011
0
原文传递
已选择
0
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