清热化瘀滋阴法对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA表达的影响

目的探讨清热化瘀滋阴法对系统性红斑狼疮(SLE)早期患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA表达的影响。方法用清热化瘀滋阴法治疗SLE患者15例,抽取患者服药前后肘静脉血,淋巴细胞分离液分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,采用一步法RT-PCR技术,检测服用清热化瘀滋阴中药对bcl-2mRNA的表达的影响。结果用药前后均可见bcl-2mRNA的表达。服用清热化瘀滋阴中药后bcl-2mRNA的表达明显低于用药前(P<0.01)。结论清热化瘀滋阴中药可能通过下调患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA的表达发挥对SLE的治疗作用。

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热(HFRS)病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体的临床意义

用抗独特型抗体(Ab2)检测细胞表面抗原受体是将Ab2作为探针用于免疫学检测而出现的新的研究方法。本文在制备了HFRS病毒抗独特型抗体的基础上应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验，检测了HFRS病人外周血淋巴细胞表面特异抗原受体。首先，采取病人外周肝素抗凝血用淋巴细胞分离液按常规方法分离淋巴细胞，将淋巴细胞用RPMI 1640不完全培养液离心洗一次后弃上清，将沉降细胞重新悬浮后调至0．1ml并加入5％小牛血清．混匀，取约10—30μl加在预置于离心细胞沉淀器的玻片上，800rpm离心5分钟，取下玻片待干燥后加丙酮-福尔马林固定液固定30秒，水洗，吹干。

卡介苗对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的 探讨卡介苗 (BCG)对哮喘BALB/c小鼠外周血及肺泡灌洗液 (BALF)中淋巴细胞凋亡的影响。方法 采用卵蛋白诱导的BALB/c小鼠哮喘模型 ,以BCG处理 ,用彗星法计数哮喘动物外周血及支气管肺泡灌洗液中的凋亡淋巴细胞百分比 ,用二苯胺法定量分析DNA的损伤率 ,比较阳性对照组、阴性对照组和BCG组的淋巴细胞凋亡及损伤情况。结果 外周血中淋巴细胞凋亡率 :阳性对照组为 (2 1 5± 0 44) % ,BCG组为 (4 0 3± 0 30 ) % ,两组有非常显著性差异 (P <0 0 1 ) ;BALF中淋巴细胞凋亡率 :阳性对照组和BCG组分别为 (1 0 8± 0 69) %和 (2 70± 0 82 ) % ,两组比较有显著性差异 (P <0 0 5) ;外周血DNA损伤率 :阳性对照组为 (7 2 2± 8 66) % ,BCG组为 (9 36± 0 1 5) % ,两组比较有非常显著性差异 (P <0 0 1 )。阴性对照组的各项指标与BCG组相比 ,均无明显差异 (P >0 0 5)。结论 BCG可以促进哮喘小鼠的淋巴细胞凋亡 ,加速炎性细胞消除 ,从而起到治疗哮喘的作用。

多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型

目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化. 方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti- CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型. 结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti- CD3mAb共孵育4,7,10,13d,细胞数分别增加2.69±0.9, 14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+ 和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%, (31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%. 结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.

淋巴细胞分离液在新生儿外周血染色体制备应用评价

由于遗传因素或环境因素而使正常的胚胎发育过程发生紊乱,从而使新生儿出现先天性畸形或生理机能障碍[1],就有必要做新生儿染色体检测。在遗传室工作以来,发现新生儿染色体的制备一直就存在分裂相少,铺展不开,

小鼠胰岛分离纯化后肾被膜下胰岛移植动物模型的建立

目的：探讨一种分离纯化小鼠胰岛细胞的优良新型方法,经同种异体糖尿病小鼠肾被膜下胰岛移植建立动物模型.方法：（1）胰岛分离及检测：采用胆总管内胶原酶逆行灌注消化胰腺的方法分离胰岛,淋巴细胞分离液单一密度梯度离心法纯化胰岛.利用双硫腙对胰岛进行特异性染色来计算胰岛产量及纯度,台盼兰染色鉴定胰岛细胞的活性,以葡萄糖刺激胰岛素释放来检测胰岛功能.（2）胰岛移植：空白对照组（n =12）,糖尿病鼠组（n=12）,对糖尿病鼠组行同种异体鼠肾被膜下胰岛移植,观测血糖及生命体征变化.结果：每只小鼠可获得150～200个高质量胰岛,纯度及活性均高于90 ％,葡萄糖刺激后胰岛素释放量明显增加（SI=3）.糖尿病小鼠经胰岛移植后,1～3 d内,血糖均降至11.1 mmol/L以下.结论：采用新改进的分离纯化胰岛方法,可获得高质量、高功能的胰岛细胞.经同种异体糖尿病小鼠肾被膜下胰岛移植动物模型的成功建立,为进行人胰岛小鼠移植及人胰岛同种异体移植提供重要试验价值.

不同分离纯化法建立人早孕滋养细胞模型的效果比较

目的对4种建立滋养细胞的方法进行比较,以期寻求一种简便高效的人早孕滋养细胞的体外培养方法,为相关研究提供基础。方法早孕绒毛通过胰酶联合胶原酶消化分离后,分别采用直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法、完整绒毛消化联合简化的percoll密度梯度分离法4种方法纯化培养,倒置显微镜观察细胞形态,应用HE染色、免疫组化和免疫细胞化学法检测细胞纯度。结果直接接种、差速贴壁联合差速消化法、人外周血淋巴细胞分离液分离纯化法得到的细胞细胞角蛋白7(CK-7)表达阳性率不足60%;简化的percoll密度梯度分离法得到的细胞CK-7表达阳性率达90%以上。结论完整绒毛消化联合简化的percoll密度梯度分离纯化可以得到大量较高纯度的滋养细胞以供后期实验。

外周血基因转录本检测中2种标本处理方法的比较

目的 选择合理的标本处理方法 ,提高外周血基因转录本检测的灵敏度。方法 5 3例胃癌患者外周血标本分别以淋巴细胞分离液 (FICOLL)和红细胞裂解液 (RLS)处理后提取RNA ,以荧光定量RT PCR技术检测 β actin基因和CEA基因转录本。 结果 RLS法和FICOLL法定量检测 5 3例外周血标本的 β actin基因转录本的平均浓度分别为 1.19× 10 6和 2 .4 0× 10 5拷贝 /ml,2组测定值差异有显著性 (P <0 .0 1)。RLS法检测 5 3例中 13例为CEAmRNA阳性 ,阳性率为 2 4 .5 % ;FICOLL法检测到 5例阳性 ,阳性率 9.4 % ,RLS法的阳性检出率高于FICOLL法 (P <0 .0 5 )。结论 RLS法分离外周血有核细胞的效果优于FICOLL法 ,有利于提高基因表达检测的灵敏度。

犬在生理和某些病理状态下糖皮质激素及其受体的变化

糖皮质激素(GC)是维持生命所必需的甾体激素,具有重要的生理功能。由于它具有抗炎、抗过敏及抗毒作用,在临床上得以广泛应用。近年来的研究表明,激素须首先与靶细胞膜上的受体结合才能发挥其效应,因此糖皮质激素受体(GCR)的研究受到人们的广泛重视。研究GC和GCR的变化及其调节规律需要不同的动物模型,目前尚未找见常用实验动物GCR正常值。为便于开展实验研究,我们对几种常用实验动物在生理和某些病理状态下GCR进行了测定。本文报告犬血浆皮质醇和外周血淋巴细胞GCR的测定结果。

激光快速流式微核分析

本文报道激光流式微核分析技术的建立及其对人类外周血淋巴细胞核和微核悬液的分析结果。对41名女输血员(年龄25～39岁)每人取静脉血5ml。

抗DON单克隆抗体制备工艺优化研究

本研究通过优化离心条件,利用小鼠外周血淋巴细胞分离液成功分离出小鼠腹水中的抗呕吐毒素(DON)杂交瘤细胞SW-3H_(2),并考察不同周龄和性别小鼠的腹水产量及SW-3H_(2)在腹腔传代中的稳定性。结果表明,2000 r/min、20 min的离心条件可获得最佳分离效果。分离获得的杂交瘤细胞可再次接种10~15只小鼠,且在14周龄雄性小鼠中腹水产量显著高于雌性小鼠。此外,杂交瘤细胞在小鼠腹腔中可连续稳定传代3代,平均腹水产量为5.95 mL/只,抗体效价超过1∶4.9×10^(4)。本研究的成果将有助于提高抗DON单克隆抗体的制备效率。