外源性雌激素对小鼠子宫b-FGF和TGF-β_1表达的影响

为探明雌激素对小鼠子宫碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,应用免疫组化染色观察雌激素对小鼠子宫b-FGF和TGF-β1表达的影响。结果表明,随着外源性雌激素的介入,子宫基质细胞中b-FGF和TGF-β1阳性着色反应增强,腺上皮则减弱。提示外源性雌激素对小鼠子宫不同类型细胞中b-FGF和TGF-β的表达有不同的调节作用,此调节可能参与小鼠胚泡着床过程。

小鼠子宫内膜细胞的原代培养与鉴定

目的:建立小鼠围着床期子宫内膜细胞的原代培养,并对其进行形态学鉴定。方法:通过挤压法获取小鼠子宫内膜组织,胶原酶Ⅰ消化,过滤法,进行单层培养。通过倒置显微镜观察其大体形态,免疫细胞化学染色法对间质细胞(ESC)及上皮细胞(EEC)进行鉴定。结果:EEC和ESC经角蛋白抗体和波形蛋白抗体染色,胞质被染成棕黄色的细胞为阳性细胞。结论:成功培养了原代小鼠子宫内膜细胞,方法简便有效,获得细胞成活率高,生长稳定。成功建立子宫内膜细胞原代体外培养体系,为从细胞和分子水平方面研究子宫内膜的各种功能及干预调节奠定基础。

桂枝茯苓丸及其温阳利水和活血化瘀两组药物对小鼠子宫肌瘤模型的影响

目的:探讨桂枝茯苓丸及其温阳利水和活血化瘀两组药物对小鼠子宫肌瘤模型的治疗作用。方法:观察桂枝茯苓丸及其温阳利水和活血化瘀两组药物对子宫肌瘤模型小鼠子宫重量、血清中雌、孕激素含量和子宫组织的影响。结果:桂枝茯苓丸及其温阳利水和活血化瘀两组药物有降低子宫肌瘤小鼠子宫重量和雌激素、孕酮水平和趋势,并能减轻子宫肌瘤模型小鼠子宫的病理改变。

固本抑瘤Ⅱ号对小鼠子宫颈癌14号抑瘤作用的实验研究

目的:探讨固本抑瘤Ⅱ号抗肿瘤作用机理。方法:观察固本抑瘤Ⅱ号,对接种于615小鼠皮下的子宫颈癌14号(U_(14))的抑瘤作用,及其对宿主免疫功能、血液流变学等的影响。结果:固本抑瘤Ⅱ号,固本抑瘤Ⅱ号加表阿霉素抑瘤率分别为:37.8%、54.6%,而且可以提高宿主的 NK 细胞活性、红细胞和淋巴细胞免疫功能以及巨噬细胞的吞噬能力,降低宿主的血浆粘度和红细胞压积。结论:固本抑瘤Ⅱ号对防止肿瘤的复发和转移是有益的。

小鼠子宫颈部位输卵管蛋白表达的初步研究

用RT-PCR及免疫印迹法检测证实小鼠子宫颈粘膜上皮细胞具表达输卵管蛋白的能力,宫颈部所获得的输卵管蛋白转录产物,+310到+714的405bp的cDNA片段经序列测定及blast比较表明与输卵管部位表达的输卵管蛋白完全一致(100%)。小鼠子宫颈输卵管蛋白在动情周期的表达波动情况与输卵管粘膜上皮的类似,其表达于小鼠动情期明显增加。Westernblot显示小鼠子宫颈提取物中存在两种不同分子量(60KD,30KD)的输卵管蛋白。原位杂交结果则提示子宫颈粘膜上皮细胞含丰富的输卵管蛋白mRNA信号。通过"原体中风"实验未发现输卵管蛋白在体外对精子活动有影响,其功能尚须进一步分析。

小鼠子宫内膜基质细胞中HOXA10调控DNM1L表达机制的研究

[目的]本文旨在研究转录因子同源框A10基因(HOXA10)结合动力蛋白基因(DNM1L)启动子区域绑定位点,并调控DNM1L基因的表达机制。[方法]通过转录因子网站(TFSITESCAN)预测DNM1L启动子区域存在HOXA10的结合位点。分离怀孕1~7 d的小鼠子宫内膜,采用RT-q PCR检测其HOXA10和DNM1L mRNA表达量的变化规律。结合HOXA10过表达和siRNA干扰试验,分析小鼠子宫内膜基质细胞中HOXA10 mRNA表达量的变化如何影响DNM1L表达。构建DNM1L野生型和绑定位点突变型启动子区域(-1 749^-2 033 bp)荧光素酶报告载体,分别与HOXA10过表达载体和siRNA共转染到小鼠3T3细胞,检测DNM1L启动子区荧光素酶活性值变化。[结果]网站(TFSITESCAN)预测DNM1L在转录起始位点上游-1 767 bp的位置存在HOXA10转录结合位点。HOXA10 mRNA表达量在怀孕4 d小鼠的子宫内膜中达到峰值,DNM1L mRNA表达量则在怀孕3 d时达到峰值。HOXA10过表达和siRNA干扰试验结果表明:基质细胞中HOXA10表达量升高或降低能相对应降低或提高DNM1L表达水平(P<0.01)。双荧光素酶活性试验结果表明:HOXA10过表达载体和siRNA分别与野生型DNM1L报告载体共转染细胞,前者荧光活性值极显著下降,后者荧光活性值极显著上升(P<0.01)。突变型DNM1L报告载体对荧光活性值无明显影响(P>0.05)。[结论]HOXA10可结合于DNM1L启动子区域,并调控DNM1L基因表达。

染料木黄酮对小鼠子宫内膜癌c-fos、cj-un mRNA表达的影响

目的探讨染料木黄酮对雌二醇-17β(E2)所诱发的小鼠子宫内膜癌c-fos、c-jun mRNA表达的影响。方法利用免疫组化方法和定量RT-PCR法检测小鼠子宫内膜癌细胞c-fos、c-jun mRNA的表达量。结果E2单独投与群c-fos、c-jun mR-NA表达增强,与E2单独投与群比较,E2和染料木黄酮联合投与群明显抑制E2刺激所诱发的c-jun表达增强。c-fos mRNA表达有减少趋势。结论E2皮下注射的雌性ICR小鼠给予染料木黄酮后c-fos、c-jun mRNA表达减少,对子宫内膜癌的预防有一定的意义。

小鼠子宫中TRPC6通道在离体子宫收缩中的作用

目的研究小鼠子宫中经典瞬时感受器电位通道6(transient receptor potential canonical 6,TRPC6)离子通道在离体子宫收缩中的作用。方法分离野生型(WT)或TRPC6-KO小鼠子宫,使用等张张力测试系统观察TRPC6通道抑制剂Pyr10和Larixyl对离体小鼠子宫收缩的影响;分离WT或TRPC6-KO小鼠子宫平滑肌细胞,使用钙成像技术观察催产素引起的细胞内钙离子浓度的变化。结果Pyr10和Larixyl能明显抑制催产素引起的子宫收缩;催产素引起的TRPC6-KO小鼠子宫的收缩持续时间明显较WT的长;催产素引起TRPC6-KO的子宫平滑肌细胞钙离子浓度升高后减退速度较WT缓慢。结论TRPC6通道介导的钙离子内流参与了小鼠子宫的收缩,并且催产素引起的小鼠子宫收缩随时间的衰减可能与TRPC6通道电流的衰减有关。

小鼠子宫肥大细胞在给天花粉后定量、组化,电镜的研究

小鼠子宫肥大细胞在给天花粉后定量、组化，电镜的研究龚凤英杨美林（山西医科大学组胚教研组）中国１号雌性小鼠３６只，分为实验组和对照组，均为动情期。对照组不作任何处理，实验组分别腹腔注射天花粉，于注药后２０ｈ，２１ｈ，２２ｈ，２４ｈ处死，取子宫组织，作光...

避孕性抗孕酮单克隆抗体在小鼠子宫组织的定位

本期封面照片的提供者王明伟博士是我国留学英国剑桥的青年科技工作者,他的论文被许多国家授奖,并应邀去许多国家和地区讲学。王博士早年在国内时,既是本刊的读者,又是本刊的作者,迄今一直与本刊保持着联系,本期发表的《避孕性抗孕酮单克隆抗体在小鼠子宫组织的定位》及照片,即是他的工作成果之一。我们在此预祝王博士今后在科研中取得更大的成绩,为祖国争光,为人类多作贡献。

控制性超排卵(COH)药物GnRHα对小鼠子宫内膜整合素αv、β_1表达的影响

目的观察GnRHα长周期辅助超排卵对小鼠子宫内膜组织αv、β1表达的影响,探讨提高IVF-ET妊娠率的方法。方法将36只小鼠随机分成三组,第一组生理盐水(NS)组;第二组HMG+HCG;第三组GnRHα+HMG+HCG。第二、第三组注射HCG24、48h和第一组观察排卵后24h、48h,采用免疫组织化学技术检测子宫内膜整合素av、β1的表达。结果整合素αv、β1在第一组呈现强阳性表达,第三组表达稍弱了第一组,第三组弱于前两组,第一、第二组两者比较无显著差异(P>0.05);第三组与前两组比较有显著差异(P<0.05)。结论控制性超排卵(COH)药物GnRHα可以影响小鼠分泌期子宫内膜αv、1β的表达,从而影响子宫内膜容受性,导致临床妊娠率偏低。

组蛋白甲基化转移酶EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用

目的探讨组蛋白甲基化转移酶EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的表达变化规律及EZH2选择性抑制剂DZNep对EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中表达的影响。方法通过体外培养小鼠子宫内膜基质细胞,小鼠子宫内膜基质细胞生长到80%~90%时进行雌孕激素诱导蜕膜化及加抑制剂处理分成以下4组,对照组:2%FBS/DMEM(含P/S);蜕膜化组:加入含有E2(10 nmol/L)+P4(1μmol/L)的2%FBS/DMEM(含P/S);抑制剂(DZNep)组:加入含有DZNep(20μmol/L)的2%FBS/DMEM(含P/S);蜕膜化加抑制剂组:加入含有DZNep(20μmol/L)+E_2+P_4的2%FBS/DMEM(含P/S),0、24、48、72 h拍照,48 h换液,72 h收细胞。利用免疫荧光化学及Real-time PCR方法从蛋白和mRNA水平检测EZH1/2在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化中的表达。结果 (1)小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化72 h中EZH1/2基因的表达明显上调,蜕膜化组与对照组相比差异有统计学意义(P <0. 05);(2)蜕膜化联合抑制剂组与对照组相比,抑制剂组可以促进EZH1mRNA和EZH2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P <0. 05);与蜕膜化组相比,蜕膜化加抑制剂组EZH1 mRNA和EZH2 mRNA的表达上调,差异有统计学意义(P <0. 05);(3) DZNep联合蜕膜化处理抑制EZH2蛋白的表达,但促进EZH1蛋白的表达。结论 (1) EZH1/2基因参与m ESC蜕膜化过程;(2)DZNep单独可以促进小鼠子宫基质细胞蜕膜化;(3)在小鼠子宫内膜蜕膜化细胞中,DZNep在转录水平可以促进EZH1/2 mRNA的表达,在蛋白水平抑制EZH2的表达、促进EZH1的表达。

人脐带间充质干细胞对小鼠子宫内膜炎的疗效研究

目的探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)作用于子宫内膜炎小鼠模型的体内效应。方法用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠子宫内膜炎急性炎症模型,分组:对照组(PBS)、模型组(LPS)、治疗早期组(LPS+hUC-MSCs,6 h)、治疗晚期组(LPS+hUC-MSCs,12 h)。肉眼观察小鼠子宫大体形态学改变,HE染色法观察子宫内膜组织学变化,ELISA法分别检测小鼠子宫炎症指标MPO及相关免疫指标TNF-α、IL-6和IL-1β的变化。结果与对照组相比,模型组肉眼观察和组织学镜检炎症表现显著,且子宫组织中MPO、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量显著增加。hUC-MSCs组大体和组织学表现炎症反应减轻,MPO、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量呈不同程度下降。炎症形成后,早期灌注hUC-MSCs炎症指标下降最明显。结论直接宫腔灌注hUC-MSCs能够缓解LPS诱导的子宫内膜炎。

脂多糖对小鼠子宫内膜中TLR4和TNF-α的影响

奶牛子宫内膜炎发病率较高,易造成繁殖障碍,给奶牛养殖业造成巨大的经济损失,已成为奶牛养殖业急需解决的难题。研究发现,Toll样受体4（TLR4）与革兰氏阴性菌引起的子宫内膜炎密切相关,革兰氏阴性菌外膜的主要组成部分脂多糖内毒素（LPS）是其致病成分之一,机体天然免疫系统中TLR4会迅速识别LPS并作出应答,活化其下游信号级联反应^（[1]）。本试验旨在经子宫灌注LPS诱发小鼠子宫内膜炎,

小鼠子宫内膜基质细胞的分离纯化与体外培养

目的分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞并进行体外培养,为进一步研究子宫内膜异位症的发病机制提供实验基础。方法通过酶消化、滤网过滤和差时贴壁等方法 ,分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,体外培养传代,通过免疫组织化学法进行细胞表型鉴定。结果基质细胞在接种后0.5 h开始贴壁,可见梭形和多角形两种形态的细胞。免疫组化显示这两种细胞具有波形蛋白免疫反应性,反应率可达95%以上,而细胞角蛋白无免疫反应性,提示它们为来源于内膜基质的基质细胞,分离出的子宫内膜基质细胞可以在体外进行增殖。结论采用酶消化、滤网过滤和差时贴壁等方法 ,可成功地分离小鼠子宫内膜基质细胞,基质细胞可以有限的传代。

利用2型重组腺相关病毒抑制子宫腔上皮Plekhs1基因表达对小鼠生育能力的影响

研究构建稳定表达Plekhs1 shRNA 2型重组腺相关病毒载体(rAAV2-GFP-shRNA-Plekhs1),筛选并制备抑制Plekhs1表达效果最强重组腺相关病毒(rAAV2-PL3)。重组病毒子宫角注射到小鼠子宫,通过Real-time PCR、荧光检测、免疫组化技术检测rAAV2-PL3在小鼠子宫侵染表达规律,分析rAAV2-PL3侵染小鼠子宫抑制Plekhs1表达效果及对生殖影响。结果表明,rAAV2-PL3可有效转染至小鼠子宫内膜上皮细胞中并抑制Plekhs1表达,F1代产仔数量显著降低。研究表明,子宫角注射重组腺相关病毒可高效研究子宫腔上皮基因功能。

骨桥蛋白在体外对小鼠子宫内膜蜕膜化的调节作用

目的探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是否参与体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞(mouse endometrial stromal cells,mESCs)蜕膜化的过程及其调节作用。方法采用雌激素(10 nmol/L)和孕酮(1μmol/L)处理mESCs进行体外诱导蜕膜化,检测OPN的表达变化。设立Opn质粒过表达组及Opn shRNA敲减组,分别将Opn过表达质粒和Opn shRNA转染mESCs,同时设立阴性对照组,采用实时定量PCR及Western blotting法检测转染效率;CCK-8法检测每组细胞的增殖情况;采用实时定量PCR和Western blotting法检测小鼠子宫内膜蜕膜化标志分子蜕膜/滋养层催乳素相关蛋白(decidual/trophoblast-layer prolactin related protein,Dtprp)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,Vegfa)及其受体2(vascular endothelial growth factor A receptor 2,Vegfr2)表达情况。结果雌激素+孕酮诱导蜕膜化mESCs中Dtprp(P<0.001)、Vegfa(P=0.004)和Vegfr2(P=0.002)mRNA水平显著增加,同时Opn mRNA(P=0.002)和OPN蛋白(P<0.001)的表达水平也显著增加;Opn过表达可促进mESCs细胞增殖(P=0.004),而敲减Opn可抑制mESCs细胞增殖(P=0.008);转染Opn过表达质粒可进一步促进蜕膜化mESCs中Dtprp(P<0.001)、Vegfa(P=0.021)和Vegfr2(P=0.012)的mRNA表达,同时Vegfa蛋白水平也显著增加(P=0.001);敲减Opn后,则可降低蜕膜化mESCs中Dtprp(P=0.009)、Vegfa(P=0.007)和Vegfr2(P=0.001)的mRNA表达,VEGFA蛋白的表达水平也相应降低(P<0.001)。结论OPN参与调节小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化进程及功能。

颗粒子宫腺细胞的分离、纯化与细胞化学研究

胰蛋白酶消化小鼠子宫腺细胞区，制成单细胞悬液，滴片后进行细胞学及细胞化学研究。结果：有多种类型细胞存在于悬液中，其中中等大小细胞（直径２０μｍ左右）大部分为颗粒子宫腺细胞（ＧｒａｎｕｌａｔｅｄＭｅｔｒｉａｌＧｌａｎｄＣｅｌｌｓ，ＧＭＧｃｅｌｌｓ）。ＧＭＧ细胞约占所有细胞的５０％。利用Ｐｅｒｃｏｌｌ非连续性密度梯度离心可以提高ＧＭＧ细胞的纯度，使之达８０％以上。细胞化学研究显示ＧＭＧ细胞含ＡＣＰ，ＮＳＥ，ＬＮＡｓｅ及糖蛋白成份。

小鼠非手术胚胎移植方法

小鼠作为发育和生殖生物学研究中最常见的模式动物,其研究的主要环节离不开胚胎移植技术。小鼠非手术胚胎移植法是将供体小鼠的胚胎经子宫颈移植到受体小鼠子宫内的一种移植方法。它与手术法相比,简单快捷,对小鼠的损伤小,大大简化了胚胎移植的操作过程。