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EV71感染诱导小鼠海马细胞发生自噬的作用研究
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作者 刘海沣 张玉 +2 位作者 贺晓丽 周远涛 李莉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期787-794,共8页
肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引发手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)儿童死亡的主要致病病原体。其引发的重症手足口病可出现病毒性脑膜炎、神经源性肺水肿等严重的神经系统并发症,但具体致病机制尚不明确。自噬(auto... 肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引发手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)儿童死亡的主要致病病原体。其引发的重症手足口病可出现病毒性脑膜炎、神经源性肺水肿等严重的神经系统并发症,但具体致病机制尚不明确。自噬(autophagy)是一种在进化中保守的、溶酶体依赖的分解代谢反应途径,可通过自噬途径清除细胞内细菌、病毒等,发挥天然免疫效应。本文旨在研究EV71感染诱导小鼠海马细胞发生自噬的作用机制,以期为探讨发现其关键致病机制找到新的突破口。本研究主要采用小鼠海马细胞作为EV71感染的神经细胞,分别采用电镜、流式细胞术、Western Blot、蚀斑实验、激光共聚焦显微镜等技术对其作用机制展开研究。EV71感染后,在小鼠海马细胞内可观察到自噬小体的产生,并且随感染时间延长,自噬分子LC3-II蛋白持续高表达;在加入自噬抑制剂后,自噬被抑制,说明EV71感染可诱导小鼠海马细胞发生自噬;此外还发现随着感染时间延长,细胞内EV71滴度显著增加;细胞内自噬小体上有EV71蛋白聚集;而且CTAB量子点标记的EV71-RNA与EGFP-LC3标记的自噬小体能够发生共定位,说明EV71感染与细胞内自噬发生可能存在很大的相关性,推测其可能利用细胞内自噬机制发生免疫逃逸。因此,EV71感染可以诱导小鼠海马细胞发生自噬,且病毒在细胞内的复制可能与细胞内自噬发生密切相关。本研究将为探索EV71关键致病机制提供新的参考依据及研究思路。 展开更多
关键词 肠道病毒71型(EV71) 小鼠海马细胞 自噬 手足口病(HFMD)
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突触融合蛋白17改善Aβ31-35诱导的小鼠海马神经细胞死亡 被引量:1
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作者 王宁 周秀雅 +5 位作者 何星鸿 张立飞 李朋佳 师姝 王丽 王晓晖 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第17期1712-1719,共8页
目的探究突触融合蛋白17(syntaxin17,STX17)在Aβ诱导的小鼠海马神经细胞死亡中的作用。方法基于WGCNA方法选取与阿尔茨海默病显著相关的基因,与自噬基因库和SNARE家族基因取交集筛选关键基因;C57BL/6小鼠海马组织中注射浓度为1 g/L的A... 目的探究突触融合蛋白17(syntaxin17,STX17)在Aβ诱导的小鼠海马神经细胞死亡中的作用。方法基于WGCNA方法选取与阿尔茨海默病显著相关的基因,与自噬基因库和SNARE家族基因取交集筛选关键基因;C57BL/6小鼠海马组织中注射浓度为1 g/L的Aβ31-35和使用终浓度为5μmol/L Aβ31-35处理HT22海马神经细胞,采用Western Blot检测STX17、LC3Ⅱ、P62的蛋白表达情况;CCK-8法检测Aβ31-35处理的HT22海马神经细胞存活率;慢病毒介导HT22海马神经细胞STX17过表达后,Western blot检测Aβ31-35处理后LC3Ⅱ、P62的蛋白表达情况。结果与阿尔茨海默病显著相关的Salmon和Black模块分别与自噬基因库和SNARE亚家族取交集获取关键基因STX17。与对照组比较,经Aβ31-35处理后,HT22细胞细胞存活率[(81.81±11.65)%]明显下降(P<0.05),小鼠海马组织和HT22细胞中STX17蛋白表达均显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ和P62蛋白表达均显著升高(P<0.05);慢病毒介导HT22海马神经细胞STX17过表达后,显著逆转Aβ31-35诱导的LC3Ⅱ、P62的蛋白表达上调(P<0.05),并改善Aβ31-35诱导的HT22海马神经细胞存活率下降[(101.91±13.81)%vs(79.21±8.75)%,P<0.05]。结论STX17通过促进自噬来改善Aβ诱导的小鼠海马神经细胞死亡。 展开更多
关键词 STX17 小鼠海马神经细胞 细胞死亡 自噬
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苦参碱对缺氧/复氧小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡的影响及机制研究 被引量:1
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作者 张富慧 张自艳 +2 位作者 郝静峰 罗玲 王志海 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第2期187-191,共5页
目的探讨苦参碱对缺氧/复氧(H/R)小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路的影响。方法将处于对数生长期的HT22细胞分为对照组、H/R组及苦参碱低、中、高浓度组。对照组HT22细胞用... 目的探讨苦参碱对缺氧/复氧(H/R)小鼠海马神经元HT22细胞活力、凋亡及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸激酶受体B(TrkB)信号通路的影响。方法将处于对数生长期的HT22细胞分为对照组、H/R组及苦参碱低、中、高浓度组。对照组HT22细胞用无血清DMEM培养基在正常环境下培养28 h;H/R组HT22细胞在缺氧培养箱中维持4 h后在常氧条件下培养24 h;苦参碱低、中、高浓度组的H/R处理同H/R组,同时给予浓度分别为10、20、30μmol/L的苦参碱进行干预,培养24 h。检测HT22细胞活力、凋亡情况及凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)]和BDNF/TrkB信号通路蛋白水平。结果与对照组比较,H/R组HT22细胞吸光度值、存活率、Bcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平降低,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与H/R组比较,苦参碱低、中、高浓度组HT22细胞吸光度值、存活率、Bcl-2、BDNF、TrkB蛋白水平依次升高,细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈浓度依赖性。结论苦参碱能减轻H/R导致的神经元HT22细胞活力的降低,抑制HT22细胞凋亡,其机制可能与激活BDNF/TrkB信号通路有关。 展开更多
关键词 苦参碱 缺氧/复氧 小鼠海马神经元HT22细胞 脑源性神经营养因子/酪氨酸激酶受体B信号通路
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蛋白磷酸酶2A在氯化镉致小鼠海马神经元细胞tau蛋白过度磷酸化及β淀粉样蛋白沉积中的作用 被引量:1
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作者 岑育芳 杨玲玲 +5 位作者 李文学 漆光紫 王一涵 韦俊宏 唐玉航 庞雅琴 《广西医学》 CAS 2023年第4期423-428,共6页
目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)在氯化镉致小鼠海马神经元HT-22细胞tau蛋白过度磷酸化及β淀粉样蛋白(Aβ)沉积中的作用。方法采用不同浓度(0μmol/L、1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L、10.00μmol/L、20.00μmol/L)氯化镉对HT-22... 目的探讨蛋白磷酸酶2A(PP2A)在氯化镉致小鼠海马神经元HT-22细胞tau蛋白过度磷酸化及β淀粉样蛋白(Aβ)沉积中的作用。方法采用不同浓度(0μmol/L、1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L、10.00μmol/L、20.00μmol/L)氯化镉对HT-22细胞进行染毒72 h,采用CCK-8法测定细胞活力,以筛选后续实验的染毒浓度。将HT-22细胞分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别给予0μmol/L、1.25μmol/L、2.50μmol/L、5.00μmol/L氯化镉染毒,72 h后在倒置显微镜下观察细胞形态,并采用Western blot检测细胞中β淀粉样蛋白前体(APP)、tau蛋白、磷酸化tau蛋白181(Thr181)、PP2A-Aα蛋白、PP2A-Aβ蛋白、PP2A-C蛋白表达水平。结果(1)染毒72 h后,与经0μmol/L氯化镉染毒后的细胞相比,经不同浓度氯化镉染毒后的细胞活力均下降(均P<0.05)。选择细胞存活率为80%左右的氯化镉浓度作为后续实验最高染毒浓度。(2)染毒72 h后,镜下观察发现对照组细胞呈梭形,不同剂量组细胞呈梭形及多边形;与对照组相比,不同剂量组细胞间隙逐渐增宽,且在高剂量组中可见少量漂浮细胞。与对照组相比,低剂量组、中剂量组HT-22细胞的tau蛋白表达水平升高,中剂量组、高剂量组HT-22细胞的Thr181和APP蛋白表达水平升高,各剂量组PP2A-C蛋白表达水平均降低,高剂量组PP2A-Aα、PP2A-Aβ蛋白表达水平下降(均P<0.05)。结论镉可能通过下调PP2A亚基的表达,以诱导小鼠海马神经元细胞tau蛋白过度磷酸化和Aβ生成,进而产生神经毒性。 展开更多
关键词 镉暴露 神经毒性 氯化镉 蛋白磷酸酶2A TAU蛋白 β淀粉样蛋白 小鼠海马神经元细胞
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绞股蓝总苷对缺氧/复氧小鼠海马HT22细胞PAK1、CREB表达及凋亡的影响 被引量:1
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作者 祁敏芳 吴慧娟 +2 位作者 郑贞苍 徐挺立 林露 《浙江医学》 CAS 2020年第22期2388-2392,2407,共6页
目的探讨绞股蓝总苷(Gyp)对缺氧/复氧(O/R)小鼠海马HT22细胞p21活化蛋白激酶1(PAK1)、环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达及凋亡的影响。方法将小鼠海马HT22细胞分为正常对照组、O/R组、70 mg/L Gyp O/R组、85 mg/L Gyp O/R组和100 m... 目的探讨绞股蓝总苷(Gyp)对缺氧/复氧(O/R)小鼠海马HT22细胞p21活化蛋白激酶1(PAK1)、环磷酸腺苷反应单元结合蛋白(CREB)表达及凋亡的影响。方法将小鼠海马HT22细胞分为正常对照组、O/R组、70 mg/L Gyp O/R组、85 mg/L Gyp O/R组和100 mg/L Gyp O/R组后,4组细胞建立O/R模型。观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western blot法测定各组B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PAK1、CREB蛋白表达水平。结果正常对照组细胞贴壁生长,细胞膜光滑、完整,胞体折光性强,细胞突触明显,突触之间相互交织成网状;O/R组细胞贴壁不紧,细胞膜皱缩,胞质凝聚,细胞胞体突触明显减少,细胞间连接大量减少;70 mg/L Gyp O/R组、85 mg/L Gyp O/R组、100 mg/L Gyp O/R组细胞上述现象依次缓解。与正常对照组相比,O/R组细胞凋亡率、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达水平均升高(均P<0.05),Bcl-2、PAK1、CREB蛋白表达水平均降低(均P<0.05);与O/R组相比,70 mg/L Gyp O/R组、85 mg/L Gyp O/R组、100 mg/L Gyp O/R组细胞凋亡率、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达水平依次降低(均P<0.05),Bcl-2、PAK1、CREB蛋白表达水平依次升高(均P<0.05)。结论Gyp可能通过上调小鼠海马HT22细胞PAK1、CREB蛋白表达水平来抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 绞股蓝总苷 缺氧/复氧 小鼠海马HT22细胞 p21活性蛋白激酶1 环磷酸腺苷反应单元结合蛋白
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温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究 被引量:2
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作者 马小娟 孟霜 +4 位作者 冯振宇 史敏 王鑫鑫 周晓荣 赵杰 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2022年第9期3504-3515,共12页
目的观察温阳解郁颗粒(Wenyang Jieyu granule,WYJY)对皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导损伤型小鼠海马神经细胞(TH22 cell)的保护作用,基于脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B... 目的观察温阳解郁颗粒(Wenyang Jieyu granule,WYJY)对皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导损伤型小鼠海马神经细胞(TH22 cell)的保护作用,基于脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B,TrkB)/细胞外信号调节蛋白激酶(Extra cellular regulated protein kinases,ERK)信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型,以不同浓度的WYJY和氟西汀(Fluoxetine,FXT)含药血清作用于模型细胞,细胞增殖-毒性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分析细胞活性,倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)、实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)法检测神经细胞内凋亡因子(BCL2-Associated X,Bax)、抗凋亡因子(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶(Phospho-p90RSK,RSK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果在浓度为459.5μmol·L^(-1)的CORT作用24 h后,HT22细胞的活性抑制率达到50%,在此条件作用下细胞形态结构损伤明显,凋亡程度严重,细胞上清中BDNF的含量显著减少(P<0.05),细胞内凋亡相关因子Bcl-2/Bax的比值明显降低(P<0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低(P<0.01);以5%的浓度为2.85 g·kg-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后,HT22细胞存活率明显提升(P<0.01),细胞结构的损伤明显改善,细胞凋亡程度减轻,细胞外BDNF的含量显著升高(P<0.05),细胞内Bcl-2/Bax比值显著上调(P<0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升(P<0.05,P<0.01)。结论温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路,放大CREB信号传导,影响Bcl-2、BDNF水平,可能是其保护海马神经元,发挥抗抑郁疗效的重要机制。 展开更多
关键词 温阳解郁颗粒 小鼠海马神经细胞 皮质酮 BDNF/TrkB/ERK信号通路 作用机制
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卡马西平减轻HT22细胞炎性损伤及机制研究
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作者 杨凌凯 戴伯坚 +5 位作者 李响 黄国永 陈鑫亮 蔡子耀 程朗朗 赵飞飞 《现代实用医学》 2024年第6期746-750,共5页
目的探究卡马西平减轻脂多糖(LPS)诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞炎性损伤的作用效果及机制。方法以HT22细胞为研究对象,体外传代培养,以10、20、50μg/ml LPS进行试验,确定LPS对HT22细胞作用最佳浓度;将HT22细胞分为对照组(NC组,正常培... 目的探究卡马西平减轻脂多糖(LPS)诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞炎性损伤的作用效果及机制。方法以HT22细胞为研究对象,体外传代培养,以10、20、50μg/ml LPS进行试验,确定LPS对HT22细胞作用最佳浓度;将HT22细胞分为对照组(NC组,正常培养),LPS组(加入20μg/ml LPS进行培养),LPS+卡马西平组(加入20μg/ml LPS和50μg/ml卡马西平进培养)3组,以CCK-8实验、DAPI染色法检测HT22增殖抑制率及凋亡率;采用H2DCFH-DA试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)含量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测HT22细胞上清液白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-17(IL-17)水平,Western blot法检测HT22细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路相关蛋白表达。结果20μg/ml LPS作用于HT22细胞48h,细胞增殖抑制率接近于50%。LPS组、LPS+卡马西平组细胞活性均低于NC组(均P<0.05),LPS+卡马西平组细胞活性高于LPS组(P<0.05)。LPS组、LPS+卡马西平组细胞凋亡率均高于NC组(均P<0.05),LPS+卡马西平组细胞凋亡率低于LPS组(P<0.05)。3组ROS差异有统计学意义(P<0.05),LPS组>LPS+卡马西平组>NC组(均P<0.05)。LPS组、LPS+卡马西平组HT22细胞上清液IL-1β、TNF-α、IL-8及IL-17水平均高于NC组(均P<0.05),而LPS+卡马西平组上述因子水平均低于LPS组(均P<0.05)。Western blot结果显示:与NC组相比,LPS组、LPS+卡马西平组HT22细胞中NLRP3、IL-1β、凋亡相关微粒蛋白(ASC)及pro-caspase1表达均显著上调(均P<0.05),而与LPS组相比,LPS+卡马西平组上述因子的表达均显著下调(均P<0.05)。结论卡马西平可通过介导NLRP3信号通路来调节细胞活性和细胞凋亡的平衡,进而减轻LPS诱导的HT22细胞的炎性损伤。 展开更多
关键词 卡马西平 脂多糖 小鼠海马神经元细胞 炎性损伤 NLRP3信号通路
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蔷薇红景天总黄酮对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的保护作用 被引量:3
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作者 马俊杰 阿孜古丽·阿里木 +4 位作者 王启文 穆巴热科·吾普尔 王晓梅 胡君萍 王新玲 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第23期9211-9219,共9页
目的探讨蔷薇红景天总黄酮提取物(total flavonoids extract,TFE)、纯化物(total flavonoids purification,TFP)及其活性成分草质素对β-淀粉样蛋白25-35(amyloid β-protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的小鼠海马神经元(hippocampal neuro... 目的探讨蔷薇红景天总黄酮提取物(total flavonoids extract,TFE)、纯化物(total flavonoids purification,TFP)及其活性成分草质素对β-淀粉样蛋白25-35(amyloid β-protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的小鼠海马神经元(hippocampal neuronal cell line,HT22)细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤,建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)炎症细胞模型,然后将HT22细胞分为空白组、炎症模型组(15μmol/L Aβ_(25-35))、阳性对照盐酸多奈哌齐组(12.5μmol/L)、不同质量浓度TFE(12.5、25、50μg/mL)和TFP(6.25、12.5、25μg/mL)干预组、草质素(5、10、20μmol/L)干预组,采用倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定HT22细胞存活率;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;膜联蛋白U-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法检测细胞凋亡;酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的水平。结果与空白组比较,模型组神经元细胞变圆,细胞核皱缩,数量减少,细胞间隙增大,存活率显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.05);与模型组比较,蔷薇红景天TFE、TFP和草质素组的高、中、低剂量组均能改善细胞形态,减少细胞受损,提高细胞存活率,显著降低细胞培养液上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和COX-2的水平(P<0.05),且成剂量依赖性。结论蔷薇红景天TFE和TFP及其活性成分草质素对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤具有较好保护作用,其机制可能与拮抗Aβ_(25-35)的细胞毒性、保护神经元、抑制HT22细胞炎症的发生有关。 展开更多
关键词 蔷薇红景天 总黄酮 Β-淀粉样蛋白25-35 小鼠海马神经元细胞 抗炎作用
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乌头碱致HT22细胞凋亡的研究 被引量:1
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作者 刘奕伶 唐丽辉 +7 位作者 赵文星 王辉 郭梓豫 吴可欣 张云昊 莫重辉 赵宝玉 路浩 《动物医学进展》 北大核心 2022年第8期69-72,共4页
为探讨乌头碱对小鼠海马神经细胞(hippocampal neuronal cell line,HT22)凋亡的影响,用不同浓度乌头碱处理体外培养的HT22细胞不同时间后,用MTT法检测HT22细胞的存活率,荧光显微镜观察HT22细胞核的形态学变化,流式细胞术检测HT22细胞凋... 为探讨乌头碱对小鼠海马神经细胞(hippocampal neuronal cell line,HT22)凋亡的影响,用不同浓度乌头碱处理体外培养的HT22细胞不同时间后,用MTT法检测HT22细胞的存活率,荧光显微镜观察HT22细胞核的形态学变化,流式细胞术检测HT22细胞凋亡率。结果显示,与对照组相比,乌头碱可以极显著降低HT22细胞的存活率(P<0.01);Hoechst 33258荧光染色后,HT22细胞核呈现浓缩、碎裂及新月形,呈现明显细胞凋亡变化;各试验组HT22细胞凋亡率呈明显上升趋势,组间差异显著(P<0.05),且具有明显剂量-效应关系。表明乌头碱能诱导HT22细胞发生凋亡,为后续深入研究乌头碱毒性作用奠定基础。 展开更多
关键词 乌头碱 小鼠海马神经细胞 细胞存活率 荧光染色 细胞凋亡率
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花椒中的异丁基酰胺化合物及其对HT22海马神经元铁死亡的抑制作用研究 被引量:14
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作者 张凯峰 贺鹏杨 何达海 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期18-22,56,共6页
对四川泸定县花椒的化学成分进行研究,以期寻找新的先导化合物。采用硅胶柱色谱、高效液相色谱等方法从花椒的70%盐酸水提取物中分离并鉴定了8个异丁基酰胺类化合物。通过高分辨质谱、核磁共振谱与文献对照,它们被鉴定为花椒素A(1)、hyd... 对四川泸定县花椒的化学成分进行研究,以期寻找新的先导化合物。采用硅胶柱色谱、高效液相色谱等方法从花椒的70%盐酸水提取物中分离并鉴定了8个异丁基酰胺类化合物。通过高分辨质谱、核磁共振谱与文献对照,它们被鉴定为花椒素A(1)、hydroxy-α-sanshool(2)、tetrahydrobungeanool(3)、hydroxy-γ-isosanshool(4)、hydroxy-γ-sanshool(5)、bungeanool(6)、γ-sanshool(7)、isobungeanool(8)和β-谷甾醇(9)。化合物1为首次从该植物中分离得到。化合物3对erastin诱导的小鼠海马神经元细胞系HT22细胞铁死亡具有明显的抑制作用,IC 50为4.08μM。 展开更多
关键词 花椒 异丁基酰胺 小鼠海马神经元细胞 铁死亡
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炎症因子诱导HT22细胞凋亡模型的建立
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作者 陈洁芸 付燕燕 +4 位作者 王倩 王思 卢斌 杨荣礼 董瑞国 《徐州医科大学学报》 CAS 2018年第1期12-16,共5页
目的构建相关炎症因子诱导HT22细胞的凋亡模型,为进一步探索神经炎症致神经元凋亡的发病机制和抗细胞凋亡提供理论基础。方法采用BV2小鼠小胶质细胞及HT22小鼠海马神经元细胞系。0.5、1.0μg/ml的脂多糖(LPS)处理BV2细胞0、6、12... 目的构建相关炎症因子诱导HT22细胞的凋亡模型,为进一步探索神经炎症致神经元凋亡的发病机制和抗细胞凋亡提供理论基础。方法采用BV2小鼠小胶质细胞及HT22小鼠海马神经元细胞系。0.5、1.0μg/ml的脂多糖(LPS)处理BV2细胞0、6、12、24h,检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)等炎症因子的水平。将上述BV2细胞的上清液孵育HT22细胞不同时间。然后,CCK-8法检测HT22细胞的存活率,AnnexinV检测HT22细胞的凋亡情况。结果与0.5、1.0μg/mlLPS处理0h后相比,处理6、12、24h后BV2细胞可分泌IL-6、TNF、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、IL-10。1.0μg/mlLPS刺激BV2细胞24h后产生的上清液对HT22细胞的存活率与处理0h相比有显著影响,差异有统计学意义(P〈0.05);与处理0h相比,处理12、24、48h后的HT22细胞存活率均数分别下降16.9%、40.12%、77.22%。HT22细胞经BV2细胞上清液处理12、24、48h后的细胞凋亡率高于未经处理的细胞,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.001)。结论1.0μg/mlLPS刺激BV2细胞24h后所得培养基上清液处理HT22细胞24h可作为模拟神经炎症促神经元细胞凋亡的理想模型。 展开更多
关键词 脂多糖 小胶质细胞 炎症 小鼠海马神经元细胞 凋亡
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基于网络药理学和实验研究槲皮素治疗阿尔兹海默病的机制
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作者 巴音桑 吉米丽汗·司马依 +1 位作者 艾尼瓦尔·吾买尔 周文婷 《西北药学杂志》 CAS 2024年第2期53-60,共8页
目的通过网络药理学和实验验证和探究槲皮素(quercetin)治疗阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用机制。方法通过TCMSP、Swiss Target Prediction和Uniprot数据库筛选槲皮素对应的作用靶点。通过TCMIP V2.0、TCMSP、TTD、DrugB... 目的通过网络药理学和实验验证和探究槲皮素(quercetin)治疗阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用机制。方法通过TCMSP、Swiss Target Prediction和Uniprot数据库筛选槲皮素对应的作用靶点。通过TCMIP V2.0、TCMSP、TTD、DrugBank、CTD和DisGeNET数据库得到与AD发病机制相关的靶点,并与槲皮素作用靶点进行映射,将得到的交集靶点作为槲皮素治疗AD的靶点。通过String数据库、CytoNCA和MCODE插件对槲皮素治疗AD的靶点进行各蛋白之间的相互作用研究,作用强的靶点为槲皮素治疗AD的关键靶点。将槲皮素治疗AD的靶点通过Cytoscape 3.8.2软件的ClueGO插件和DAVID数据库进行GO和KEGG信号通路富集分析。用蛋白印迹法(Western blotting)和实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)对预测的通路进行初步验证。结果筛选出与槲皮素作用的靶点有230个,与442个AD疾病靶点重合的靶点有43个,该靶点涉及多个生物学过程和54条信号通路。通过聚类分析和网络拓扑参数,得到槲皮素治疗AD的6个关键靶点,包括糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、淀粉样βA4蛋白(amyloidβA4 protein,APP)、磷脂酰肌醇3-激酶调节亚单位α(phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunitα,PIK3R1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、胰岛素样生长因子Ⅱ(insulinlike growth factorⅡ,IGF2)和转化生长因子β1(transforming growth factor beta-1,TGFβ1);细胞实验结果表明,槲皮素可提高AD细胞模型中的蛋白激酶B(protein kinase B,AKT),GSK-3βmRNA水平,与调控AKT/GSK-3β通路的磷酸化有关。结论槲皮素可增强损伤神经细胞的稳定性、改善细胞膜的通透性,从而稳定细胞内环境。该作用可能与槲皮素提高AD细胞模型中的AKT、GSK-3β等mRNA水平,调控AKT/GSK-3β通路的磷酸化有关。 展开更多
关键词 槲皮素 网络药理学 阿尔兹海默病 β淀粉样蛋白25-35(Aβ_(25-35)) 小鼠海马神经元细胞
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7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘诱发小鼠海马神经元HT22细胞铁死亡及其机制
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作者 李晓卉 徐昭梦 +5 位作者 孙宏宇 吕懿 佟晓敏 冀婷玉 何慧 郑金平 《环境与职业医学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期433-440,共8页
[背景]苯并[a]芘(BaP)具有神经毒性,可诱发人和动物海马神经元死亡从而导致空间学习记忆功能障碍,但其机制尚不清楚。[目的]观察BaP活性代谢物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)诱发小鼠海马神经元HT22细胞铁死亡的发生规律,初步探讨... [背景]苯并[a]芘(BaP)具有神经毒性,可诱发人和动物海马神经元死亡从而导致空间学习记忆功能障碍,但其机制尚不清楚。[目的]观察BaP活性代谢物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)诱发小鼠海马神经元HT22细胞铁死亡的发生规律,初步探讨其潜在机制,为BaP神经毒性机制研究提供依据。[方法]选用小鼠海马神经元HT22细胞,分为溶剂对照组和低、中、高浓度BPDE染毒组(0.25、0.50、0.75μmol·L^(-1))。CCK8法测定细胞存活率。光镜和电镜观察细胞形态及超微结构。荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平和Fe^(2+)水平。试剂盒检测细胞内铁、4-羟基壬烯酸(4-HNE)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平。Western blotting法检测铁死亡特征蛋白酰基辅酶A合成长链家族成员4(ACSL4)、环氧合酶2(COX2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达水平。用铁死亡抑制剂20μmol·L^(-1)去铁胺(DFO)和10μmol·L^(-1)3-氨基-4-环己基氨基苯甲酸乙酯(Fer-1)进行干预,观察对各浓度BPDE染毒组细胞存活率和相关铁死亡特征指标和蛋白表达水平的影响。[结果]随着BPDE染毒浓度的增加,HT22细胞存活率逐渐下降,各BPDE染毒组细胞存活率均明显低于溶剂对照组(P<0.01)。光镜下可见高浓度BPDE组细胞数量明显减少,形态萎缩变形,突触减少;电镜下可见高浓度BPDE组HT22细胞表现出线粒体皱缩,嵴减少,线粒体膜密度增加。与溶剂对照组相比,高浓度染毒组细胞内脂质ROS、Fe^(2+)、4-HNE及MDA水平明显增加(P<0.01);GSH、GSH-PX水平明显降低(P<0.01),ASCL4、COX2蛋白表达水平明显增加(P<0.01),SLC7A11、GPX4蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。铁死亡抑制剂DFO、Fer-1可明显逆转高浓度BPDE组细胞的存活率(P<0.01)、铁死亡特征指标(ROS、Fe^(2+)、4-HNE、MDA、GSH、GSH-PX水平)(P<0.01)以及铁死亡相关蛋白水平的表达(ACSL4、COX2、SLC7A11、GPX4)(P<0.01)。[结论]BPDE可诱发小鼠海马神经元HT22细胞铁死亡,其机制可能与抑制SLC7A11/GSH/GPX4轴及诱发细胞铁离子代谢紊乱有关。 展开更多
关键词 7 8-二羟-9 10-环氧苯并[a]芘 小鼠海马神经元细胞 HT22细胞 铁死亡
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重组人Neuritin蛋白生物学活性的定量分析方法 被引量:1
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作者 王宿洁 宋丹丹 +4 位作者 李煜 孟平平 朱金辉 朱礼彦 黄瑾 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第5期611-619,共9页
目的建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin(rhNeuritin)蛋白生物学活性的新方法。方法首先建立小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)维持培养条件。在此条件下,明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rh... 目的建立一种快速高效地定量评价重组人Neuritin(rhNeuritin)蛋白生物学活性的新方法。方法首先建立小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)维持培养条件。在此条件下,明确rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间。根据11组不同浓度梯度的rhNeuritin蛋白对HT22细胞存活的影响,建立标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活的量效关系曲线;并确定rhNeuritin蛋白的检测范围。在rhNeuritin蛋白的检测限内,根据标准品rhNeuritin蛋白与HT22细胞存活之间的量效关系的拟合曲线,制订标准品蛋白的活性单位,建立了针对rhNeuritin蛋白生物学活性的评价体系。利用两批测试品rhNeuritin蛋白,对该方法的重复性和准确性进行了验证。结果HT22细胞的维持培养液的浓度为0.4%FBS,rhNeuritin蛋白作用于HT22细胞的最佳检测时间为72 h,rhNeuritin蛋白浓度在62.5~1000 ng·mL^(-1)的检测限内,HT22细胞的存活与rhNeuritin蛋白的浓度呈正相关。在rhNeuritin蛋白的检测线内,拟定标准品的EC50为一个活性单位。两组测试品rhNeuritin蛋白的量效关系曲线与标准品呈现相同趋势,3者R 2均大于0.9,说明该方法的重复性很好。通过拟订的标准品的活性单位,计算得到500 ng·mL^(-1)时测试品1和测试品2的活性单位分别为1.059、1.069,而实验实际测得测试品1和测试品2的活性单位分别为1.074和1.088,与测定的活性单位相比,两组测试品计算得到的活性单位的误差小于2%,说明该实验方法具有较好的准确性。结论成功建立了重组人Neuritin蛋白的定量检测方法,并制定了明确的活性单位。 展开更多
关键词 重组人Neuritin蛋白 小鼠海马神经元HT22细胞 细胞存活率 活性单位
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越鞠甘麦大枣汤对皮质酮诱导损伤的HT22细胞的神经保护作用 被引量:3
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作者 葛渴敏 薛文达 王薇 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期2334-2337,共4页
目的探讨越鞠甘麦大枣汤对皮质酮诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的神经保护作用。方法利用高浓度皮质酮(CORT)构建HT22细胞的损伤模型后,给予不同浓度的越鞠甘麦大枣汤含药血清,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HT22细胞的存活率,以及E... 目的探讨越鞠甘麦大枣汤对皮质酮诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的神经保护作用。方法利用高浓度皮质酮(CORT)构建HT22细胞的损伤模型后,给予不同浓度的越鞠甘麦大枣汤含药血清,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HT22细胞的存活率,以及ELISA法测定乳酸脱氢酶(LDH)浓度并分析LDH漏出量。结果高浓度的CORT使HT22细胞存活率明显下降、LDH漏出量显著增加。1%,5%,10%的越鞠甘麦大枣汤含药血清均能显著提高高浓度CORT条件下HT22细胞的存活率,并减少LDH的漏出量,从而减少细胞损伤。结论越鞠甘麦大枣汤对CORT诱导的HT22细胞损伤具有显著的保护作用。 展开更多
关键词 越鞠甘麦大枣汤 皮质酮 小鼠海马神经元细胞 神经保护
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基于P38/JNK通路探讨七福饮保护高糖诱导HT22细胞损伤的作用机制
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作者 史磊磊 张静文 +6 位作者 王欣 李溪 张雪航 韩朝军 王斌 卫昊 刘继平 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2023年第10期48-53,共6页
目的:研究七福饮含药血清对高糖诱导作用下小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)的损伤保护作用。方法:确定高糖培养液最适造模浓度;将雄性大鼠预留10只作为正常对照组,其余20只灌胃七福饮8.6 g/kg。灌胃7 d后大鼠腹主动脉采血,制备浓度为5%、... 目的:研究七福饮含药血清对高糖诱导作用下小鼠海马神经元细胞(HT22细胞)的损伤保护作用。方法:确定高糖培养液最适造模浓度;将雄性大鼠预留10只作为正常对照组,其余20只灌胃七福饮8.6 g/kg。灌胃7 d后大鼠腹主动脉采血,制备浓度为5%、10%、15%七福饮含药血清;将各浓度含药血清作用于HT22细胞48 h后以细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞活力;以CCK-8法检测七福饮含药血清对高糖诱导下HT22细胞的活力;以流式细胞术Annexin-V PI细胞双染法检测HT22细胞凋亡率;提取HT22细胞蛋白,聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)试剂盒测定蛋白浓度;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测高糖诱导下HT22细胞相关蛋白表达。结果:选择75 mmol/L高糖干预细胞48 h作为最适造模浓度。与正常对照组相比,模型对照组细胞活力显著降低,细胞密度显著降低,细胞凋亡率显著升高,磷酸化JNK、P38蛋白、BAX、Caspase-3蛋白表达显著上调,BCL2蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,5%、10%七福饮含药血清组细胞活力均显著升高,细胞密度显著升高,细胞凋亡率显著下降(P<0.01);半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、磷酸化P38蛋白(p-P38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达明显下调(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:七福饮可通过调节P38/c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)信号通路,从而改善高糖诱导的HT22细胞损伤和凋亡。 展开更多
关键词 七福饮 2型糖尿病认知障碍 小鼠海马神经元细胞 细胞凋亡 P38/c-Jun氨基末端激酶通路
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地塞米松诱导HT22细胞中枢胰岛素抵抗模型构建及潜在机制研究
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作者 王秀玲 黄雪飞 +1 位作者 文强 韦柳萍 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期163-167,共5页
目的:研究地塞米松诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞中枢胰岛素抵抗细胞模型的关键参数及其调控胰岛素受体底物1/磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶3β/TAU(IRS1/PI3K/AKT/GSK3β/TAU)通路的内在机制。方法:通过设置不同浓度... 目的:研究地塞米松诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞中枢胰岛素抵抗细胞模型的关键参数及其调控胰岛素受体底物1/磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶3β/TAU(IRS1/PI3K/AKT/GSK3β/TAU)通路的内在机制。方法:通过设置不同浓度梯度的地塞米松作用于HT22细胞,测定葡萄糖消耗率,筛选中枢胰岛素抵抗模型的最佳造模条件,过碘酸-Schiff染色法验证模型细胞的糖原沉积,并通过实时荧光定量PCR和免疫印迹检测其Irs1、Pi3k、Akt、Gsk3b、Tau mRNA和蛋白的表达情况。结果:2μmol/L的地塞米松作用HT22细胞24 h,可将HT22细胞的葡萄糖消耗率降到最低,且明显抑制其糖原合成量,显著下调Irs1、Pi3k、Akt mRNA的表达,明显上调Gsk3b、Tau的mRNA表达(P<0.01),降低p-PI3K/PI3K、p-AKT(Ser473)/AKT的磷酸化水平,升高p-IRS1(Ser612)/IRS1、p-GSK3β(Ser9)/GSK3β、p-TAU(Ser404)/TAU的磷酸化表达(P<0.01),该模型在48 h内保持稳定。结论:采用地塞米松成功诱导了HT22细胞建立中枢胰岛素抵抗模型,并明晰了该模型通过调控IRS1/PI3K/AKT活性,刺激GSK3β的磷酸化,从而促进TAU蛋白磷酸化的内在机制。 展开更多
关键词 地塞米松 小鼠海马神经元细胞 中枢胰岛素抵抗模型
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Effects of Electroacupuncture on Hippocampal and Cortical Apoptosis in A Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion Injury 被引量:8
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作者 赵建新 田元祥 +2 位作者 肖红玲 胡满香 陈伟然 《Journal of Traditional Chinese Medicine》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期349-355,共7页
Objective: To observe the effects of electroacupuncture on hippocampal and cortical apoptosis in a mouse model of cerebral ischemia-reperfusion injury. Methods: Mouse models established by repeated cerebral ischemia-r... Objective: To observe the effects of electroacupuncture on hippocampal and cortical apoptosis in a mouse model of cerebral ischemia-reperfusion injury. Methods: Mouse models established by repeated cerebral ischemia-reperfusion, followed by electroacupuncture at Shenshu, Geshu, and Baihui points. The control group mice were intragastrically administered Hydergine. On day 1 and 7 post-treatment, hippocampal and cortical apoptosis was detected by terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL), and apoptosis images in the hippocampal CA1 zone and cortical area were analyzed. Results: In the model group, apoptotic cells were detected one day after treatment and some cellular fibers were disarrayed. By day 7 post-treatment, there was an increase in the number of apoptotic cells in the hippocampal CA1 region. In addition, there were apoptotic cells in the cortical area, the cortical layers were thinner with localized neuronal loss and sieve-like lymphocyte infiltration, as well as glial cell proliferation and visible infarct lesions. However, in the Hydergine and electroacupuncture groups, there was a small number of apoptotic cells. At 7 days post-treatment in the model group, field number, numerical density on area, and surface density were increased. However, in the Hydergine and electroacupuncture groups these parameters were decreased (P<0.01), with a significant difference between the two treatment groups (P<0.01). Conclusion: Electroacupuncture treatment inhibited apoptosis and provided neuroprotection. 展开更多
关键词 electroacupuncture cerebral ischemia-reperfusion hippocampus cortex neurons apoptosis image analysis
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