运用小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验测定4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐的遗传毒性

目的研究运用小鼠淋巴瘤试验(MLA)对4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐(IHT-PI820)作为食品外包装上油墨使用安全性的评价。方法采用L5178Y细胞,处理3h,表达48h后测定突变细胞频率及小集落比例。同时进行添加和未添加代谢活化系统的试验,每个条件下设6个剂量组,阴性(二甲亚砜)、阳性(甲磺酸甲酯或环磷酰胺)对照组及IHT-PI8204个剂量组(37.5,75.0,150.0和300.0mg·L-1),在相同条件下,每组设定两个平行样。结果IHT-PI820各剂量组和阳性对照组的突变频率均显著性高于阴性对照组,并且IHT-PI820各剂量组间存在明确的剂量反应关系,小集落的比例也随剂量的升高呈上升趋势。结论IHT-PI820可以诱发小鼠淋巴瘤细胞Tk基因突变,故将其作为食品外包装上的油墨使用时,应严格按照相关的行业规定操作。

甲状腺弥漫性大B细胞淋巴瘤临床病理特征、基因突变谱及预后分析

目的·探究甲状腺弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)临床病理特征、基因突变谱及预后相关因素。方法·回顾性分析2003年11月—2021年12月上海交通大学医学院附属瑞金医院收治的66例初次诊断为甲状腺DLBCL患者[原发甲状腺DLBCL 23例(34.8%),继发甲状腺DLBCL 43例(65.2%)]的临床病理资料,并进行生存和预后因素分析。其中40例甲状腺DLBCL患者进行了靶向测序(55个淋巴瘤相关基因)以评估基因突变情况。结果·继发甲状腺DLBCL患者Ann Arbor分期Ⅲ~Ⅳ期(P=0.000)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)升高(P=0.043)、结外器官受累数目≥2个(P=0.000)、非生发中心来源(non-GCB)(P=0.030)、MYC和BCL2蛋白双表达(double expression,DE)(P=0.026)、国际预后指数3~5分(P=0.000)的比例高于原发甲状腺DLBCL患者,其接受甲状腺手术切除的比例(P=0.012)低于原发甲状腺DLBCL患者。原发甲状腺DLBCL患者完全缓解(complete response,CR)率高于继发患者(P=0.039)。55例患者(83%)接受以利妥昔单克隆抗体联合环磷酰胺、阿霉素、长春新碱及泼尼松(R-CHOP)为基础的一线治疗方案,其中原发甲状腺DLBCL患者预期5年无进展生存(progress free survive,PFS)率95.0%,高于继发患者的49.7%(P=0.010)。单因素分析显示:Ann ArborⅢ~Ⅳ期(HR=4.411,95%CI 1.373~14.170)、LDH升高(HR=5.500,95%CI 1.519~19.911)、non-GCB(HR=5.291,95%CI 1.667~16.788)、DE(HR=6.178,95%CI 1.813~21.058)是甲状腺DLBCL患者PFS的不良预后因素;Ann ArborⅢ~Ⅳ期(HR=7.088,95%CI 0.827~60.717)、LDH升高(HR=6.982,95%CI 0.809~60.266)、DE(HR=18.079,95%CI 1.837~177.923)是总生存(overall survival,OS)时间的不良预后因素。多因素分析显示:Ann ArborⅢ~Ⅳ期(HR=4.693,95%CI 1.218~18.081)和LDH升高(HR=5.058,95%CI 1.166~21.941)是甲状腺DLBCL患者PFS的独立不良预后因素。靶向测序结果显示,TET2(n=14,35%)、KMT2D(n=13,32%)、TP53(n=11,28%)、GNA13(n=10,25%)、KMT2C(n=9,22%)突变频率>20%,且TP53突变是甲状腺DLBCL患者PFS的不良预后因素(P=0.000)。结论·原发甲状腺DLBCL生存情况优于继发甲状腺DLBCL。Ann ArborⅢ~Ⅳ期、LDH升高、non-GCB、DE(MYC和BCL2)是影响甲状腺DLBCL患者的不良预后因素。TET2、KMT2D、TP53、GNA13、KMT2C是甲状腺DLBCL中常见的高突变基因,TP53突变的患者预后不佳。

TP53突变变异等位基因频率在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的预后价值研究

目的:探索TP53突变变异等位基因频率(VAF)对DLBCL患者预后的影响。方法:回顾性分析2009年3月至2022年3月在新疆维吾尔自治区人民医院初次诊断的155例DLBCL患者,获取完整的临床资料及石蜡包埋的肿瘤组织标本,肿瘤组织中提取DNA,利用二代测序技术检测并分析DLBCL患者基因突变谱。Kaplan-Meier法分析TP53基因突变状态及突变VAF与OS的关系。Cox回归单因素和多因素预后分析影响OS的独立因素。建立预测DLBCL患者1、3和5年OS的列线图,通过C-指数及校准曲线预测模型的预测性能。结果:男性患者DLBCL的TP53突变VAF平均值明显高于女性患者(P<0.05)。TP53突变型患者较野生型的患者的OS缩短(P=0.030);基于OS分层的TP53突变的最佳VAF临界值为33.61%(P<0.001),且TP53突变VAF≥34%患者OS的显著短于TP53突变VAF<34%及TP53野生型患者(P<0.001)。多因素Cox分析发现TP53突变VAF≥34%(HR=4.05,P<0.001)、IPI评分≥3(HR=2.27,P=0.008)是DLBCL患者OS的独立不良预测因素。结合多因素分析得到的具有独立预后意义的因素,构建了DLBCL患者1年、3年、5年OS的诺模列线图模型,TP53突变VAF联合IPI模型的C指数为0.743,该模型预测DLBCL患者1、3和5年OS具有较高的预测准确性。校准曲线分析表明该模型在预测DLBCL患者1、3和5年OS方面与实际生存之间具有良好的一致性。结论:TP53突变VAF在DLBCL患者中具有预后预测价值,TP53突变VAF≥34%是影响DLBCL患者OS的独立危险因素。本研究构建的TP53突变VAF联合IPI列线图预后模型对DLBCL患者预后具有较好的预测性能。

基于二代测序技术的年轻弥漫大B细胞淋巴瘤患者的基因突变谱和预后分析

目的:应用二代测序技术(NGS)检测年轻弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的基因突变谱,为深入理解年轻DLBCL的分子生物学特点及精准预后判断提供依据。方法:回顾性分析2009年3月至2021年3月新疆维吾尔自治区人民医院血液病科初诊资料完整的68例年轻DLBCL患者,采用NGS技术对其石蜡包埋组织进行靶向测序分析(包括475个靶基因),并比较aaIPI≥2分的高危患者和aaIPI<2分的低中危患者基因突变谱和信号通路的差异。结果:68例年轻DLBCL患者中共检测到44个高频突变基因。通过比较aaIPI高危组和低中危组患者高频突变基因结果显示,aaIPI高危组CARD11突变显著高于低中危组(P=0.002),而MGA突变仅出现在aaIPI高危组(P=0.037),SPEN突变仅出现在aaIPI低中危组(P=0.004)。将aaIPI高危组高频突变基因及临床指标纳入生存分析,结果显示,TP53(P=0.009,P=0.027)、POU2AF1(P=0.003,P=0.006)和CCND3(P=0.040,P=0.014)基因突变与较差的PFS和OS相关,而B2M突变与较好的PFS(P=0.014)和OS(P=0.013)相关。多因素COX回归分析结果显示,TP53、POU2AF1和CCND3突变是影响PFS(P=0.021,P=0.005,P=0.020)和OS(P=0.042,P=0.010,P=0.013)的独立危险因素。结论:aaIPI分期与分子生物学标志相结合更有利于精准判断年轻DLBCL患者预后,TP53、POU2AF1和CCND3突变预示着aaIPI高危组DLBCL患者更差的生存。

昆明山海棠总生物碱诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

目的 :研究昆明山海棠 (THH)总生物碱对小鼠淋巴瘤L5 178Y细胞tk基因的影响。方法 :用抽提的THH总生物碱对L5 178Y细胞进行浓度梯度染毒 ,不同时间点进行单细胞微孔接种 ,计数阳性集落 ,测定细胞接种效率、相对存活率、相对悬浮增长率和突变频率。结果 :随着THH总生物碱作用剂量的增加 ,L5 178Y细胞相对存活率和相对悬浮增长率均明显下降 ;在 0 .1～ 2 .0 g·L-1范围内可诱导细胞tk位点的突变 ,诱发突变频率是自发突变频率的 2～ 9倍。在tk位点诱发了两种不同表型的突变集落 ,即大集落与小集落 ,但以大集落为主 ,这一现象可能与THH的作用机制有关。结论 :THH总生物碱对L5 178Y细胞具有肯定的细胞毒性与诱导基因突变作用。

CARD11-PIK3R3基因突变让CAR-T细胞抗癌能力提高百倍

据Garcia J 2024年2月15日[Nature,2024,626(7999):626-634.]报道,美国西北大学和加州大学旧金山分校研究人员通过诱导致淋巴瘤的恶性T细胞基因突变(CARD11-PIK3R3),并将编码这种天然存在的、独特的突变基因整合到CAR-T细胞,使它们杀死癌细胞的能力提高了100倍以上,而且不存在毒副作用和促癌风险,这为CAR-T细胞疗法在实体瘤上的治疗应用打开了新的大门。

帕博利珠单抗治疗EGFR基因突变阴性和ALK阴性的晚期或转移性非小细胞肺癌的预算影响分析

目的从国家医疗保障支付方的角度出发,基于真实世界数据预测将帕博利珠单抗(PEM)纳入国家医保后,其作为一线药物治疗晚期或转移性非小细胞肺癌对医保基金可能产生的影响,从而为医保部门决策提供依据。方法构建预算影响分析模型,以2023年为基线年,比较PEM未纳入医保和纳入医保后对未来5年(2024-2028年)医保基金支出的影响。目标人群为EGFR基因突变阴性和间变性淋巴瘤激酶(ALK)阴性的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者;测算成本主要包括药品成本、不良反应处理成本、检查费用、入院监护费用等;以广东省183家医院2020-2022年PEM的配备率作为市场份额。采用单因素敏感性分析检验基础分析结果的稳健性。结果PEM未纳入医保时,2024-2028年目标人群的医保报销金额为493362.35万~515119.83万元;若将PEM纳入医保,上述数据范围为1187197.22万~1454057.10万元;两种情境下的医保报销增额为672077.39万~960694.75万元。PEM纳入医保后的医保报销金额占当年医保基金支出的比例分别为0.2980%、0.2621%、0.2288%、0.2082%、0.1857%,医保报销增额占当年医保基金支出增加部分的1.0840%、0.9957%、0.8886%、0.8863%、0.8616%,均呈逐年递减趋势。结论若将PEM纳入医保,由于其单价较高,导致医疗支出相应增加,将对医保基金支出产生较大冲击;但是,将该药用于EGFR基因突变阴性和ALK阴性的局部晚期或转移性非小细胞肺癌患者时,其医保报销金额占当年医保基金支出的比例以及医保报销增额占当年医保基金支出增长部分的比例均逐年降低。

TP53基因在弥漫性大B细胞淋巴瘤中作用的研究进展

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是全世界范围内发病率和病死率较高的恶性肿瘤之一。目前以药物治疗为主的综合治疗可有效改善DLBCL患者的转归,但仍有部分患者疗效不佳。抑癌基因TP53在肿瘤发生、发展过程中发挥着至关重要的作用,其表达变化与肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移密切相关。TP53基因突变对DLBCL的发生、发展及预后分层的影响是近年研究的热点。深入研究TP53基因突变对DLBCL预后的影响,可为其靶向治疗及预后判断提供信息参考,且具有重要的临床应用价值。

小鼠淋巴瘤tk基因突变试验检测雄黄的致突变性

目的用小鼠淋巴瘤tk基因突变试验检测雄黄浸出液的致突变性。方法在加或不加S9(萃巴比妥钠+β萘黄酮诱导鼠肝匀浆上清液)条件下,用不同质量浓度雄黄浸出液可溶性砷处理小鼠淋巴瘤L5178Y细胞,采用微孔板法进行细胞毒、平板接种效率和突变频率测定,用统计学方法进行评价。结果非活化条件下用雄黄浸出液处理3 h和24 h后,随着浸出液可溶性砷质量浓度的增加,小鼠淋巴瘤细胞的平板效率(PE0和PE2)、相对存活率(RS0)、相对悬浮生长(RSG)、相对总生长率(RTG)逐渐下降,24 h作用后最高剂量3.0μg/mL的RS0仅为6.72%、RSG仅为3.94%、RTG仅为0.34%,表明雄黄对小鼠淋巴瘤细胞有明显的毒性,且作用时间长细胞毒性更明显。随着浸出液可溶性砷质量浓度的上升,抗性突变频率(MF)呈现上升趋势,表明雄黄具有致突变性。延长处理时间,雄黄的致突变性增强。活化条件下小鼠淋巴瘤细胞的PE0、PE2、RS0、RSG、RTG和MF的变化与非活化条件下结果相似,表明浸出液可溶性砷的毒性和致突变性不依赖于S9的活化。结论雄黄浸出液可溶性砷对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞具有致突变性。

ITPKB突变变异等位基因频率对弥漫性大B细胞淋巴瘤的预后预测价值

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)ITPKB突变变异等位基因频率(VAF)与预后的相关性。方法纳入2014年6月—2020年12月在新疆维吾尔自治区人民医院初次诊断的155例DLBCL患者,获取石蜡包埋的肿瘤组织标本。提取肿瘤组织DNA,应用二代测序技术检测包括ITPKB在内的475种热点基因,分析高频突变基因VAF与无进展生存(PFS)和总生存(OS)的关系。结果ITPKB的突变频率为18.71%,ITPKB突变患者的PFS较未突变患者的PFS明显缩短,但差异无统计学意义(37.00 vs.108.00个月;HR=1.643,95%CI:0.920~2.934,P=0.093)。通过基于R语言的网页工具探寻可区分患者预后的最佳VAF截断值,将患者依据VAF值分成对应的两组(高VAF组vs.低VAF+野生型组),ITPKB最佳VAF的截断值为27.48%(HR=3.48,95%CI:1.70~7.13,P=0.00027),纳入年龄、性别、COO分型、IPI、LDH等临床指标行多因素Cox分析,结果显示PFS与高ITPKB VAF(≥28%)相关(HR=3.592,95%CI:1.738~7.425,P<0.001),是PFS独立的不良预测因素。结论ITPKB突变高负荷为DLBCL患者PFS的独立危险因素,ITPKB突变的VAF在DLBCL患者中具有预后预测价值。

2450 MHz微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响

目的 :探讨微波辐照对小鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的影响 .方法 :选用频率 2 4 5 0MHz微波 ,采用不同功率密度 (5 ,10 ,30mW·cm 2 )辐照小鼠 ,连续辐照 1,3,7d后 ,心脏取血 ,应用多核细胞法检测HPRT基因位点突变频率 .结果 :淋巴细胞HPRT基因位点突变率随着辐照时间延长和辐照强度的增大呈增加趋势 ,30mW·cm-2 微波照射 7d组淋巴细胞HPRT基因突变频率与对照组相比相差显著(P <0 0 5 ) .结论 :2 4 5

睾丸弥漫大B细胞淋巴瘤中MyD88及CD79B基因突变及意义

目的探讨睾丸原发性弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中MyD88及CD79B基因突变及意义。方法回顾性分析15例睾丸原发性DLBCL的临床病理学特点,采用免疫组化及Sanger测序法检测原发性DLBCL中MyD88及CD79 B基因突变,分析MyD88及CD79B基因突变与肿瘤临床病理学特点、NF-κB蛋白在细胞核表达之间的关系。结果免疫组化显示15例DLBCL均为非生发中心B(non germinal center B,non-GCB)细胞型,4例存在CD79B基因Y196位点突变(26.7%),7例存在MyD88基因L265位点突变(46.7%),3例同时存在CD79B及MyD88基因突变(20%)。8例患者获得随访,未发现CD79B及MyD88基因突变与预后的相关性。结论中国人睾丸原发性DLBCL中存在较高的CD79B基因Y196位点和(或)MyD88基因L265位点突变,为针对这些突变基因的分子靶向治疗提供依据。

马兜铃酸诱导小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变的研究

马兜铃酸广泛存在于中草药和中成药中,该化合物已被证实可导致人类肿瘤。研究通过体外小鼠淋巴瘤细胞致突变试验来检测马兜铃酸(AA)的致突变率和药剂剂量的相关性,对试验具体所采用的96孔板法进行了详细的论述,并进而希望能够建立可以用于各种中草药遗传毒性检测的方法。经过试验证实了小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验方法可以有效地检测马兜铃酸的细胞毒性和致突变性。并且随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。表明AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。

人巨细胞病毒感染的霍奇金淋巴瘤中p53基因突变分析

目的 :检测人巨细胞病毒 (HCMV)感染的霍奇金淋巴瘤 (HL)中是否存在 p5 3基因突变热点区的基因突变。 方法 :从经原位杂交、免疫组化、显微切割等方法证实存在人巨细胞病毒感染的霍奇金淋巴瘤石蜡标本中提取DNA ,采用PCR SSCP和核酸测序方法对p5 3基因突变热点区的外显子进行基因突变检测。结果 :应用p5 3外显子 5、6、7、8的相应引物 ,对 10例HCMV阳性的HL组织中DNA进行PCR扩增 ,产物经电泳检测 ,分别扩增出特异的条带 ,SSCP分析未见异常的迁移带 ,ex on 8外显子核酸测序未见有碱基突变。结论 :p5

小鼠淋巴瘤细胞突变试验方法

小鼠淋巴瘤细胞突变试验(简称小鼠淋巴瘤试验或MLA)是国际上较常应用的遗传毒性试验常规方法 ,有关该试验方面的报道在国内不常见 ,本文对该试验方法作了较为具体介绍 ,仅围绕该试验的96孔板法(microwellormicrotitre)展开论述 。

血管免疫母T细胞淋巴瘤患者RHOA、TET2和DNMT3A基因突变率及临床特征分析

目的探讨血管免疫母T细胞淋巴瘤(AITL)患者RHOA、TET家族羟化酶2(TET2)和甲基化转移酶3A(DNMT3A)基因突变率及临床特征分析。方法应用免疫组化法检测AITL患者组织中RHOA、TET2和DNMT3A的表达。采用多重PCR扩增和测序方法分析RHOA、TET2和DNMT3A突变主要基因型。结果免疫组化结果可知,RHOA阳性表达为68.33%(41/60)、TET2阳性表达为61.67%(37/60)和DNMT3A阳性表达为70.00%(42/60)。RHOA、TET2和DNMT3A阳性表达与血管免疫母T评分明显相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。RHOA、TET2和DNMT3A阳性表达与AITL患者性别及年龄不具有突变与血管免疫母T细胞淋巴瘤TNM分期、LDH含量、有无B症状及IPI评分明显相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 RHOA、TET2和DNMT3A突变可以作为诊断AITL的分子标志物,RHOA、TET2和DNMT3A突变可能参与调节AITL发生发展。

1例表皮生长因子受体基因、间变淋巴瘤激酶基因突变共存晚期肺腺癌的治疗

目的总结表皮生长因子受体(EGFR)基因、间变淋巴瘤激酶(ALK)基因突变共存晚期肺腺癌的有效治疗方法。方法对1例EGFR基因、ALK基因突变共存晚期肺腺癌患者的治疗过程作回顾性分析。结果患者因“乳腺癌术后1年余,腰痛不适半月余”就诊,实验室检查显示肿瘤标志物CEA、CA125升高,PET/CT检查、肺穿刺并骨转移瘤穿刺活检提示为肺腺癌并骨转移。基因检测结果显示为EGFR:exon21(L858R)突变,突变丰度为5.96%;EML4-ALK突变,突变丰度为1.76%。明确诊断为左肺腺癌(cT4N3M1cⅣb期),双侧纵隔淋巴结转移,双锁骨上淋巴结转移,左侧肺门淋巴结转移,多发骨转移,肺转移。一线予以EGFR-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)奥西替尼(80 mg,每天一次)靶向治疗后病情进展,一线治疗无进展生存期(PFS)为6个月。一线治疗进展后,二线予以EGFR-TKI奥西替尼联合ALK-TKI阿来替尼(600 mg,每天两次)靶向治疗,疗效评价为疾病部分缓解(PR),目前已治疗15个月,二线治疗PFS尚未达到,仍继续接受奥西替尼联合阿来替尼靶向治疗。结论对于EGFR基因、ALK基因突变共存的晚期肺腺癌患者,一线使用奥希替尼治疗进展后,二线使用奥西替尼联合阿来替尼治疗有效。

肾脏累及的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者临床病理特征

目的·探究肾脏累及的弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)患者的临床病理特征,包括临床基本信息、病理特征、基因突变谱与预后相关因素等。方法·回顾性分析2005年7月—2021年11月上海交通大学医学院附属瑞金医院收治的149例肾脏累及的DLBCL患者的临床资料,包括治疗方案、疗效评价及分期等,并采用靶向测序(54个淋巴瘤相关基因)评估患者的基因突变情况。基于患者资料进行生存和预后因素分析。结果·在149例DLBCL肾脏累及的患者中,有87例患者(58.4%)年龄>60岁,121例患者(81.2%)AnnArbor分期为Ⅲ~Ⅳ期,27例患者(18.1%)美国东部肿瘤协作组评分≥2分,121例患者(81.2%)血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)高于正常上限,111例患者(74.5%)至少存在2个以上淋巴结外器官受累,131例患者(87.9%)国际预后指数≥2分。患者的5年总生存率和5年无进展生存率分别为52.2%和50.4%。在病理特征中,145例患者(97.3%)诊断为非特指型DLBCL。按Hans分型,39例患者(26.2%)属生发中心亚型。在可评估疗效的144例患者中,87例(60.4%)患者取得完全缓解。此外,单因素分析显示:血清LDH升高是肾脏累及的DLBCL患者总体生存时间(P=0.048)和无进展生存时间(P=0.033)的不良预后因素;75例肾脏累及的DLBCL患者的靶向测序显示PIM1(n=23,31%)、MYD88(n=22,29%)、CD79B(n=21,28%)和KMT2D(n=18,24%)存在高频突变,其中CD79B突变与较差的总体生存时间相关(P=0.034)。结论·肾脏累及的DLBCL患者临床特征中血清LDH升高与不良预后有关,基因突变谱中CD79B突变与不良预后有关。