运用小鼠淋巴瘤细胞基因突变试验测定4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐的遗传毒性

目的研究运用小鼠淋巴瘤试验(MLA)对4,4′-二甲基二苯基碘鎓盐六氟磷酸盐(IHT-PI820)作为食品外包装上油墨使用安全性的评价。方法采用L5178Y细胞,处理3h,表达48h后测定突变细胞频率及小集落比例。同时进行添加和未添加代谢活化系统的试验,每个条件下设6个剂量组,阴性(二甲亚砜)、阳性(甲磺酸甲酯或环磷酰胺)对照组及IHT-PI8204个剂量组(37.5,75.0,150.0和300.0mg·L-1),在相同条件下,每组设定两个平行样。结果IHT-PI820各剂量组和阳性对照组的突变频率均显著性高于阴性对照组,并且IHT-PI820各剂量组间存在明确的剂量反应关系,小集落的比例也随剂量的升高呈上升趋势。结论IHT-PI820可以诱发小鼠淋巴瘤细胞Tk基因突变,故将其作为食品外包装上的油墨使用时,应严格按照相关的行业规定操作。

小鼠淋巴瘤细胞突变试验方法

小鼠淋巴瘤细胞突变试验(简称小鼠淋巴瘤试验或MLA)是国际上较常应用的遗传毒性试验常规方法 ,有关该试验方面的报道在国内不常见 ,本文对该试验方法作了较为具体介绍 ,仅围绕该试验的96孔板法(microwellormicrotitre)展开论述 。

小鼠肝癌细胞移植瘤内淋巴管的形态与亚细胞结构

目的 观察小鼠肝癌细胞所致小鼠移植瘤内淋巴管形态学改变 ,探讨移植瘤内是否有淋巴管新生。方法 将小鼠肝癌 (H2 2 )腹水型瘤株细胞接种于昆明小鼠腋部皮下 ,2周时摘取肿瘤 ,采用HE染色观察癌肿的发展 ,光镜下用 5′ 核苷酸酶 碱性磷酸酶双重染色法观察毛细淋巴管 ;半薄切片筛选毛细淋巴管 ;应用透射电镜观察毛细淋巴管内皮细胞超微结构。 结果 动物模型显示 2周时小鼠腋部可见明显肿块。 5′ 核苷酸酶 碱性磷酸酶双重染色法可见中心区无毛细淋巴管 ,周边部可见稀疏的染成棕黄色的毛细淋巴管 ,染成蓝色的血管较为多见。透射电镜下 ,周边区可见毛细淋巴管 ,亚细胞结构发生损伤。 结论 小鼠肝癌细胞所致小鼠移植瘤内存在新生毛细淋巴管。

B细胞非霍奇金淋巴瘤小鼠模型的建立

背景与目的:近年来非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)发病率呈上升趋势,其中侵袭性NHL占了很大的比例,然而传统化疗方案提高NHL疗效的空间有限。本研究旨在建立淋巴瘤小鼠模型,为探讨治疗NHL新方案并研究其药物作用机制提供动物模型。方法:应用人弥漫大B细胞NHL细胞株SU-DHL-4及人Burkitt淋巴瘤细胞株Daudi,经尾静脉注射入SCID小鼠体内,探索建立淋巴瘤小鼠模型的条件及特点。Daudi淋巴瘤小鼠分为对照组及美罗华治疗组,观察小鼠的发病情况及生存时间。结果:SU-DHL-4淋巴瘤小鼠在中位时间39.5d后开始发病,主要表现为精神萎靡、消瘦、竖毛、活动迟缓,于小鼠腹腔、尾部或后肢部位出现肿块,未发现肝脏、脾脏、骨髓等脏器出现淋巴瘤细胞浸润。Daudi淋巴瘤小鼠于中位时间30.5d发病,出现双后肢瘫痪,于瘫痪后9.5d左右死亡。Daudi淋巴瘤小鼠的脏器大多受淋巴瘤细胞的累及,骨髓中出现大量Daudi细胞浸润。美罗华治疗使小鼠骨髓中的Daudi细胞呈现明显的凋亡形态。对照组Daudi淋巴瘤小鼠的中位瘫痪时间及生存时间分别为30.5d及40d,美罗华治疗组的小鼠分别为52.5d及76.5d,美罗华治疗组小鼠的中位瘫痪时间及生存时间显著延长(P<0.05)。结论:应用SU-DHL-4细胞及Daudi细胞均可以成功建立B细胞NHL小鼠模型。

蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用的研究

目的 :研究蝎毒对小鼠淋巴瘤细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用。方法 :应用MTT法观察蝎毒对细胞的抑制作用 ,光镜、透射电镜观察细胞结构的改变 ,原位末端标记检测DNA断裂 ,流式细胞术分析凋亡细胞。结果 :蝎毒 (12 5 - 2 0 0 μg/ml)可明显地抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡 ,并且其作用强度在一定范围内呈现对浓度和时间的依赖性。结论 :蝎毒能抑制小鼠淋巴瘤细胞生长和诱导细胞凋亡。

小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0—Ag14)及鼠—鼠淋巴细胞杂交瘤细胞系的形态定量比较研究

小鼠骨髓瘤细胞系(Sp2/0—Ag14)是不分泌型的浆细胞样细胞。我们用Sp2/0—Ag14细胞与免疫小鼠的脾细胞融合,建立了抗本周氏蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系并采用立体计量方法对亲本及杂种细胞进行了形态定量测量。以便探讨细胞形态结构的变化与分泌抗体的关系。从半薄切片上细胞的结构数据,计算出平均细胞的各种三维空间结构参数。在超薄切片上得到了胞浆内结构成分的三维超微结构参数。结果表明:杂种与亲本细胞相比,杂种细胞的体积明显增大;粗面内质网扩张显著;高尔基体小泡的数量有增多的趋势;线粒体平均体积增大。揭示:杂种细胞的分泌能力较强。

甲醛对小鼠机体毒性及其B淋巴细胞瘤-2基因表达的影响

目的探讨甲醛对小鼠机体的毒性及其对B淋巴细胞瘤-2基因表达的影响。方法将40只昆明种小鼠随机分为4组,10只/组。正常对照组小鼠不做任何处理,甲醛低剂量组(5 mg/m^3)、甲醛中剂量组(10 mg/m^3)、甲醛高剂量组(20 mg/m^3)小鼠分别放入染毒柜中吸入不同浓度的甲醛,连续9周,建立甲醛中毒的小鼠模型。结果甲醛可导致肝细胞核固缩及嗜酸样变,且呈现浓度依赖性,但对脑、肺、肾组织未见明显的影响。甲醛高剂量组与对照组比较,肝组织B淋巴细胞瘤-2表达升高(P<0.05)。结论甲醛可导致肝组织明显的病变,但对脑、肺、肾组织无明显的影响,机体可能通过上调肝脏的抗凋亡基因B淋巴细胞瘤-2而拮抗甲醛的毒性,进而保护肝脏。

应用小鼠淋巴细胞彗星试验检测地下水遗传毒性

应用小鼠淋巴细胞彗星试验对长治市5个点位地下水水质作遗传毒性研究。结果表明,各水样有机浓集物均可对小鼠淋巴细胞DNA产生不同程度的遗传损伤,随着剂量的增加,Olive尾矩与阴性对照组(0.72±0.09)相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。在试验浓度范围内,以彗星尾部DNA含量、彗星尾长、尾矩和Olive尾矩所指示的DNA损伤程度随剂量增大而逐渐增加,存在显著的剂量-效应关系,其相关系数>0.815。

SCID小鼠腹腔内人B细胞非霍奇金淋巴瘤模型的建立

目的为探讨人B细胞非霍奇金淋巴瘤诊治策略提供动物模型。方法采用4-5周龄的SCID小鼠,经腹腔接种7.5×106个Namalwa细胞。观察小鼠的发病情况及生存时间。取瘤组织进行HE及免疫组化染色检测CD20,CD79a,Ki-67和CD3抗原的表达。结果 Namalwa细胞在SCID小鼠腹腔发病的主要表现是腹腔出现肿块,时间(18.67±1.94)d,伴竖毛、精神萎靡、行动迟缓,一般情况随时间的延长而不断恶化。荷瘤SCID小鼠中位存活时间(28.00±6.36)d。瘤细胞主要浸润肠壁、肠系膜,胃、胰、肝、脾、肾、肺的周缘、盆腔以及邻近肌组织和皮肤。CD20在瘤组织表达为散在阳性,CD79a和Ki-67为弥慢阳性,CD3为阴性。结论成功建立SCID小鼠腹腔人Namalwa细胞株B细胞非霍奇金淋巴瘤模型,为探索淋巴瘤提供载体。

破壁灵芝孢子粉对小鼠T细胞淋巴瘤细胞抑制作用

目的 研究灵芝孢子粉在体内、外对小鼠T细胞淋巴瘤细胞生长的抑制作用.方法 运用噻唑蓝（MTT）法研究灵芝孢子粉在体外对EL-4细胞的抑制作用;建立MNU诱导小鼠胸腺T细胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型,利用裸鼠移植瘤研究灵芝孢子粉对胸腺T细胞淋巴瘤细胞的抑制作用,HE染色观察淋巴瘤组织结构的改变.结果 灵芝孢子粉对EL-4细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到最低,为4.76 g/L.体内抑瘤试验显示,灵芝孢子粉剂量为4 g/kg时,抑制率为45.8％,镜下观察,灵芝孢子粉高剂量治疗组肿瘤坏死区域较大,核碎屑、细胞固缩较多.结论 高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.

B细胞淋巴瘤-2蛋白在年龄相关性聋小鼠耳蜗中的表达

目的了解B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)在不同年龄段年龄相关性小鼠内耳中的表达量及部位的差异,为后续研究Bcl-2信号通路做准备。方法采用听性脑干反应(ABR)行听力水平测试,耳蜗基底膜铺片行毛细胞形态,数量观察,实时荧光定量、免疫荧光组织化学法和蛋白质印迹分析进行不同年龄段("年轻"组、"老年"组)C57BL/6小鼠耳蜗Bcl-2在mRNA和蛋白表达水平检测。结果 ABR两组比较,老年组小鼠平均阈值均高于年轻组,各频率差异均有统计学意义。耳蜗基底膜铺片两组比较,老年组耳蜗底转毛细胞排列紊乱且部分缺失,螺旋神经节细胞稀疏,排列凌乱。实时荧光定量结果提示Bcl-2在mRNA水平"老年"鼠耳蜗表达降低。免疫荧光组织化学法和蛋白质印迹分析提示Bcl-2在蛋白水平"老年"鼠耳蜗表达降低,且Bcl-2表达位于胞浆,内毛细胞表达高于外毛细胞。结论 Bcl-2在"老年"鼠耳蜗表达降低,且Bcl-2表达降低与耳蜗毛细胞缺失、听力下降可能具有相关性。

CD40配体诱导小鼠B淋巴瘤细胞分化抑制因子3下调表达的研究

目的：研究CD40配体（CD40L）对小鼠未成熟B淋巴瘤细胞（WEHI-231细胞）分化抑制因子3（Id3）表达的影响。方法：用RT-PCR技术从WEHI-231细胞总RNA中扩增小鼠Id3（mid3）cDNA，将其亚克隆至p3FLAG-CMV-10载体；以p3FLAG-Id3-CMV-10为模板，用PCR扩增3FLAG—Id3融合基因，将其亚克隆至逆转录病毒载体pMX—CITE／IRES—EGFP中；通过脂质体转染技术将重组逆转录病毒载体（pMX-3FLAG—Id3-EGFP）转染Phoenix-ecotropic包装细胞系；将pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆转录病毒转导WEHI-231细胞，转导48h后的WEHI-231细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24～48h。转导细胞经有限稀释法建立ndd3基因稳定转染细胞系。mlar3基因稳定转染细胞与CD40L／NIH333和NIH333细胞共培养24h后，用Western blot法检测3FLAG-mid3融合蛋白的表达。结果：pMX-3FLAG-Id3-EGFP转导WEHI-231细胞后，EGFP阳性细胞比例随时间呈下降趋势；单独用培养液培养或与NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEH1-231细胞，24～48h后，EGFP阳性细胞率呈逐渐下降趋势；而与CD40L／NIH333细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP／WEHI231细胞，EGFP阳性细胞率基本保持不变。稳定表达3FLAG-Id3融合蛋白的WEHI-231细胞与CD40L／NIH313和NIH333细胞共培养24h后，Western blot结果显示，CD40L刺激可明显抑制3FLAG—Id3-EGFP／WEHI-231中Id3的表达。结论：CD40L可能通过对Id3的降解而缓解Id3诱导的细胞生长抑制作用。

X线放射后BALB/c小鼠mCD99L2-A20细胞成瘤率及外周血T淋巴细胞亚群变化

目的探讨X线放射对BALB/c小鼠外周血T淋巴细胞亚群及m CD99L2-A20细胞成瘤率的影响。方法40只BALB/c小鼠随机分为放射组和对照组,每组20只。放射组小鼠接受X线放射处理,对照组小鼠不接受X线放射处理。2组小鼠每只皮下注射接种m CD99L2-A20细胞悬液100μL(1×107个细胞),观察2组小鼠的成瘤情况;分别选择对照组、放射组接种m CD99L2-A20后成瘤及未成瘤小鼠各5只,于接种后20 d抽取小鼠外周静脉血,应用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群水平。结果放射组小鼠成瘤13只(放射后成瘤组),未成瘤7只(放射后未成瘤组),成瘤率为65.0%;对照组小鼠成瘤1只,未成瘤19只,成瘤率为5.0%;放射组小鼠成瘤率显著高于对照组(χ2=15.824,P=0.000)。对照组、放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD3^+、CD4^+水平比较差异均无统计学意义(F=2.857、2.755,P=0.116、0.104),但3组小鼠外周血CD8^+水平比较差异有统计学意义(F=65.087,P=0.000)。放射后未成瘤组和放射后成瘤组小鼠外周血CD8+水平显著低于对照组(t=6.166、12.982,P=0.000),放射后成瘤组小鼠外周血CD8^+水平显著低于放射后未成瘤组(t=4.597,P=0.002)。结论 X线放射后BALB/c小鼠接种m CD99L2-A20细胞成瘤率提高,其机制可能与机体免疫功能抑制及细胞毒性T细胞减少有关。

人T淋巴瘤裸小鼠移植瘤株和细胞系的建立及其生物学特性的研究

一淋巴瘤患者腹水中的瘤细胞在裸小鼠皮下移植成瘤并可传代。以此移植瘤株进行体外培养,建立了一个人T淋巴瘤细胞系,命名H—TL_(90)。此细胞系表现不正常的免疫学标记(CD_3^-,CD_7^+,CD_4^-,CD_8~),变异的染色体,并有产生自泌生长因子和促淋巴细胞增殖因子的征象。鉴于H-TL_(90)具有上述特点,它可以作为深入研究人T淋巴瘤的一个良好实验模型。

淋巴细胞体外杀伤小鼠神经母细胞瘤实验观察

【目的】建立体外小鼠神经母细胞瘤细胞和淋巴细胞共培养的细胞模型，通过检测不同免疫学指标来衡量淋巴细胞杀伤肿瘤细胞能力。【方法】从正常C57BL／6小鼠体内分离脾淋巴细胞，调节到适当的浓度，将神经母细胞瘤的细胞株（N2a）和新鲜分离的脾淋巴细胞共培养。在倒置显微镜下观察脾淋巴细胞形态，同时分离培养上清，用ELISA方法检测IL-6、IFN-r、TNF-α含量。MTT方法检测共培养体系中存活细胞状况，用来反映脾淋巴细胞体外杀伤神经母细胞瘤细胞的能力。【结果】体外共培养模型显示，脾淋巴细胞具有强大的杀伤N2a肿瘤细胞的能力，37℃5％C02培养48h后，在4—1×10^6／mL脾淋巴细胞浓度下无肿瘤细胞生长。细胞培养上清中可以检测到高浓度的IL-6（1849pg／mL）和中浓度的TNF-α（137pg／mL），却检测不到IFN-r。【结论】脾淋巴细胞具有很强体外杀伤N2a肿瘤细胞能力，IL-6可能发挥着比TNF-α更重要作用，这为临床上神经母细胞瘤手术后的免疫治疗提供了新的思路。

小鼠淋巴细胞转化微量试验方法的研究

本文报导了小鼠淋巴细胞转化的微量试验方法及其最适转化条件。本实验采用微量培养技术及~3H-TdR掺入法,测定了小鼠脾细胞对PHA、ConA的转化水平,并探讨了培养液成分,有丝分裂素浓度、~3H-TdR掺入时间等因素对小鼠脾细胞转化的影响,获得了比较稳定可靠的实验结果。

小鼠淋巴细胞杂交瘤腹水与实体瘤中单克隆抗体效价的比较

目前，制备杂交瘤腹水仍然是生产单克隆抗体的主要途径。在制备腹水过程中，由于杂交瘤性质的不同，或注射细胞数量过多，往往腹腔在形成腹水同时生长实体瘤，有时甚至只有实体瘤生长而无或很少量的腹水产生．有的学者曾报道过实体瘤可作为大量生产单克隆抗体的方法之一。