精氨酸甲基转移酶CARM1 shRNA慢病毒表达质粒的构建及稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系的建立

目的构建慢病毒表达小鼠CARM1基因shRNA的质粒,观察其在小鼠畸胎瘤P19细胞中对CARM1的表达抑制效率。验证CARM1 shRNA慢病毒表达质粒,进一步筛选得到稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系。方法设计并且合成针对小鼠CARM1 mRNA不同部位的4组shRNA序列,以AgeⅠ和EcoRⅠ克隆入pLKO.1慢病毒载体中,得到含shRNA的慢病毒表达质粒。氨苄青霉素筛选后,DNA测序鉴定结果。鉴定正确的质粒大量制备后,与慢病毒包装辅助质粒psPAX2、pMD2.G共同转染HEK293T细胞,包装得到具有感染能力的慢病毒。将含病毒的培养基上清感染P19细胞后,经嘌呤霉素筛选获得CARM1稳定敲低的P19细胞系,并用Western blot法和实时荧光定量PCR进行鉴定。结果测序鉴定表明4组CARM1 shRNA慢病毒表达质粒构建成功。Western blot法检测和实时荧光定量PCR分析结果显示4组CARM1 shRNA慢病毒表达载体中的2组可有效地抑制小鼠畸胎瘤P19细胞中CARM1基因的表达,即pLKO.1/CARM1 shRNA2、pLKO.1/CARM1 shRNA3有明显的抑制效果。结论成功构建了针对CARM1基因的shRNA的慢病毒表达质粒并筛选得到稳定敲低CARM1表达的P19细胞系,为进一步研究CARM1基因的功能奠定了基础。

复方抗瘤冲剂抑制小鼠肉瘤180的生长及对p53和增殖细胞核抗原表达的影响

探讨复方抗瘤冲剂对小鼠肉瘤 180的作用及机制。通过体内实验 ,观察复方抗瘤冲剂对小鼠肉瘤180的抑瘤作用和免疫组化法检测p5 3和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达水平。结果显示 ,经复方抗瘤冲剂及其不同组合和CTX治疗 10天后 ,对小鼠肉瘤 180有不同程度的抑制作用 ,抑瘤率分别为 2 0 31%、6 5 6 %、12 5 %、19 0 6 %和 30 3%。同时各组药物对p5 3和PCNA的表达水平也有不同程度的影响。提示复方抗瘤冲剂对小鼠肉瘤 180的生长具有一定的抑制作用 ,其机制可能与抑制突变型p5

少突胶质细胞瘤中染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性

目的研究少突胶质细胞瘤染色体1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化的相关性。方法选取少突胶质细胞瘤35例、间变型少突胶质细胞瘤32例标本作为实验组,星形细胞瘤20例及瘤旁正常脑组织标本20例作为对照组,荧光原位杂交方法检测染色体1p/19q联合缺失情况,巢式甲基化特异性PCR技术检测MGMT基因启动子甲基化情况。结果少突胶质细胞瘤和间变型少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失率分别为85.71%、75.00%,均显著高于星形细胞瘤及正常脑组织(P<0.05);少突胶质细胞瘤、间变型少突胶质细胞瘤、星形细胞瘤的MGMT基因启动子甲基化率均显著高于正常脑组织(P<0.05),但三者组间比较差异无统计学意义(P>0.05);少突胶质细胞瘤1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化呈正相关性,并且均与患者3年生存率相关(P<0.05)。结论少突胶质细胞瘤中1p/19q联合缺失与MGMT基因启动子甲基化状态密切相关,联合检测有助于提高临床病理诊断的精确性,更好地评估预后。

人恶性畸胎瘤PA-1细胞染色体特性及其影响因素的探讨

目的 :探讨人类恶性畸胎瘤PA - 1细胞株染色体特性及其影响因素。方法 :采用G带核型分析、DNA碱基序列分析及Westernblot(蛋白印迹分析 )等方法对经 2 0余年 4 0 7- 4 4 5继代培养的PA - 1细胞株染色体核型及p5 3基因状态进行了研究。结果 :PA - 1细胞株 80 %以上仍然保持近乎二倍体的核型 ,30代以后的细胞由于第 15号染色体与 2 0号染色体间的相互易位形成了M1及M2标识染色体。RT -PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变两个带 (p5 3密码子 2 39突变 ) ,Westernblot未检测出突变的p5 3基因蛋白 ,而p2 1蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论 :人卵巢恶性畸胎瘤PA - 1细胞株经 2 0年的继代培养后 ,一个p5 3等位基因发生错义突变 ,另一个仍然是野生型的。仅一个p5 3等位基因发生突变 。

胶质细胞肿瘤中染色体1p/19q杂合性缺失的临床病理分析

目的探讨染色体1p/19q联合缺失与胶质细胞肿瘤患者临床特征的关系。方法使用荧光原位杂交(FISH)技术,收集新疆医科大学第一附属医院151例手术确诊胶质细胞肿瘤标本,进行染色体1p/19q联合缺失检测,分析1p/19q杂合性缺失与患者性别、年龄、部位、病理组织类型等临床特征的相关性。结果星形细胞肿瘤染色体1p、19q、lp/19q联合缺失率分别为19.82%、41.44%、11.71%,少突胶质细胞肿瘤染色体1p、19q、lp/19q联合缺失率分别为51.72%、55.17%、51.72%,二者染色体联合缺失率差异有统计学意义(P<0.05),少突星形细胞肿瘤染色体1p、19q、lp/19q联合缺失率分别为54.55%、63.6%、36.36%,与前两类型比较差异无统计学意义(P>0.05)。少突胶质细胞瘤和间变型少突胶质细胞瘤1p、19q和1p/19q杂合性缺失率差异均无统计学意义(P=0.33,P=0.4913,P=0.58)。星形细胞肿瘤各型之间1p、19q、1p/19q杂合性缺失率差异均无统计学意义(P=0.88,P=0.25,P=0.34)。同时,少突星形细胞肿瘤中少突星形细胞瘤和间变型少突星形细胞瘤1p、19q、1p/19q杂合性缺失率差异无统计学意义(P=0.98,P=0.65,P=0.32);1p/19q杂合性缺失与少突胶质细胞肿瘤患者性别有关(P<0.05),与年龄、级别、肿瘤部位和族别无关(P>0.05)。星形细胞肿瘤和少突星形细胞肿瘤中1p/19q杂合性缺失与年龄、部位、性别、族别无关(P>0.05)。结论 1p/19q联合缺失可作为胶质细胞肿瘤病理诊断的重要参考指标。

568例少突胶质细胞肿瘤中染色体1p/19q缺失和多体特点分析

目的研究少突胶质细胞肿瘤1p/19q缺失及1q/19p多倍体状态与肿瘤病理分型及肿瘤部位的关系。方法应用荧光原位杂交方法(fluorescence in situ hybridization,FISH)对2012年1月至2014年12月患者石蜡包埋组织切片染色,进行1p/19q缺失和1q/19p多体分析,分析其与肿瘤部位、病理分型及分级的关系。结果在568例胶质瘤患者中,年龄为3~76岁,中位年龄42岁,男女比例1.5:1。肿瘤位于额叶249例,颞叶68例,顶叶14例,累及2个以上部位166例,丘脑30例,其他部位41例。1p缺失者74例,19q缺失者39例,联合缺失者192例,无缺失者263例。1p染色体多体30例,19q多体32例,1p/19q均为多体者55例,均无多体表现者451例。少突胶质细胞瘤染色体lp/19q联合缺失达67.4%,间变性少突胶质细胞瘤约为64.7%,少突星形细胞瘤约为38.3%,间变性少突星形细胞瘤为19.2%,含有少突胶质细胞瘤成分的胶质母细胞瘤为5.2%。在少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤中,1p/19q联合缺失率及1p或19q的单独缺失均显著高于少突星形细胞瘤和间变性少突星形细胞瘤,差异有显著性(P<0.01);1p/19q联合缺失率在少突星形细胞瘤和间变性少突星形细胞瘤中明显高于含少突胶质细胞瘤成分的胶质母细胞瘤,差异有显著性(P<0.01)。1q/19p多体率在不同的肿瘤类型中差异有显著性(P=0.019),1q/19p多体率与肿瘤部位无关(P>0.05)。结论检测1p/19q杂合性缺失状态有助于胶质瘤的病理分型,有助于少突胶质细胞肿瘤与混合性少突-星形细胞肿瘤的鉴别诊断。

少突胶质细胞瘤1p/19q检测临床意义研究

目的研究少突胶质细胞瘤样本1p/19q染色体缺失与患者预后的关系。方法用荧光原位杂交方法检测37例少突胶质细胞瘤样本,分析样本中1p/19q缺失情况。结果在对37例样本的检测中,1p缺失25例(67.5%)、19q缺失23例(62.2%)、1p/19q共缺失20例(54.1%)。其中少突胶质细胞瘤正常组、1p/19q共缺失、仅1p缺失和仅19q缺失平均生存时间分别为41、85、67和45个月,中位生存时间分别为41、85、78和64个月。1p/19q共缺失和1p缺失患者的预后较正常组和19q缺失组更好。结论 1p/19q染色体缺失是少突胶质细胞瘤的重要分子生物学标志物,在预后判断,肿瘤分层上有重要意义。

应用锁式探针滚环扩增检测小鼠畸胎瘤分化过程中单细胞基因表达水平

目的应用锁式探针介导的滚环扩增技术(Padlock-RCA)原位检测干细胞分化过程中单细胞mRNA表达水平。方法利用维甲酸(RA)诱导小鼠畸胎瘤细胞F9分化模型,应用锁式探针滚环扩增原位基因检测技术检测Nanog在其分化前后单细胞mRNA表达水平,结合实时定量RT-PCR分析该方法的效果。结果锁式探针滚环扩增原位基因表达检测方法能够检测单个细胞mRNA表达水平,并能够有效的反映F9细胞分化前较分化后Nanog基因表达水平显著降低(P<0.05)。结论成功应用锁式探针滚环扩增原位基因表达检测技术分析Nanog基因在F9分化前后单细胞中表达水平,为进一步研究单细胞基因表达及细胞亚群功能分析提供了一种可靠的新方法。

微小RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平。将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系。结果骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)%比(8.13±0.83)%]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05)。miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达。与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)%比(23.98±1.41)%]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05)。结论miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。

人类恶性畸胎瘤PA-1细胞的p53基因结构、功能状态及其意义

目的:探讨人类恶性畸胎瘤PA-1细胞株p53基因的结构、功能状态及其意义。方法:采用DNA碱基序列分析、FASAY（酵母细胞中单个等位基因的功能分析）及Western blot（蛋白印迹分析）等方法对经20余年407-445继代培养的PA-1细胞株p53的基因结构、功能状态进行了研究。结果:RT-PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变2个带（p53密码子239突变）,FASAY结果也显示p53一个等位基因是有活性的（野生的）,而另一个是非活性的（突变的）。Western blot未检测出突变的p53基因蛋白,而p21蛋白的表达水平比正常成纤维细胞低。结论:人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞株经20年的继代培养后,一个p53等位基因发生错义突变,另一个仍然是野生型的。仅一个p53等位基因发生突变,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此,研究PA-1细胞稳定核型的维持结构,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

恶性畸胎瘤PA-1细胞的染色体特点及p53基因性状

目的 :探讨人类恶性畸胎瘤PA 1细胞株染色体特性及p5 3基因的状态及其意义。方法 :采用G带核型分析、DNA碱基序列分析等方法对经 2 0余年 4 0 7～ 4 4 5继代培养的PA 1细胞株染色体核型及p5 3基因状态进行了研究。结果 :PA 1细胞株 80 %以上仍然保持近乎 2倍体的核型 ,30代以后的细胞由于第 15号染色体与 2 0号染色体间的相互易位形成了M 1及M 2标识染色体。RT PCR产物DNA定向序列分析显示具有野生及突变 2个带 (p5 3密码子 2 39突变 )。结论 :人卵巢恶性畸胎瘤PA 1细胞株经 2 0年的继代培养后 ,1个p5 3等位基因发生错义突变 ,另 1个仍然是野生型的。仅 1个p5 3等位基因发生突变 ,不足以引起细胞的染色体不稳定性。因此 ,研究PA 1细胞稳定核型的维持结构 ,在确定有关染色体的稳定性与不稳定性的基因的方面是非常重要的。

扶正抑瘤颗粒对小鼠H_(22)肿瘤细胞凋亡及p53和Caspase-3基因表达的影响

目的研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠H2 2 肿瘤细胞生长的抑制作用,及其对细胞凋亡和p5 3、Caspase- 3基因表达的影响。方法用体内实验观察FYK对H2 2 瘤株的抑瘤率,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期,反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)法测定野生型p5 3(Wtp5 3)和Caspase -3的mRNA表达情况。结果12g/kg、2 4 g/kgFYK均能显著抑制小鼠H2 2 肿瘤细胞的生长,最高抑瘤率为5 1 .2 4 % (P <0 . 0 1)。流式细胞术检测表明,FYK显著提高H2 2 肿瘤细胞的凋亡率,最高为15 .84 % (P <0 .0 1) ;肿瘤细胞阻滞在G0 /G1期,S期细胞比率降低;RT PCR实验表明,FYK可显著上调p5 3和Caspase- 3mRNA的表达水平。结论FYK能显著抑制小鼠H2 2 肿瘤细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,促进Wtp5 3与Caspase -3基因的表达有关。

p53可调控表达的B细胞淋巴瘤小鼠模型的建立

目的探讨p53可调控表达的B细胞淋巴瘤小鼠模型的建立。方法利用MYC过表达同时p53失活原理建立了B细胞淋巴瘤小鼠模型,利用敲入的可编码p53和雌激素受体(ER)融合蛋白p53 ERTAM的等位基因,可实现对p53的"失活"与"活化"两种状态的调控。结果过表达c-Myc及p53功能缺失足以使正常骨髓细胞恶变成为肿瘤细胞。RT-PCR证实肿瘤细胞呈Rag1阳性和Td T阴性,说明肿瘤细胞确实来源于B细胞的早期发育阶段。结论 p53可调控小鼠B细胞淋巴瘤模型不仅具备B细胞淋巴瘤特征,而且可实现p53活性的可控。

超声介导载miR-16-5p微泡联合树突状细胞疫苗对小鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响

目的研究采用超声介导载miR-16-5p微泡联合树突状细胞(DC)疫苗处理对小鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响。方法制备载miR-16-5p的高分子微泡和DC疫苗。在30只小鼠用HepG2细胞建立肝癌皮下移植瘤模型,再随机分为对照组、空微泡、miR-16-5p微泡、DC疫苗和miR-16-5p微泡联合DC疫苗处理组,每组6只。观察各组小鼠肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线并计算抑瘤率,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肿瘤组织miR-16-5p水平。采用ELISA法检测血清免疫球蛋白G(IgG)、IFN-γ、TGF-β、IL-2和IL-10水平。结果制备的高分子微泡呈球形,平均粒径为1.31μm;对照组、空微泡、miR-16-5p微泡、DC疫苗和联合处理组小鼠肿瘤体积分别为(5973.2±257.4)mm^(3)、(5912.3±248.3)mm^(3)、(4873.7±281.5)mm^(3)、(4954.9±276.3)mm^(3)和(2225.8±201.4)mm^(3),瘤体质量分别为(4.4±0.4)g、(4.2±0.3)g、(2.8±0.2)g、(2.7±0.2)g和(0.9±0.2)g,差异显著(P<0.05);各组小鼠肿瘤组织miR-16-5p水平分别为(1.02±0.06)、(1.05±0.03)、(7.81±0.97)、(1.08±0.07)和(8.08±1.06),提示微泡组和联合组显著高于其他各组(P<0.05);与对照组或空微泡处理组比,其他三组血清IgG、IFN-γ和IL-2水平均显著升高,其中联合组水平最高,而其他三组血清TGF-β和IL-10水平均显著降低,其中联合组水平最低(均P<0.05)。结论采用超声介导载miR-16-5p微泡联合DC疫苗处理对小鼠肝癌皮下移植瘤生长具有协同的抑制作用,可能与增强了小鼠对肿瘤的免疫效应有关。

染色体1p/19q杂合性缺失在鉴别脑胶质肿瘤组织学类型中的意义

目的探讨染色体1p/19q杂合性缺失在鉴别脑胶质肿瘤组织学类型中的意义。方法采用荧光免疫原位杂交技术检测104例脑胶质肿瘤1p/19q杂合性缺失情况,并随访观察预后。结果 1p/19q杂合性缺失70例,其中少突胶质细胞肿瘤54例,星形细胞瘤16例。少突胶质细胞瘤染色体1p、19q、1p/19q联合缺失的发生率分别为61.6%、67.1%、54.8%,星形细胞瘤分别为38.7%、29.0%、16.1%,两组数据差异有统计学意义(P<0.01)。少突胶质细胞瘤染色体1p、19q、1p/19q联合缺失的发生率分别为63.2%(24/38)、63.2%(24/38)、52.6%(20/38),间变性少突胶质细胞瘤分别为58.8%(10/17)、64.7%(11/17)、52.9%(9/17),不同级别的少突胶质细胞瘤的染色体缺失差异无统计学意义(P>0.05)。有1p/19q杂合性缺失的少突胶质细胞肿瘤患者中位生存时间为74个月,大于未缺失者(39个月),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论染色体1p/19q杂合性缺失对鉴别少突胶质细胞肿瘤与星形细胞瘤可能有一定帮助,且对临床治疗及预后判断有一定的指导作用。

p27kip1和Ki-67在原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤中表达的临床病理学意义

目的探讨抑癌基因p27kip1和细胞周期蛋白Ki-67在原发性中枢神经系统生殖细胞肿瘤(CNSGCTs)中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法检测28例原发性CNSGCTs组织中p27kip1和Ki-67的表达,计算Ki-67增殖指数(Ki-67 LI)。结果 28例原发性CNSGCTs中,17例(60.7%)p27kip1高表达,其中成熟性畸胎瘤5例,生殖细胞瘤10例,胚胎性癌和混合性生殖细胞瘤各1例;11例(39.3%)p27kip1低表达,其中生殖细胞瘤8例,未成熟性畸胎瘤、混合性生殖细胞瘤、绒毛膜癌各1例。13例(46.4%)Ki-67 LI>50%,9例(32.1%)Ki-67 LI为25%~50%,6例(21.4%)Ki-67 LI<25%。原发性CNSGCTs组织中p27kip1表达和Ki-67 LI与肿瘤的组织学类型有关,p27kip1表达水平与患者性别、年龄,肿瘤大小、部位,预后和复发以及Ki-67 LI均无相关性(P>0.05)。结论 p27kip1在恶性程度较高的原发性CNSGCTs中呈现低表达,提示其可能通过下调细胞周期G1→S的调控点而参与生殖细胞肿瘤的发生和发展。

脂质体IFNr对DBA／2小鼠P388白血病细胞转移的影响

给ＤＢＡ／２小鼠双前肢足垫皮下注射２×１０Ｐ３８８细胞后，腹腔注入Ｌ－ＩＦＮｒ（脂质体包裹ＩＦＮｒ）或ＩＦＮｒ４，２０，１００×１０４Ｕ／（ｋｇ·ｄ），连续１０ｄ，结果小鼠生存期分别延长１８．３、２９．３、３３．９、２３．９、３１；９、３３．６ｄ。在第１５天循环血中的单核细胞分别相应降低２５．３％、５４．９％，８９．７％和５５．８％、８５．２％、９０．２％；移植瘤引流区腋窝淋巴结肿大呈剂量依赖性缩小。结果表明两种ＩＦＮｒ制剂均有显著的抗白血病细胞Ｐ３８８转移的作用，Ｌ－ＩＦＮｒ的效果优于ＩＦＮｒ。

稳定转染MiR-499对P19CL6细胞向心肌细胞分化的影响

小鼠miR-499基因包含在心肌重链肌球蛋白Myh7b基因的第19内含子中,并且在心肌细胞中特异表达,然而其在心肌细胞中表达的生物学功能和意义尚不清楚.利用可体外分化为心肌细胞的P19CL6细胞建立稳定表达miR-499的细胞株对研究miR-499的生物学功能具有重要意义.根据小鼠miR-499基因序列,设计PCR引物并将扩增产物定向克隆到pcDNA3.1中构建为真核表达载体并转染小鼠P19CL6细胞,经G418筛选建立了稳定转染的P19CL6-miR-499细胞株.用TaqMan探针实时定量PCR检测表明,P19CL6-miR-499细胞可成功表达成熟的miR-499.经1%DMSO诱导分化,RT-PCR、real-time PCR和激光共聚焦显微镜免疫荧光分析,结果表明,稳定转染miR-499对细胞分化早期的分子标志Isl1和Tbx5的表达没有明显影响,但是对分化晚期的特异性分子心肌α-肌动蛋白(α-cardiac actin)和心肌肌钙蛋白(troponin I)的表达有明显抑制作用,这提示miR-499主要对心肌细胞分化晚期有影响.

共表达IL-7和CCL19的VSVΔ51溶瘤病毒在肝癌中的抗肿瘤活性研究

目的:构建共表达白细胞介素7(interleukin-7,IL-7)和趋化因子配体19[chemokine(C-C motif) ligand 19,CCL19]的溶瘤病毒VSVΔ51(7×19 VSVΔ51),并探索其在肝癌中的抗肿瘤活性。方法:细胞的活力测定(MTS法)检测溶瘤病毒对肿瘤细胞的细胞毒性;ELISA法检测病毒感染上清及肿瘤组织匀浆中的IL-7和CCL19的含量;皮下移植瘤模型检测溶瘤病毒的肿瘤抑制能力;流式细胞术检测肿瘤浸润T细胞的表型;免疫组化法检测肿瘤浸润T细胞及IFN-γ的含量。结果:VSVΔ51和7×19 VSVΔ51病毒均可以在小鼠肝癌细胞H22和Hepa1-6中复制,在2 PFU时裂解细胞的效率接近100%;VSVΔ51和7×19 VSVΔ51病毒均对小鼠肝癌移植瘤的生长产生抑制作用,且7×19 VSVΔ51病毒较VSVΔ51病毒抑制能力更强[瘤质量(232.7±13.72) mg vs.(603.8±20.3) mg,P<0.000 1];7×19 VSVΔ51病毒组治疗后肿瘤组织中IL-7[(673.5±62.6)pg·ml^(-1)vs.(383.1±108.3) pg·ml^(-1),P<0.01]和CCL19[(756.2±41.6)pg·ml^(-1)vs.(356.2±50.2) pg·ml^(-1),P<0.001]的含量较VSVΔ51病毒组显著升高,肿瘤浸润T细胞的数目增多(805±133 vs. 392±21,P<0.05),干细胞样记忆T细胞的比例显著提升[(72.5±9.8)%vs.(49.3±8.5)%,P<0.001)],肿瘤组织中IFN-γ的含量也明显升高[(817±52) pg·ml^(-1)vs.(227±63) pg·ml^(-1),P<0.001)]。结论:7×19 VSVΔ51病毒可在肝癌小鼠模型中激发出强大的抗肿瘤免疫反应并发挥显著的抗肿瘤作用。