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小鼠白介素17受体A胞外段的表达、纯化及鉴定
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作者 魏衍财 朱晨露 +9 位作者 陈艳红 秦伟 田洁 袁靖 陈娟 吴晶晶 汤新逸 Samuel Essien Baidoo 许化溪 王胜军 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2012年第4期282-285,共4页
目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AF... 目的:分别克隆小鼠白介素17受体A胞外段(mIL-17RAaa32-322)及小鼠IgG2AFc(mIgG2AFc)基因,构建mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白原核表达载体,并在体外表达、纯化及鉴定。方法:利用基因重组技术构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,并在E.coli Rosetta中表达mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,经镍离子螯合层析分离纯化后,用SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法进行鉴定。结果:成功构建pET32a(+)-mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc原核表达载体,获得高效表达的融合蛋白,且蛋白质印迹证实为目的蛋白。结论:获得mIL-17RAaa32-322-mIgG2AFc融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 小鼠白介素17受体A 原核表达 纯化 鉴定
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小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达
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作者 唐媛媛 朱平 +2 位作者 邸大琳 魏兵 鞠吉雨 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期26-29,共4页
目的构建真核酵母表达载体pPIC9K与小鼠IL-35基因的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3'端引入His标签,构建重组质粒... 目的构建真核酵母表达载体pPIC9K与小鼠IL-35基因的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3'端引入His标签,构建重组质粒pPIC9K-mIL-35-His,经SalⅠ线性化重组质粒后,用电穿孔方法将该基因转染毕赤酵母细胞内。经G418梯度筛选高拷贝转化子,筛选Mut+表型后经PCR进一步鉴定IL-35基因与酵母染色体是否整合。小量诱导表达筛选出高表达菌株,大量甲醇诱导表达,以SDS-PAGE及免疫印迹(Western blot)鉴定蛋白表达。结果小鼠IL-35基因真核酵母表达载体pPIC9K-mIL-35-His构建成功,并且在GS115中通过甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析,可见相对分子质量约为65 000的目的蛋白。结论实验所构建的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His可在毕赤酵母GS115中正确的表达小鼠IL-35基因。 展开更多
关键词 小鼠白介素-35 构建 毕赤酵母 分泌表达
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pcDNA3.1(+)-mIL-12在Lewis细胞中生物活性的探讨 被引量:1
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作者 尹晓玲 林海波 +3 位作者 彭志平 蒋明东 孙世良 李少林 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期470-473,共4页
目的:建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-mIL-12,脂质体转染LLC细胞并测其表达,... 目的:建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-mIL-12,脂质体转染LLC细胞并测其表达,流式细胞仪(FCM)观察细胞周期和凋亡,G418筛选获得阳性克隆后大量培养并检测mIL-12活性。结果:pcDNA3.1(+)-mIL-12质粒构建正确并成功转导入LLC细胞,重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL-12,mIL-12使LLC细胞周期重新分布,并促进其凋亡。LLC/mIL-12细胞培养上清能明显引起刀豆蛋白A(ConA)激活的小鼠脾细胞增殖。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达质粒,建立具有mIL-12生物学活性的LLC细胞系。 展开更多
关键词 稳定表达 小鼠白介素-12 小鼠Lewis肺癌细胞系 活性
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杜氏藻中性多糖的提取分离及免疫活性初步研究
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作者 徐莹 杨烨 +1 位作者 张婷婷 王旻 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期413-416,共4页
将提取所得杜氏藻的中性多糖(NPD)粗品经离子交换色谱和分子筛分离,得到提纯品,经柱前PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)衍生化HPLC色谱、UV、IR分析,确定其组分为葡聚糖,HPLC测得纯度为98.77%。通过免疫活性研究试验显示该多糖可促进小鼠... 将提取所得杜氏藻的中性多糖(NPD)粗品经离子交换色谱和分子筛分离,得到提纯品,经柱前PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)衍生化HPLC色谱、UV、IR分析,确定其组分为葡聚糖,HPLC测得纯度为98.77%。通过免疫活性研究试验显示该多糖可促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖和小鼠白介素(IL-1)的分泌,有免疫增强活性。 展开更多
关键词 杜氏藻 中性多糖 分离 淋巴细胞转化 小鼠白介素
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重叠延伸PCR法构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体 被引量:4
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作者 周艳春 牛青霞 +1 位作者 许燕璇 陈少英 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第8期1440-1442,共3页
目的:构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体。方法:将10ugLPS和等体积的完全福氏佐剂乳化后皮下注射C57BL/6小鼠,7天后,取小鼠脾脏,提取脾细胞总RNA,通过RT-PCR克隆小鼠EBI3和IL-12p35cDNA;采用重叠延伸PCR,通过编码疏水性多肽接... 目的:构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体。方法:将10ugLPS和等体积的完全福氏佐剂乳化后皮下注射C57BL/6小鼠,7天后,取小鼠脾脏,提取脾细胞总RNA,通过RT-PCR克隆小鼠EBI3和IL-12p35cDNA;采用重叠延伸PCR,通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3全长基因和IL-12p35成熟肽基因,构建小鼠IL-35单链融合基因(mouse sigle chain IL-35,mscIL-35),并将其克隆至pcDNA3.1/V5-His訫TOPO誖TA载体。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体。结果:DNA序列分析结果表明:小鼠IL-35单链融合基因中EBI3、IL-12p35和linker的连接顺序、方向及序列完全正确。结论:成功构建了小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体,为进一步探讨IL-35的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠白介素35 融合基因 重叠延伸PCR
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小鼠IL-39的克隆及真核表达载体的构建
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作者 刘超波 孙俊 +3 位作者 潘秀和 蒋雯雯 李燕 李明才 《生物技术》 北大核心 2017年第4期307-311,共5页
[目的]构建小鼠白介素(interleukin,IL)-39单链融合基因及其真核表达载体。[方法]通过RT-PCR得到小鼠EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus-induced gene 3,EBI3)及IL-23p19基因的全长编码区。通过重叠延伸PCR和编码疏水性多肽接头(linke... [目的]构建小鼠白介素(interleukin,IL)-39单链融合基因及其真核表达载体。[方法]通过RT-PCR得到小鼠EB病毒诱导基因3(Epstein-Barr virus-induced gene 3,EBI3)及IL-23p19基因的全长编码区。通过重叠延伸PCR和编码疏水性多肽接头(linker)(Gly4Ser)3的DNA序列将小鼠EBI3全长编码区及IL-23p19成熟肽编码区连接起来,构建小鼠IL-39单链融合基因,并将其克隆至真核表达载体pc DNA3.1/V5-His中,通过限制性内切酶双酶切及基因测序鉴定阳性重组载体。[结果]通过重叠延伸PCR得到1 254 bp大小的目的条带,测序分析显示,小鼠IL-39单链融合基因中EBI3、linker和IL-23p19的基因序列及连接顺序和方向均完全正确。[结论]成功构建了小鼠IL-39单链融合基因及其真核表达载体。 展开更多
关键词 小鼠白介素-39 重叠延伸PCR 单链融合基因 真核表达载体
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Effect of plum-blossom needle tapping with different stimulation intensities on hair regrowth in hair removal mice 被引量:4
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作者 刘志丹 汪青良 +1 位作者 付蓓 李晓燕 《Journal of Acupuncture and Tuina Science》 CSCD 2017年第3期184-190,共7页
Objective: To determine the role of intensity of plum-blossom needle tapping in treating alopecia areata. Methods: The BALB/c mice were randomized into a normal group, a control group, a roller-needle(RN) group, a... Objective: To determine the role of intensity of plum-blossom needle tapping in treating alopecia areata. Methods: The BALB/c mice were randomized into a normal group, a control group, a roller-needle(RN) group, a mild plum-blossom needle(MP) group, and a heavy plum-blossom needle(HP) group. An area of hair was removed by external application of 8% sodium sulfide on BALB/c mice. The hair regrowth, hair follicle changes, and local inflammatory factor changes after cutaneous acupuncture were observed. Results: After treated with sodium sulfide, the hair was completely removed, the local hair follicles reached the catagen phase, and the expressions of interleukin(IL)-1α, IL-1β, IL-2, tumor necrosis factor(TNF)-α, interferon(IFN)-γ, and IL-17 were increased. Mice intervened by RN achieved the same hair growth rating as the controls but with thicker hair shafts; mice in the MP group had incomplete and uneven hair growth but thicker hair shafts; mice in the HP group didn't show hair growth. Pathological analysis revealed significant inflammatory infiltration into the local follicle bulbs and increased catagen-phase follicles in the control group, while RN and MP groups showed significantly increased anagen-phase follicles, coarser individual hairs, and obvious hair shafts. Meanwhile, most of the hair follicles in the HP group were in telogen phase and showed obvious surrounding inflammatory infiltration. RN, MP, and HP significantly down-regulated the increased IL-2, IL-1α, IL-1β, TNF-α, and IFN-γ levels(P〈0.05), but didn't notably affect the increased CD34 expression(P〈0.05). Conclusion: Cutaneous acupuncture with heavy stimulation intensity can inhibit hair growth in hair removal mice, while RN, with the lightest stimulation intensity, is unlikely to affect hair growth but may make hair shafts thicker and follicles larger. 展开更多
关键词 ALOPECIA Cutaneous Acupuncture Plum-blossom Needle Therapy Roller Needle Interleukin Inflammation MICE
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