D-半乳糖致昆明小鼠皮肤成纤维细胞损伤模型的建立

目的：建立D-半乳糖（D—gal）致体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞（MSFs）损伤模型，为研究增生性瘢痕和皮肤衰老等提供实验依据。方法：原代培养KM乳鼠皮肤成纤维细胞，先用免疫细胞化学技术（SABC）法特异染色波形蛋白作细胞鉴定，然后采用10吕／L的D—gal作用于细胞。培养一定时间制作MSFs损伤模型。苏木精-伊红（HE）染色观察MSFs形态变化；四甲基氮唑兰（MTT）法测定MSFs活性；试剂盒法检测MSFs培养液中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、丙二醛（MDA）含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性；β-半乳糖苷酶（B—Gal）染色观察模型细胞的酶活性。结果：经SABC法特异鏊定培养细胞为MSFs。D—gal处理细胞YAh后，与正常对照组比较，MsFs形态发生显著变化，MsFs活性明显下降；MSFs的SOD活力明显下降（P〈0．01），而MDA含量和LDH活性显著上升（P〈0．01）；模型细胞培养72h后，β-Gal活性增高。结论：浓度为10g/L的D—gal作用MSFs24h后，对细胞具有明显氧化损伤作用，且在48h内模型细胞稳定，72h后模型细胞出现衰老生物学标志。该模型细胞为今后开展相关研究提供了实验细胞平台。

白芍经皮透过液对小鼠皮肤成纤维细胞损伤模型的影响

目的研究白芍经皮透过液对小鼠皮肤成纤维细胞损伤模型的影响。方法体外分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,D-半乳糖致其损伤,加入2、10、20、100、200 mg/mL白芍经皮透过液。然后,CCK-8法检测细胞活性,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老,流式细胞术检测细胞周期与凋亡。结果与模型组比较,白芍经皮透过液组细胞活力、S期细胞比例显著增加(P<0.05),β-半乳糖苷酶染色阳性细胞显著减少(P<0.05),G_0/G_1期比例、细胞凋亡率显著下降(P<0.05);与阳性对照组(含0.25 mol/L D-半乳糖和0.05%维生素E的完全培养基)比较,白芍经皮透过液10、20、100 mg/mL组上述指标显著改善(P<0.05),在20 mg/mL时最明显。结论白芍经皮透过液可通过增强细胞活性、减少细胞周期阻滞、增加S期细胞比例、降低细胞凋亡来延缓D-半乳糖诱导的小鼠皮肤成纤维细胞损伤,对其具有保护作用。

多溴联苯醚对HL-7702细胞和小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯的影响

利用划痕染料示踪标记(SLDT)方法,检测了多溴联苯醚(PBDEs)对人肝正常细胞(HL-7702)与小鼠皮肤成纤维细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.结果表明,PBDE-47与PBDE-209均显著抑制HL-7702细胞的GJIC(10～50μmol.L-1),随着剂量的升高,抑制作用随之增强.在小鼠皮肤成纤维细胞中,PBDE-47在3.75～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,而PBDE-209在15～50μmol.L-1范围内对GJIC有显著的抑制作用,在两种细胞中,PBDE-47的抑制作用大于PBDE-209.停止染毒后,细胞GJIC有一定程度的恢复.实验表明PBDEs可抑制细胞间隙连接通讯,为进一步研究PBDEs的毒性机制提供了科学依据.

重建胶原纤维对细胞生长的影响

背景:胶原种类很多,而不同细胞只在特定类型的胶原环境中才表现出最佳的增殖和表型。目的:观察Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原对小鼠皮肤成纤维细胞、人牙周膜成纤维细胞和兔软骨细胞生长的影响。设计、时间及地点:对比观察,细胞学体外实验,于2007-09/2008-09在四川大学生物材料工程研究中心胶原研究室完成。材料:自制达到中试水平的猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原。方法:分别将3种细胞在猪皮Ⅰ型胶原和猪软骨Ⅱ型胶原环境中进行体外培养,比较不同细胞在材料上的行为差异。主要观察指标:傅里叶变换红外光谱、示差扫描热分析和凝胶动力学分析比较2种胶原的热变性温度及在结构和性质上的差异;MTT法观察细胞在2种胶原环境中的黏附、增殖情况。结果:猪软骨Ⅱ型胶原和猪皮Ⅰ型胶原的热变性温度分别为105.8,87.5℃,2种胶原的官能团区相似。凝胶化曲线的对比中猪皮Ⅰ型胶原的成纤维过程较猪软骨Ⅱ型胶原迅速。MTT值显示细胞生长初期,小鼠皮肤成纤维细胞在软骨Ⅱ型胶原环境表现了较好的黏附性,但是更适于在猪皮Ⅰ型胶原上生长;人牙周膜成纤维细胞与小鼠皮肤成纤维细胞对胶原纤维的反应恰好相反。兔软骨细胞第2天在两种胶原上的黏附相似,第4天时在猪软骨Ⅱ型胶原环境中表现出较大的细胞生长密度。结论:不同细胞对Ⅰ,Ⅱ型胶原纤维表现了不同的时间依赖性,但猪软骨Ⅱ型胶原环境更接近于软骨生长的真实环境,更有利于软骨细胞朝特定方向分化,使软骨细胞维持稳定的表型。