二甲基亚砜诱导小鼠红白血病细胞分化的差异蛋白质组学

目的利用二甲基亚砜(DMSO)诱导小鼠红白血病(MEL)细胞分化,系统地分析和鉴定诱导分化不同时间的差异蛋白质组学。方法 DMSO诱导MEL细胞分化,通过联苯胺染色、MTT比色法和Ter119免疫荧光等实验检测细胞分化的比率和细胞的活力,并利用双向电泳耦联质谱技术,结合生物信息学分析诱导MEL细胞分化过程中差异表达的蛋白质。结果 1.2%DMSO诱导MEL细胞分化,分别培养0h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、96h、120h,利用双向电泳和质谱分析,共鉴定出87种蛋白质。1.2%DMSO作用MEL细胞120h后,细胞诱导分化率达到67%。MTT实验显示,1.0%、1.2%、1.4%的DMSO对MEL细胞的活力无明显的抑制作用。结论 DMSO对MEL细胞有诱导分化作用,但无明显地抑制细胞增殖。87种双向电泳差异蛋白质按功能可分为12类,比例最大的前3类分别是:占41%的酶类蛋白、15%的结构蛋白、13%的调节蛋白。

用单倍体相合小鼠FBL-3红白血病细胞株移植建立CB6F1小鼠红白血病模型

本研究探讨建立F1代单倍体相合小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察FBL-3细胞在小鼠体内的生物学特性。将FBL-3H2-d小鼠红白血病细胞经尾静脉分别接种给小鼠C57BL/6和CB6F1H-2b/d(C57BL/6×BALB/c),观察两种小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电子显微镜检查。分析骨髓和脾脏细胞染色体核型及MHC分子表达情况。结果表明:静脉接种103-107个白血病细胞的情况下,C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠发病率分别为100%和92.5%;接种的细胞数量与存活时间呈线性关系;接种相同数量FBL-3细胞的CB6F1小鼠平均生存时间较C57BL/6小鼠延长。白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均为阴性。电子显微镜观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,且H-2b表达率升高,H-2d表达率降低。结论:经尾静脉接种FBL-3细胞可以建立CB6F1小鼠红白血病模型。

NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病细胞分化过程中的表达

目的探讨NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病(MEL)细胞向红细胞系分化过程中的表达变化。方法利用联苯胺染色观察丁酸钠诱导MEL细胞红细胞系分化情况,通过Western blotting、免疫细胞化学检测NonO蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化的过程中表达量的变化,PCR技术检测NonO基因在RNA水平上的表达变化,免疫细胞化学技术检测NonO蛋白在MEL细胞中的定位。结果发现NonO在丁酸钠诱导MEL细胞向红细胞系分化过程中在基因水平和蛋白水平上均上调表达,NonO蛋白在MEL细胞中定位于细胞质和细胞核。结论NonO蛋白与丁酸钠诱导MEL细胞分化密切相关。

阿霉素预处理的小鼠红白血病细胞降低红白血病细胞的成瘤性

目的:研究阿霉素(ADM)处理的小鼠红白血病(MEL)细胞是否可以发生免疫原性死亡,预先输注此细胞是否可以降低MEL细胞在昆明(KM)小鼠体内的成瘤性。方法:用ADM诱导MEL细胞发生约70%凋亡率,即发生免疫原性死亡。30只KM小鼠分3组,分别为小鼠红白血病模型组(模型组)、ADM诱导治疗组(ADM组)和空白对照组(对照组)。模型组经尾静脉输注PBS给KM小鼠,8 d后输注MEL细胞1×106/只;ADM组经尾静脉输注ADM处理的MEL细胞给KM小鼠,9×106/只,8 d后输注MEL细胞1×106/只;对照组未行任何人为干预。观察各组小鼠的生存时间、濒死或第80 d时外周血白细胞数目和体重。结果:在体外使用4 mg/L阿霉素作用于MEL细胞24 h后,诱导MEL细胞约70%凋亡率,发生了免疫原性死亡。在小鼠体内,观察80 d,对照组小鼠全部存活,模型组全部成瘤死亡,ADM组有1只长期生存。ADM组与模型组相比较,生存时间延长(P<0.01),濒死或第80 d时外周血白细胞数目降低(P<0.01),濒死或第80 d时体重增加(P<0.01)。结论:将发生免疫原性死亡的MEL细胞预先输注到KM小鼠体内,KM小鼠产生抗肿瘤免疫应答,降低了活性MEL细胞在KM小鼠体内的成瘤性,改善KM小鼠生存时间和生存质量。

p38-2G4蛋白高表达对小鼠红白血病细胞增殖和分化的影响

目的探讨小鼠增殖相关蛋白p38-2G4基因表达上调对小鼠红白血病(MEL)细胞增殖和诱导分化能力的影响。方法构建p38-2G4-pLJM1高表达重组载体与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.2包装质粒共转染HEK293T细胞慢病毒,感染MEL细胞,建立稳定高表达p38-2G4蛋白的MEL细胞系,Western blotting检测稳定株p38-2G4蛋白的表达。MTT实验和联苯胺染色法检测p38-2G4蛋白高表达对MEL细胞增殖和诱导分化能力的影响。结果高表达稳定株中p38-2G4蛋白表达量明显高于对照组细胞(P<0.05)。p38-2G4蛋白的高表达能显著影响MEL诱导分化过程,导致血红蛋白合成减少(P<0.05),但不能明显改变细胞活力(P>0.05)。结论 p38-2G4蛋白的高表达对MEL细胞增殖无明显影响,但能显著影响其被丁酸钠诱导分化的过程。

转铁蛋白受体mRNA在MEL细胞中表达的调节

转铁蛋白受体(TfR)的主要功能是调节细胞的铁摄取量。它的表达除受细胞内铁含量影响外,在红系细胞还与血红素的合成和细胞的增殖状态有关,但在非红系细胞,则仅与细胞的增殖状态相关。本实验通过对小鼠红白血病(MEL)细胞在二甲基亚砜(DMSO)诱导分化前后、不同的铁状态和不同的血红素合成条件下,采用Northern印迹方法,观察TfR mRNA含量的变化。结果为:①在未诱导的MEL细胞,随着细胞的增殖,TfR mRNA含量增加;诱导的MEL细胞,虽然随着细胞分化成熟而丧失增殖能力,但当存在血红素合成时,TfR mRNA含量也增高,且增高幅度较非诱导组高。②在未诱导的MEL细胞,降低细胞内铁含量(培养液中加入去铁胺式抗TfR单克隆抗体),可刺激TfR mRNA表达;增加细胞内铁含量(培养液中加入转铁蛋白),则抑制TfR mRNA的表达;在诱导的MEL细胞,采用相同条件的铁状态时,细胞内TfR mRNA水平发生类似的改变,但变化的程度较小。③在未诱导的MEL细胞,加入血红素合成抑制剂(培养液中加入异烟肼),不改变TfR mRNA的表达;在诱导的MEL细胞,血红素合成抑制剂既抑制红系细胞的分化,也抑制TfR mRNA的表达。④当培养液中加入EPO,则促进诱导的MEL细胞内TfR mRNA的表达。上述结果提示,在红系细胞,TfR mRNA的表达除受细胞内铁调节外。