龙葵浓缩汁对小鼠细胞免疫功能的影响

目的了解龙葵浓缩汁对小鼠细胞免疫功能的影响.方法用3种浓度的龙葵口服液,即高剂量(3 000 mg/kg体质量),中剂量(1 500 mg/kg体质量),低剂量(750 mg/kg体质量)连续灌胃不同组别小鼠,28 d后分别采用Jerne改良玻片法进行小鼠的抗体生成细胞检测试验;MTT法进行小鼠的淋巴细胞转化实验;乳酸脱氢酶测定进行小鼠NK细胞活性测定试验.结果小鼠抗体生成细胞数、NK细胞活性在高剂量组与对照组间比较有显著性差异(P<0.05),中、低剂量组与对照组间比较无显著性差异(P>0.05);吞噬率、吞噬指数及淋巴细胞的增殖能力在低、中、高剂量组与对照组间比较均无显著性差异(P>0.05).结论高剂量的龙葵浓缩汁能明显增加小鼠的抗体生成细胞数,增强小鼠NK细胞的活性;而龙葵浓缩汁对小鼠巨噬细胞吞噬功能及对ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化的能力无影响.

银消颗粒对小鼠细胞因子影响的实验研究

目的:研究中药银消颗粒对银屑病小鼠模型TNF-α、IL-18和IL-10的影响,以免疫学为切入点,探讨其防治银屑病的作用机制。方法:用小鼠模型检测LPS诱导的巨噬细胞产生TNF-α和IL-18的水平以及ConA诱导的小鼠T淋巴细胞产生IL-10的水平。结果:银消颗粒各剂量组均能显著抑制LPS诱导的巨噬细胞产生IL-18,各剂量组与MTX组比较均无显著性差异;能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α,中、高剂量组与MTX组比较无显著性差异,低剂量组与MTX组比较有显著差异,而且药物浓度的升高与抑制作用呈正相关。均能显著增强ConA诱导的小鼠T淋巴细胞产生IL-10,高、中剂量组与MTX组比较有显著差异,而且随着药物浓度的升高促进作用呈正相关。结论:银消颗粒能抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞产生TNF-α和IL-18,促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞产生IL-10等细胞因子。但是银消颗粒对细胞因子的抑制作用具有不均衡性,可双向调节银屑病患者的免疫功能状态,抑制Th1型细胞因子,促进Th2型细胞因子模式的发展,调节Th1/TH2的平衡,多靶点有效治疗银屑病。

芦笋对小鼠细胞免疫机能的影响

芦笋对小鼠细胞免疫机能的影响杨勤，庄宗杰，吴锦忠，王玉芝，宁志强（贵阳医学院病理生理学教研室，贵阳医学院植物化学教研室，军事医学科学院放射医学研究所）有研究表明，芦笋对多种肿瘤细胞具有直接的细胞毒作用并能抑制动物体内可移植性肿瘤的生长，延长生命。但迄...

不同品系小鼠细胞免疫指标对比观察

免疫药理学是近10余年发展起来的新兴学科,它从免疫学角度,探讨药物对机体免疫功能的影响。近年来,已用作阐明补益类中药以及中医药在防病治病作用机理上的重要手段。目前国内多以昆明系远交群小鼠与常用近交系小鼠作为药物研究的常用实验动物。本作者采用酯酶染色(ANAE)与迟发型超敏反应两法,观察了小鼠细胞免疫反应的程度,以比较测定不同品系小鼠的细胞免疫指标,并检查老年小鼠与年轻小鼠的细胞免疫功能水平,为深入开展实验免疫及免疫药理学的研究提供条件。

黄芩对弓形虫感染小鼠细胞免疫功能影响的实验研究

目的探讨黄芩抗弓形虫感染对小鼠细胞免疫功能的影响。方法将健康昆明小鼠随机分为对照组、感染组、治疗组。对照组不进行干预,感染组、治疗组腹腔接种500个RH株弓形虫速殖子,且治疗组于感染后4小时用黄芩药液灌胃治疗,灌药量为500 mg/d,连续灌胃给药7天。7天后,ELISA法检测实验小鼠外周血清IL-2的水平,并称重计算小鼠脾、胸腺指数,用MTT法测脾淋巴细胞增殖情况。结果感染组与对照组相比,弓形虫感染小鼠后可引起IL-2含量、脾指数、脾淋巴细胞OD值显著升高(P<0.01)。治疗组与感染组比较,小鼠脾、胸腺指数,脾淋巴细胞增殖及外周血清IL-2含量均显著升高(P<0.01)。结论黄芩可以通过提高小鼠的细胞免疫功能来达到抗弓形虫感染的作用。

二甲基甲酰胺对小鼠细胞免疫的影响

一、材料和方法 (一)DMF对昆明种小鼠外周血淋巴细胞α—醋酸萘酯酶(ANAE)阳性率的影响;8—12周龄昆明种小鼠随机分为三组,每组11只,分别于背部皮下注射108、432mg/kgDMF及等容量蒸馏水,每天一次,共14天,于末次染毒后24h,剪尾取血,推片自然凉干,按王立人等人方法染色制片。

扶脾化瘤饮诱导胃癌小鼠细胞凋亡和相关凋亡基因表达的机制研究

目的:研究中药复方扶脾化瘤饮诱导MFC胃癌小鼠细胞凋亡的作用及其对肿瘤组织中Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,初步探讨其可能的抑瘤机制。方法:建立胃癌(MFC)小鼠动物模型,并将模型动物随机分为模型对照组、扶脾化瘤饮高、中、低剂量组共4组。扶脾化瘤饮高、中、低剂量组给药剂量分别为6.0、3.0、1.5 g/kg,模型组给予等体积纯净水。连续给药、给水14 d处死小鼠,分离肿瘤称重计算抑瘤率,部分采用流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡率变化;部分石蜡包埋,肿瘤组织切片,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:经扶脾化瘤饮作用后,小鼠胃癌细胞凋亡率明显增加,且表现出良好的剂量关系。扶脾化瘤饮高、中剂量组显著上调肿瘤组织Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:扶脾化瘤饮可能通过下调Bcl-2表达,上调Bax表达,诱导肿瘤细胞凋亡,达到抗肿瘤治疗的目的。

流行性出血热病毒诱生的小鼠细胞毒因子

大量的临床观察和动物实验均表明,流行性出血热（EHF）病毒感染后的机体细胞免疫反应呈明显的抑制状态,但其原因目前尚未明了。我们用2月龄的BALB/c和C57BL小鼠为材料。

不同浓度环孢素A对小鼠细胞因子生成的影响

目的研究环孢素A对小鼠脾细胞不同细胞因子生成的影响及其相互之间的关系。方法利用已建立的Th1细胞反应体系,ELISA法检测在不同浓度环孢素A条件下,BALB/c鼠脾细胞生成IFNγ、IL12及IL4的产量。结果环孢素A抑制IFNγ分泌的最佳浓度为10-1μg/ml,环孢素A抑制IFNγ分泌的同时不影响IL12的产量。高浓度(101μg/ml)环孢素A可促进鼠脾细胞分泌IFNγ和IL12。结论环孢素A对小鼠脾细胞分泌IFNγ有双向调节作用。高浓度环孢素A可促进鼠脾细胞分泌IL12。环孢素A对IFNγ的调节可能与IL12没有直接的关系。

十全大补汤对小鼠细胞免疫的影响

本文以迟发型超敏反应(DTH)、混合淋巴细胞培养反应(MLR)及细胞毒性T淋巴细胞反应(CTL)等为指标观察了十全大补汤对小鼠细胞免疫功能的影响。 十全大补汤(TJ—48)为津村产品,由十全大补汤生药用热水提取制备的粉末制剂,临用时以蒸馏水混悬。给BALB/c小鼠灌服TJ—48 2g/kg。

MicroRNA-450a-3p通过抑制Bub1基因的表达调控小鼠细胞增殖和胚胎发育

目的:探讨microRNA-450a-3p(miR-450a-3p)对小鼠细胞增殖和胚胎发育的调控是否通过抑制Bub1基因的表达实现。方法:用萤光素酶报告基因实验检测miR-450a-3p能否特异性结合于Bub1基因的3’-非翻译区(untranslated region,UTR);用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测miR-450a-3p对Bub1蛋白和mRNA表达;分别通过MTT、Hoechst染色、流式细胞术等分析miR-450a-3p对小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的调控;利用染色体核型分析技术检测miR-450a-3p对MEFs染色体数目的影响。结果:miR-450a-3p能与靶基因Bub1的3’-UTR结合,在翻译水平抑制MEFs中Bub1的表达,然而其转录水平的表达却不受影响。miR-450a-3p通过下调靶基因Bub1的表达,抑制MEFs的增殖,促进细胞的凋亡;而且miR-450a-3p还能使大多数细胞停滞在G1/G0期,使细胞分裂受阻,导致细胞染色体数目异常。结论:miR-450a-3p能够调控靶基因Bub1的表达,抑制MEFs增殖,并最终影响小鼠胚胎的发育。

“实践十号”为何搭载小鼠细胞去太空——专家解读定量研究辐射对基因组稳定性的影响

6日凌晨升空的实践十号返回式科学实验卫星,搭载了一项科学实验：空间辐射对基因组的作用和遗传效应研究。这项研究通过三种对比实验来研究空间辐射对基因组的影响。中科院生物物理所杭海英研究员的一项实验就在实践十号卫星上。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

培养时间对小鼠树突状细胞及其外泌体免疫相关膜蛋白的影响

目的明确培养时间对树突状细胞及其外泌体免疫相关膜蛋白(CD80、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)的影响,为今后相关研究提供实验依据。方法小鼠骨髓细胞经重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化成树突状细胞,再加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导为成熟树突状细胞;超速离心法提取外泌体;蛋白印迹法和Amnis量化成像流式细胞仪对外泌体进行鉴定;Amnis量化成像流式细胞仪检测小鼠树突状细胞以及树突状细胞外泌体膜上免疫相关蛋白CD80、CD11c、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达情况。结果体外培养第5天后,约50%以上的树突状细胞表达CD80、CD11c、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ,第13天达最高水平,其中CD80阳性率为(97.29±0.63)%,CD11c阳性率为(92.31±1.18)%,MHC-Ⅰ阳性率为(97.91±0.49)%,MHC-Ⅱ阳性率为(97.91±0.49)%,差异具有统计学意义(P<0.001)。第13天后逐渐减少,至第30天,仍有约80%的树突状细胞表达MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ免疫分子。外泌体膜上CD80、CD11c、和MHC-Ⅱ表达水平以第5天最高,然后随培养时间延长,总体呈下降趋势,除外MHC-Ⅰ分子,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论体外培养的小鼠树突状细胞表达较高的免疫相关膜蛋白,在合适的培养条件下可长时间稳定维持。其分泌的外泌体表面也携带有丰富的免疫相关膜蛋白,但树突状细胞与外泌体膜表面的免疫相关蛋白未发现明显相关性。

敲低锌转运蛋白ZIP7抑制小鼠睾丸支持细胞增殖的研究

目的探讨敲低锌转运蛋白ZIP7对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法使用小鼠睾丸支持细胞系(TM4细胞)进行实验,TM4细胞培养后采用细胞免疫荧光染色法观察ZIP7在TM4细胞中的亚细胞定位;将TM4细胞分为对照组和ZIP7 siRNA组(采用siRNA转染敲低TM4细胞中ZIP7表达),采用CCK8法检测两组细胞的增殖能力,使用DHE荧光探针检测两组细胞内活性氧(ROS)的水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测两组细胞内ZIP7 mRNA的相对表达量,Western blot法检测两组细胞内ZIP7、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。结果细胞免疫荧光染色法结果显示ZIP7定位于TM4细胞的内质网上。siRNA干扰使得ZIP7 siRNA组细胞中ZIP7的mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P<0.05);siRNA转染敲低TM4细胞内ZIP7的表达后,ZIP7 siRNA组细胞增殖能力显著低于对照组(P<0.001),细胞内ROS水平显著高于对照组(P<0.001)。与对照组比较,ZIP7 siRNA组细胞的p-ERK/ERK蛋白表达无显著差异(P>0.05),而p-JNK/JNK蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论敲低ZIP7可以明显抑制TM4细胞增殖,该过程可能通过细胞内ROS水平的升高及JNK磷酸化的激活介导。

利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quaking基因第1、第2外显子的CRISPR/Cas9重组慢病毒质粒。将构建的Quaking基因CRISPR/Cas9重组慢病毒载体和pcDNA3.1-Quaking过表达质粒共转染至HEK293T细胞中,通过Western blot实验检测Quaking蛋白的敲除效率。其次,将筛选得到的敲除效率高的重组慢病毒质粒(LentiCRISPRv2-sgRNA1)与辅助包装质粒共转染入HEK293T细胞进行慢病毒包装,慢病毒转导NIH3T3细胞后,利用嘌呤霉素筛选阳性单克隆细胞株。最后,通过Western blot及免疫荧光染色鉴定敲除效果。【结果】发现Quaking蛋白在该细胞株中不表达,并测序证实了发生片段敲除。CCK8检测发现,Quaking基因敲除显著抑制了NIH3T3细胞的增殖能力。【结论】本研究首次通过CRISPR/Cas9技术成功构建了小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,为后续研究Quaking基因在小鼠生理功能调节中的作用机制提供了体外模型基础。

核膜孔亚复合物Nup98/Rae1对小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响

【目的】探究核膜孔蛋白98(Nup98)和核糖核酸输出因子1(Rae1)对小鼠卵母细胞体外减数分裂成熟的影响。【方法】选择4周龄SPF级雌性昆明小鼠,分离小鼠卵母细胞并进行体外成熟培养,利用实时荧光定量PCR检测小鼠卵母细胞中Nup 98和Rae 1基因表达量;利用免疫荧光法检测Nup98和Rae1共定位情况;利用电转siRNA干扰技术敲低小鼠卵母细胞中Nup 98和Rae 1基因,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,并观察小鼠卵母细胞生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体排出(first polar body extruction,PBE)情况;利用免疫荧光法检测敲低Nup 98和Rae 1基因后小鼠卵母细胞纺锤体组装和染色体排列情况;利用染色体爬片技术检测染色体非整倍体率。【结果】Nup 98和Rae 1基因在小鼠卵母细胞中均有表达。在小鼠卵母细胞生发泡(germinal vesicle,GV)时期,Nup98和Rae1共定位于核膜边缘;在减数分裂过程中,Nup98和Rae1聚集于染色体动粒上。siRNA干扰试验结果显示,与对照组相比,单独敲低Nup 98和Rae 1基因后,对另一基因表达无显著影响(P<0.05);双敲Nup 98和Rae 1基因后,对卵母细胞减数分裂恢复率无显著影响(P>0.05),小鼠卵母细胞发育9.5 h时的PBE率极显著升高(P<0.01),染色体分离比率和非整倍体率极显著或显著增加(P<0.01;P<0.05)。【结论】Nup 98和Rae 1基因在小鼠卵母细胞减数分裂中参与染色体分离,影响非整倍体的发生,从而影响受精胚胎的发育潜力。

沉默Versican V0/V1对小鼠牙乳头细胞生物学行为的影响

目的探究多功能蛋白聚糖(Versican)V0/V1对小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells,mDPCs)生物学行为的影响。方法体外培养E16.5d胎鼠mDPCs,使用小干扰RNA(siRNA)沉默mDPCs的Versican V0/V1基因,通过qRT-PCR和免疫荧光染色验证沉默效率;通过EdU实验检测细胞增殖率,划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色分别评估mDPCs的矿化情况,并利用qRT-PCR检测其成牙和矿化相关基因表达水平。结果siRNA转染后,与si-NC组相比,si-Versican V0/V1组mDPCs的增殖能力及迁移能力减弱(P<0.01),si-Versican V0/V1组碱性磷酸酶染色更深且矿化结节数量增加,si-Versican V0/V1组成牙和矿化相关的基因表达量增加(P<0.05)。结论沉默Versican V0/V1抑制mDPCs增殖和迁移,但促进mDPCs成牙分化和矿化。

SMYD2介导高糖诱导小鼠肾成纤维细胞活化的机制研究

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SMYD2)介导体外高糖环境下小鼠肾成纤维细胞(NRK-49F)活化的可能机制。方法 复制糖尿病(DM)小鼠模型,经全自动生化分析仪检测各组小鼠血糖(BG)、血肌酐(Scr)水平,经苏木精-伊红、Masson染色观察小鼠肾组织病理改变,经Western blotting检测各组小鼠肾组织纤维连接蛋白(Fibronectin)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)、SMYD2、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)蛋白表达,经免疫荧光检测各组小鼠肾组织α-SMA及SMYD2表达。复制体外DM细胞模型,使用正常糖(含5.5mmol/L葡萄糖)或高糖(含30.0 mmol/L葡萄糖)处理NRK-49F细胞,经Western blotting检测SMYD2、α-SMA及细胞外基质(ECM)成分蛋白表达;经CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂AZ505的细胞毒性;在AZ505处理/不处理的条件下,经Western blotting检测SMYD2、α-SMA、H3K4me3、Fibronectin、CollagenⅠ、NF-κB p65、NF-κB p-p65蛋白表达,经免疫荧光检测α-SMA、SMYD2及NF-κB p-p65在细胞中的表达及空间定位情况。结果 DM组血清BG、Scr水平高于NC组(P <0.05)。DM组肾组织α-SMA、Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2、H3K4me3、NF-κB p-p65蛋白相对表达量高于NC组(P <0.05),两组NF-κB p65蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HG刺激不同时间点NRK-49F细胞α-SMA、Collagen I、Fibronectin、SMYD2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P <0.05)。40μmol/L组、60μmol/L组NRK-49F细胞存活率较0μmol/L组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505(20μmol/L)组较HG组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA、H3K4me3、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505组较HG组低(P <0.05)。HG组NRK-49F细胞NF-κB p-p65蛋白相对表达量较NG组高(P <0.05),HG+AZ505组较HG组低(P <0.05),各组小鼠NRK-49F细胞NF-κB p65蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SMYD2可介导高糖诱导的NRK-49F细胞活化,其机制可能与激活NF-κB细胞信号通路有关。

LMO4在小鼠胚胎干细胞分化为血管内皮细胞和血管生成中的作用

目的探讨转录因子LIM结构域蛋白4(LMO4)在小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为血管内皮细胞及新生血管中的作用。方法使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法从小鼠红系白血病细胞系MEL)中克隆小鼠Lmo4的cDNA,并亚克隆到含有小鼠胎肝激酶-1(Flk-1)启动子驱动表达Gfp的载体(pFG),构建成血管细胞特异性表达的LMO4的载体pFLG。将表达载体转染mESC,通过遗传霉素(G418)筛选,获得mESC/pFG和mESC/pFLG的细胞株;将这些mESC在体外进行自我分化,以形成4 d和10 d的胚胎体(EB),并进行成血管细胞的集落细胞形成实验(BL-CFC);以10 d-EB进行新生血管出芽实验,观察和分析出芽长短、数目;运用蛋白免疫印迹(Western blot)或定量RT-PCR方法对目的基因的表达进行检测。结果PCR结果证实成功构建了成血管细胞特异性表达的LMO4的表达载体pFLG。通过G418筛选获得mESC/pFG和mESC/pFLG的细胞株。这些mESC通过自我分化形成4 d-EB和10 d-EB,荧光显微镜下观察到EB内均可见绿色荧光标记的细胞。Western blot检测显示:与mESC相比,4 d-EB和10 d-EB的LMO4的表达显著增加。过量表达LMO4的mESC/pFLG产生BL-CFC效率为(7.70%±1.27%),而mESC/pFG细胞产生BL-CFC效率为(1.15%±0.48%),二者差异有统计学意义(P=0.021)。定量RT-PCR结果显示,Flk-1、C-kit、Tie-2、Ve-cad基因在10 d-EB/pFLG中的表达,均较10 d-EB/pFG中表达增加2倍以上。新生血管出芽实验结果显示,10 d-EB/pFLG的新生血管数量和长度均较10 d-EB/pFG增加(P<0.05)。结论过量表达LMO4促进mESC形成成血管细胞,并有利于血管内皮细胞的分化和血管的新生。