逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在小鼠结肠癌细胞中的表达及其抗肿瘤活性

目的: 获得表达小鼠IL -23 (mIL- 23 )基因的小鼠结肠癌细胞株。方法: 应用逆转录病毒载体, 将mIL -23基因导入小鼠结肠癌细胞株Colon26, 经G418筛选后获得表达mIL 23的阳性细胞克隆(Colon26 /IL- 23)。用PCR和RT -PCR检测目的基因的表达, 用ELISA法检测mIL -23的产生及mIL- 23诱导的小鼠脾细胞IFN -γ的产生, 用MTT比色法检测Co lon26 /IL -23细胞和Colon26细胞的体外增殖。将Colon26 /IL- 23细胞接种于BALB/c小鼠的右侧背部皮下, 观察其致瘤性。结果: 建立了可表达mIL -23基因的小鼠结肠癌细胞株。分泌至培养上清中的IL -23, 可诱导小鼠脾细胞产生IFN- γ。在体外Colon26 /IL- 23细胞的生长与Colon26细胞无明显不同, 但其在体内的致瘤性下降, 具有抗瘤作用。结论: Colon26 /IL- 23细胞可分泌IL -23并证明其具有抗瘤活性。

PPARγ配体-吡格列酮在放射治疗中对小鼠结肠癌细胞的作用

目的探讨PPARγ配体在肿瘤放射治疗中对肿瘤细胞的作用。方法采用RT-PCR方法检测CT-26细胞中是否有PPARγ表达。采用MTT方法检测PPARγ配体(吡格列酮)对CT-26细胞生长的影响。采用Western blot方法观察10 Gy X射线对CT-26细胞相关因子COX-2,PAI-1表达的影响,分析PPARγ配体(吡格列酮)对放射后CT-26细胞中COX-2、PAI-1表达变化的影响。结果 PCR结果显示CT-26细胞中有PPARγ表达。MTT结果显示:吡格列酮可以降低CT-26细胞的存活率,10 Gy照射+吡格列酮处理48 h时CT-26细胞存活率降低更为明显。10 Gy X射线照射CT-26细胞后Western blot方法检测结果显示:照射后COX-2表达水平升高,照射后24 h COX-2表达水平最高,吡格列酮对照射诱导的COX-2水平升高无明显影响。10 Gy X射线照射CT-26后Western blot方法检测结果显示:照射后24h PAI-1表达水平明显增高,吡格列酮对照射诱导的PAI-1表达水平升高起降低作用。结论吡格列酮等噻唑烷二酮类药,作用于小鼠结肠癌细胞,在肿瘤放疗过程中可能发挥潜在的协同作用。

转染IL-17基因的小鼠结肠癌细胞体内抗肿瘤机制研究

目的:研究IL-17体内抗肿瘤的作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法:利用已建立的稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠结肠癌细胞(C26/pc DNA3.1-IL-17)及相应的对照细胞(C26/pc DNA3.1、C26)建立荷瘤动物模型,观察小鼠的成瘤性、肿瘤生长情况及小鼠生存期的变化,检测各组小鼠脾细胞增殖情况、脾NK细胞杀伤活性;及脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Treg细胞特征性细胞因子和/或转录因子的表达;检测各组小鼠肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL)的增殖反应情况;及肿瘤浸润巨噬细胞中M1特征性细胞因子IL-10和M2特征性细胞因子IL-12的表达。结果:将C26/pc DNA3.1-IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于C26/pc DNA3.1细胞组及C26细胞组(P<0.05),接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的雄性小鼠移植瘤明显小于雌性小鼠移植瘤体积(P<0.05),各组小鼠生存时间没有明显区别(P>0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力强(P<0.05),与正常小鼠脾细胞增殖能力比较无明显统计学差异(P>0.05),接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠脾细胞增殖能力较正常小鼠脾细胞增殖能力降低(P<0.05);在效靶比为40∶1和20∶1时,接种三种细胞的小鼠NK杀伤率较正常小鼠均降低(P<0.05),在效靶比40∶1时,接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞比接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠的脾淋巴细胞的NK杀伤率明显增强(P<0.05),效靶比10∶1时,各组之间没有明显统计学差异(P>0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠脾淋巴细胞较接种C26、C26/pc DNA3.1的小鼠脾淋巴细胞表达更高水平的IFN-γ(Th1的特征性细胞因子)、IL-4(Th2特征性细胞因子)、GATA-3(Th2特征性转录因子)、ROR-γt(Th17特征性转录因子)、IL-10(Treg特征性细胞因子)mRNA(P<0.05);接种C26/pc DNA3.1-IL-17细胞的小鼠TIL较接种C26、C26/pc DNA3.1细胞的小鼠TIL增殖能力强(P<0.05),接种三种细胞的小鼠TIL增殖能力较正常组小鼠均降低(P<0.05);各组荷瘤小鼠肿瘤浸润巨噬细胞中IL-10和IL-12 mRNA表达在各组荷瘤小鼠之间均无统计学差异(P>0.05)。结论:IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与增强机体免疫应答有关。

人参皂苷Rg3对小鼠结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤生长的抑制作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤生长的荧光成像及血管生成的影响,阐明人参皂苷Rg3抑制原发瘤切除促进转移瘤生长的内在机制.方法:慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(BALB/c micecolon adenocarcinoma cell line,CT-26),用细胞悬液法构建结肠癌肝转移瘤模型,分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组.采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗10d,通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况.应用组织切片苏木素-伊红染色法,观察肿瘤转移灶情况.SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖,TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡.结果:应用慢病毒转染获得稳定表达高强度绿色荧光的CT-26-GFP细胞株.结肠癌肝转移模型治疗结束后,用波长470nm的蓝光激发,通过荧光活体成像系统观察剖离肝脏转移灶发出绿色荧光.原发瘤切除后,人参皂苷Rg3组平均肝转移灶荧光值较原发瘤未切除组及原发瘤切除组有明显的下降(314.17±54.23,388.82±25.97,427.18±44.31);人参皂苷Rg3组、原发瘤未切除组和原发瘤切除组转移瘤发生率分别为40%,50%,100%;平均肝脏质量分别为2.92g±0.60g,3.80g±0.33g,3.98g±0.52g;转移瘤血管密度分别为27.10±3.41,42.60±8.42,62.40±5.08;转移瘤细胞Ki67的表达分别为34.70±6.46,54.30±8.98,65.20±3.82;转移瘤细胞凋亡指数分别为28.37±3.86,12.50±2.99,9.90±2.88.结论:稳定表达绿色荧光蛋白的CT-26-GFP细胞系及其动物模型可以为原发瘤切除研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在小鼠肝脏的生长情况.人参皂苷Rg3明显抑制小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤的生长,明显抑制转移瘤的血管生成及细胞增殖,促进细胞凋亡.

鸦胆子油交联环糊精包合物对结肠癌移植瘤生长的影响

目的：探讨鸦胆子油交联环糊精包合物（BJO-CDP）对小鼠结肠癌细胞CT-26移植瘤生长的影响,并与市售鸦胆子油乳剂（BJOE）抑瘤效果进行比较。方法：小鼠结肠癌细胞CT-26细胞株接种于4~6周龄雄性Balb/c小鼠的腋下,接种24 h后将60只小鼠随机分为5组,即对照组（生理盐水,0.03 m L/只）,BJOE高剂量组（180mg/kg）,BJO-CDP低剂量组（60 mg/kg）,BJO-CDP中剂量组（120 mg/kg）,BJO-CDP高剂量组（180 mg/kg）,灌胃给药。给药10 d。停药次日,称小鼠体质量,处死,称瘤质,计算抑瘤率。结果：给药后,BJOE高剂量组瘤质低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）;BJO-CDP低、中、高剂量组瘤质均低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。BJO-CDP高剂量组瘤质低于BJOE高剂量组,差异有统计学意义（P〈0.05）。BJO-CDP高剂量组对小鼠体质量影响低于BJOE高剂量组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：制备的鸦胆子油包合物能提高鸦胆子油抑制结肠癌细胞的能力。

EMMPRIN enhances the metastatic ability of CT26 murine colon adenocarcinoma

Objective: Colon cancer metastasis is the key in fertility rate of colon cancer. Many recent results about metastasis research indicated that EMMPRIN played an important role in cancer metastasis. So, we designed this experiment to investigate whether EMMPRIN can enhance the metastatic ability of murine colon adenocarcinoma cell, CT26. Methods: EMMPRIN was over expressed in CT26 cells through transfecting pCMV-HA2-EMMPRIN into the CT26 cells. Invasion assay, wound migration assay and adhesion assay were utilized to analyze the metastasis of CT26 cells in vitro after EMMPRIN over expression. Results: After EMMPRIN over expression, invasion assay showed that invasive cells were 103.33 + 8.49 in EMMPRIN group and 48.67 + 5.3 in control group (P < 0.001). Migration assay showed that migrating cells were 40.67 + 2.49 in EMMPRIN group and 18.33 + 2.05 in control group (P < 0.001). CCK-8 absorbance value in adhesion assay were 3.33 + 0.17 in EMMPRIN group and 2.10 + 0.22 in control group (P < 0.001). Conclusion: Over expression of EMMPRIN could enhance the CT26 cell capacity of invasion and migration, and inhibit CT26 cell capacity of adhesion remarkably. The results suggest that EMMPRIN may be involved in cancer metastasis and play an important role in promotion of cancer metastasis.