肿节风注射液抗小鼠肝癌Hep-A-22的作用及毒性

目的 :研究肿节风注射液 (ZJF)抗小鼠肝癌Hep A 2 2的作用及毒性。方法 :建立在体荷瘤小鼠肝癌Hep A 2 2模型 ,测定ZJF的抑瘤率和体重、胸腺指数、脾指数和给药前后外周血白细胞的影响 ,同时研究ZJF对人肝癌Hep A 2 2细胞株生长的抑制作用。结果 :ZJF具有明显的抗肿瘤作用 ,结论 :ZJF体内、外对小鼠肝癌Hep A 2 2均具有抗肿瘤作用 。

姜黄素对二乙胺基亚硝胺诱发小鼠肝癌前病变的预防作用

目的:观察姜黄素对小鼠肝癌前病变的预防作用。方法:每周腹腔注射二乙基亚硝胺(DEN,95 mg.kg-1)建立小鼠肝癌前病变,每天灌胃姜黄素(120 mg.kg-1)或姜黄素与山药(3.03 g.kg-1)联合用药,连续10周(70 d);第71天眼球后静脉丛取血,检测血清肝功指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和谷胱甘肽-S-转移酶(GST),肝脏经灌注固定后用光学显微镜观察病理组织学变化。结果:模型组小鼠肝脏同时存在变质与修复性病变,增生肝细胞具有异型性;血清ALT:(195.57±91.56)U.L-1、AST:(39.68±24.20)U.L-1、GST:(42.31±8.19)U.L-1升高明显(P<0.01)。姜黄素组肝损伤较轻,增生肝细胞异型性降低,ALT:(98.54±48.07)U.L-1、AST:(26.89±7.51)U.L-1、GST:(47.47±8.54)U.L-1下降明显(P<0.05),姜黄素联合山药组ALT:(82.75±38.54)U.L-1、AST:(30.32±7.80)U.L-1、GST:(24.61±7.58)U.L-1疗效优于单用(P<0.01)。结论:姜黄素对诱导性小鼠肝癌前病变具有防治作用,姜黄素与山药联合用疗效更佳。

沙冬青提取物(JA1)对小鼠肝癌H_(22)细胞体外增殖和皮下移植生长的抑制

采用噻唑蓝(MTT)还原法测定梯度浓度的沙冬青提取物(JA1)对体外培养小鼠肝癌细胞株H22增殖的影响;同时对皮下移植肿瘤H22小鼠灌服不同剂量的JA1以检测抑瘤率,进一步采用流式细胞术、光镜和透射电子显微镜技术,检测和观察JA1对小鼠移植性肿瘤H22的诱导凋亡作用。结果显示,JA1可显著抑制体外培养小鼠肝癌H22细胞的增殖,并且这种抑制存在浓度和时间关系。同时,JA1对小鼠皮下移植性肿瘤H22也有明显的抑制作用。流式细胞分析表明,JA1灌胃试验组瘤组织细胞DNA直方图上见有明显的凋亡峰;在光镜和电镜下,JA1灌胃试验组也见有明显的瘤细胞凋亡,表明JA1对体内、外H22细胞的增殖抑制是以诱导凋亡为基础的。

蝮蛇毒抗高凝状态酶对小鼠肝癌抑制作用及P53、C-MYC表达的影响

目的:建立实验性小鼠肝癌原位移植模型,在此基础上研究蝮蛇毒抗高凝状态酶(AHCSE)的抑癌作用并探讨其可能的作用机制。方法:将小鼠肝癌H22细胞种植于小鼠腋窝皮下,传代后取癌组织块种植于小鼠肝脏,进行不同剂量蛇毒制剂治疗的探索。将荷肝癌H22小鼠分成4组:模型对照组、AH-CSE低、中、高剂量组(0.5、1.0、2.0mg/kg),给药10d后,根据瘤重计算抑瘤率,用免疫组化SP法计算P53、C-MYC阳性细胞数。结果:0.5、1.0、2.0mg/kg AHCSE的肿瘤抑制率分别为35.57%、50.38%、53.89%,P53阳性细胞数为64、51、45,C-myc阳性细胞数为46、38、34。1.0、2.0mg/kg AHCSE对小鼠移植性肝癌H22有较明显的抑制作用。结论:AHCSE对小鼠原位移植肝癌H22的生长具有一定的抑制作用,其机制可能与抑制突变型P53、C-MYC蛋白的表达有关。

人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)抑制小鼠肝癌的血管生成和肿瘤生长

【目的】体内、体外实验观察人纤维蛋白溶酶原kringle5(K5)对肝癌血管生成和肿瘤生长的影响。【方法】大肠杆菌中表达,组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得K5蛋白,SDS-PAGE和Westernblot方法鉴定K5蛋白的表达;MTT法分析K5对牛视网膜毛细血管内皮细胞(BRCEC)和肝癌细胞株Bel-7402、HepG2增殖的影响;建立皮下种植肝癌鼠模型,瘤内注射K5,检测抑瘤率及肝癌组织微血管密度(MVD)。【结果】SDS-PAGE及Westernblot鉴定获得K5纯化蛋白;K5特异性地抑制BRCEC的增殖,IC50=160nmol/L,而对肝癌细胞株Bel-7402、HepG2的增殖无抑制作用;K5显著抑制小鼠肝癌生长,治疗组肝癌组织MVD明显低于对照组。【结论】K5抑制移植性小鼠肝癌血管生成和肿瘤生长,特异性抑制血管内皮细胞的增殖可能是K5抑制肝癌血管生成的主要机制。K5具有治疗肝癌的潜在临床价值。

含硒桥联环糊精诱导体外培养H22小鼠肝癌细胞凋亡的作用

目的:研究含硒桥联环糊精(2-SeCD)对体外培养H22小鼠肝癌细胞凋亡的促进作用,探讨2-SeCD的抗肿瘤活性。方法:体外培养的H22细胞分别加入80、160、320和640μmol.L-12-SeCD作为实验组,并设阴性对照组。倒置相差显微镜观察细胞形态的变化;MTT法检测细胞生长抑制率,计算中效抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡。结果:320和640μmol.L-12-SeCD组细胞生长抑制率分别为(25.90±2.13)%和(49.40±3.66)%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01),2-SeCD 48 h的IC50为611.29μmol.L-1;320和640μmol.L-12-SeCD组凋亡率分别为5.52%和12.47%,2-SeCD可使细胞阻滞于G0/G1期。结论:2-SeCD可抑制H22细胞增殖并促进其凋亡,2-SeCD对肝癌具有潜在的治疗价值。

核桃楸皮粗多糖抑制小鼠肝癌细胞H_(22)研究

目标:研究核桃楸皮粗多糖体外抑制小鼠肝癌细胞的能力。方法:以1.5mL离心管为细胞培养容器,用MTT法在492nm检测抑制效果。结果:核桃楸皮粗多糖有较强的抑制H22增值的能力,IC50=0.04932mg/mL(粗多糖);IC50=0.035273mg/mL(5-Fu)(IC50半数抑制剂的浓度)。

莪术油对小鼠肝癌细胞DNA作用的图像分析(摘要)

目的:研究莪术油对小鼠肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:用莪术油进行两次抑制小鼠肝癌HepA实验,用病理细胞图像分析仪分析莪术油对小鼠肝癌细胞核DNA含量的影响。结果:莪术油对小鼠肝癌HepA的抑瘤率分别为51.85％和51.16％,与对照组比有显著性差异(P【0.01)。莪术油能降低小鼠HepA肝癌细胞的DNA光密度值(249.28±70.53比430.23±160.06,P【0.05)。

澳洲茄胺盐酸盐对小鼠肝癌H22抑制作用研究

目的研究观察澳洲茄胺盐酸盐对移植性实体型肿瘤小鼠肝癌H22的瘤重抑制率.方法本项研究采用肿瘤细胞悬液接种法制备小鼠移植性实体型肿瘤H22动物模型.腹腔注射给药,连续10 d.给药结束后,解剖小鼠,取瘤称质量,进行统计学处理及分析,观察药物作用,连续3次重复实验.结果经过研究发现：澳洲茄胺盐酸盐对移植性实体型小鼠肝癌H22抑制实验3次重复实验证实,在药物倍数剂量设置下,44 mg/kg剂量组与盐水对照组比较,有显著性差异;44 mg/kg剂量组瘤质量抑制率在55.1%～73.7%之间,平均抑瘤率为62.3%,P〈0.01.结论通过连续3次重复实验,澳洲茄胺盐酸盐对小鼠移植性实体型肿瘤肝癌H22有明显的抑制作用.

表达白细胞介素-2质粒DNA抗小鼠肝癌作用

目的探讨瘤内注射表达hIL-2质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法构建真核表达质粒载体pDC511hIL-2;ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达;胸腺细胞增殖法(MTT法)检测hIL-2生物学活性。小鼠肝癌H22皮下移植瘤瘤内直接注射质粒DNA后,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积变化;检测小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。在质粒DNA注射后一月进行瘤体组织病理学观察。结果构建的质粒载体能在真核细胞内高效表达hIL-2(3087.18pg/ml.24h.106)。质粒载体表达的hIL-2体外刺激胸腺细胞增殖作用非常明显。hIL-2基因治疗组与空载体组相比,肿瘤生长明显受抑制(F=3.85,P=0.03),小鼠存活期显著延长(x2=4.10,P=0.03),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。pDC511hIL-2DNA瘤内注射一月后,肿瘤病灶炎性细胞浸润明显,病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论瘤内注射hIL-2表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤的生长,提高荷瘤生存期。

低剂量X射线照射对小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽提取物抑瘤作用的影响

目的:观察低剂量X射线照射对小鼠肝癌H22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物抑瘤作用的影响,为低剂量辐射与肿瘤疫苗联合治疗肿瘤提供实验依据。方法:采用微酸洗脱法制备分子量≤3000的细胞膜TAP提取物,皮下免疫小鼠,免疫前12h给予75mGyX射线全身照射,检测胸腺细胞周期时相、脾细胞ConA反应性及脾T细胞CD4、CD8亚组的变化,同时观察体内抑瘤效应。结果:TAP提取物免疫小鼠后,移植肿瘤的发生率降低,平均出现时间延迟,生长速度减慢;脾细胞ConA反应性增强,胸腺细胞周期百分数无显著变化。小鼠免疫前12h给予75mGy全身照射可增强TAP提取物的抑瘤效应,与单纯TAP组相比,胸腺细胞S期百分数明显增加,脾细胞CD8+T细胞百分数增高。结论:低剂量辐射能进一步激发免疫系统功能,增强小鼠肝癌H22细胞膜TAP提取物的抑制肿瘤作用。

9401号对ICR小鼠肝癌（H22）放射增敏效应的研究

研究目的：9401号药是以烟酰胺为母体化合物合成的烟酰胺基酸类化合物，经研究发现，9401号药对体外培养的恶性肿瘤细胞有明显的放射增敏作用。本文采用动物肿瘤模型将进-步观察9401号药的放射增敏效应。材料与方法：动物及模型：选用ICR小鼠，鼠龄7—8周，体重18—20克，雌雄各半。瘤株为移植性实验肿瘤肝癌（H22）。常规方法将瘤体从荷瘤小鼠体内取出，制成瘤细胞悬液，按细胞数1×10^6接种于小鼠右腿外侧皮下，每鼠0．2毫升，待肿瘤生长至250±50mm3时开始分组试验，一般移植后7—10天即可。药物：9401号（N-烟酰基-亚氨基二乙酸），为白色粉状晶体，含量大于99％，熔点182-191℃。由中国医学科学院放射医学研究所药物室合成。动物给药剂量为1000mg／kg体重（半数致死量的四分之一），药物浓度为100mg／ml，于照射前2—3小时-次腹腔给药。照射方法：照射采用。Coγ射线垂直照射，剂量率81．79cGy／min。一个剂量点一次照射4只小鼠，将小鼠放入特制的有机玻璃模型内固定，仅照射荷瘤后腿，其它部位用铅块保护。

PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义

目的探讨PRX2和AKR1B10在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中的表达及意义。方法 90只C57BL/6J雄性小鼠随机分为实验组(60只)和正常对照组(30只),用DEN/CCl4/乙醇诱发小鼠肝癌。于第4周、第8周、第12周、第16周和第20周5个时点处死小鼠,观察其肝脏病理组织的改变,应用实时荧光定量PCR法、免疫组化SP法分别检测小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA及蛋白质的表达水平。结果①实验诱发小鼠肝癌过程中的第4周见肝细胞肿胀,炎细胞浸润,肝脏呈炎症病变;第8周见肝组织炎症病变加重,出现纤维组织增生及肝细胞再生;第12周见肝组织呈不典型增生;第16周有典型假小叶形成;第20周可见典型的小鼠肝癌病理改变。②化学诱癌的第4周至第20周实验组小鼠肝组织PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA和蛋白质的表达均高于正常对照组(P<0.05),且两者的表达水平随着时间的延长,均呈逐步升高的趋势;至第20周肝癌形成时,实验组两者的表达均显著高于癌前各时间点(P<0.05)。③在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中,PRX2 mRNA和AKR1B10 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.674,P=0.05)。结论在二阶段化学诱发小鼠肝癌形成过程中PRX2和AKR1B10的高表达是化学诱发小鼠肝癌形成的早期事件,PRX2和AKR1B10可能在化学诱发小鼠肝癌的发生、发展和促进过程中起重要作用。

HSV1-TK自杀基因系统对小鼠肝癌细胞移植瘤的抑制效应

目的:构建表达单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV1-tk)的重组逆转录病毒,建立HSV1-tk/GCV肿瘤自杀基因治疗系统并检测其对小鼠肝癌细胞H22移植瘤的抑制效应.方法:构建携带HSV1-tk基因的逆转录病毒载体pLXSN-tk,用PolyFectTransfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67,通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株,将该重组逆转录病毒感染小鼠肝癌细胞H22,以G418筛选的抗性克隆(命名为H22/tk);将H22/tk细胞与未经基因修饰的H22细胞按1:4混合接种小鼠皮下,联合应用GCV,观察其抑瘤作用(n=19).结果:经酶切鉴定和DNA序列测定,证明HSV1-tk基因成功定向插入到pLXSN逆转录病毒载体中;重组病毒DNA转染包装细胞PT67,获取病毒滴度为4×107cfu/L的重组逆转录病毒培养液;感染小鼠肝癌细胞H22后再筛选出G418抗性克隆株H22/tk.H22/tk细胞与H22细胞混合所致荷瘤鼠在GCV治疗前,各组间肿瘤体积无显著性差异;GCV治疗后,与对照组相比,GCV治疗组肿瘤的生长明显受到抑制,到第8,10,12,14d,致瘤模型对照组的肿瘤体积分别为356±205,635±382,963±580,1509±1105mm3,而GCV治疗组分别为231±155(VS对照组,t=-2.25,P=0.03),413±252(vs对照组,t=-2.14,P=0.04),592±420(vs对照组,t=-2.38,P=0.02),939±847mm3(vs对照组,t=-1.92,P=0.06),GCV治疗组的肿瘤生长抑制率分别为35.0%,35.0%,38.5%,37.8%.结论:成功获取表达HSV1-tk基因的逆转录病毒,已建立显示出体内抑瘤活性的自杀基因治疗系统,为进一步研究中医药对自杀基因抗肿瘤的增效作用奠定基础.

树突状细胞对肿瘤浸润淋巴细胞抗小鼠肝癌活性影响的研究

目的探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性,并将H22-DC-TIL过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抑瘤作用。方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性、血清TNF活性、抑瘤作用以及瘤体病理改变,并与对照组相比较。结果①H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性[杀伤率为(71.31±3.11)%],明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%],也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.40±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。②H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性[活性为(30.43±1.35)%、(31.40±1.80)%、(35.30±1.20)%],并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/ml],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-脾淋巴细胞组、未经DC激活的脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。该组瘤体内淋巴细胞浸润程度也高于对照组,其瘤体生长明显受到抑制。结论①H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。②H22-DC-TIL具有很强的特异性抗小鼠肝癌作用。

应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4，用47条随机引物经PCR扩增，对扩增产物进行电泳，凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均能扩增出明显的条带，条带数多为4-10条，片段大小在200-2000bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性，表现为带的有无、移动和强弱差异。结论：RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测。

小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析。结果47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4~10条,片段大小在200~2000 bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异。

^(125)I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的 探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性。方法 氯胺 T法标记、Seph adexG 5 0柱层析分离纯化制备1 2 5I VIP。通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价1 2 5I VIP与鼠H2 2肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察1 2 5I VIP在荷H2 2小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性。结果 1 2 5I标记率为73 8% ,1 2 5I VIP比活度18 2TBq mmol,放射化学纯度(RCP)98%。1 2 5I VIP与H2 2细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1 74nmol L与2 8 63nmol L ,最大结合容量(Bmax)分别为0 2 7pmol 10 6 细胞与5 75pmol 10 6 细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制1 2 5I VIP与H2 2细胞结合。各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P <0 0 5 ,P <0 0 0 1) ,2 0minT NT比值达最大为2 68,肺放射性高于血液与肝脏(P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg非标记VIP对T NT比值的抑制率分别为2 6 87%与3 5 82 %。结论 1 2 5I VIP在体内、外与鼠H2 2肝癌细胞的结合由受体介导。此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据。

乙醇诱导小鼠肝癌细胞凋亡的方法研究

目的研究乙醇诱导小鼠肝癌细胞凋亡的方法。方法不同浓度的乙醇与小鼠肝癌细胞共培养6h后观察细胞凋亡率。结果乙醇与小鼠肝癌细胞共培养6h后,12%的乙醇诱导凋亡的百分率最大。结论乙醇可诱导小鼠肝癌细胞凋亡。

青春型双歧杆菌生态制品对小鼠肝癌抑制作用的初步研究

本文观察了青春型双歧杆菌(Bif.a)对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。结果发现,青春型双歧杆菌在瘤细胞移植前或移植后应用均显示了抑制肿瘤生长的作用。将青春型双歧杆菌注入肤腔可激活肤腔巨噬细胞,提高其吞噬功能和非特异性酯酶活性,而加入体外培养的小鼠肝癌细胞未显示有杀伤瘤细胞作用。认为青春型双歧杆菌的抑瘤作用可能是该菌刺激了宿主的免疫活性细胞杀伤了瘤细胞,而非直接杀伤作用。