MBP在小鼠肝癌H22荷瘤模型中的抗肿瘤作用

目的：探讨大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）在小鼠肝癌H22荷瘤模型中的抗肿瘤作用及可能机制。方法：将12只6～8周龄的BALB/c小鼠皮下注射2×10^6个H22细胞,建立荷瘤模型,荷瘤后第2天将小鼠分为PBS组和MBP组,每组6只,并通过皮下瘤旁注射给药的方式进行干预,期间监测肿瘤体积和小鼠体重变化,测量肿瘤和各脏器质量,ELISA法检测脾细胞分泌IL-12和IFN-γ的水平,Real-time PCR检测肿瘤组织中IFN-γ和IL-17A mRNA的相对表达量。结果：MBP能抑制肿瘤的生长（P〈0.05）。与PBS组相比,MBP组小鼠脾细胞中IL-12、IFN-γ分泌量上升,肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达量上升,IL-17A mRNA的表达量下降（P〈0.05）。结论：MBP能够有效抑制肝癌H22肿瘤生长,其作用可能是通过激活Th1型免疫反应和抑制Th17型免疫反应。

古草生机汤对H22荷瘤小鼠体内抑瘤及免疫调节作用的初步研究

目的:探究古草生机汤对H22荷瘤小鼠体内实体瘤的抑瘤功效和对机体的免疫调节作用机制。方法:本研究采用H22实体瘤动物模型,随机分为空白组、模型组、阳性药组、古草生机汤低、高剂量组,灌胃给药7 d,计算各组小鼠的体质量增长率、肿瘤抑制率、胸腺及脾指数,小鼠实体瘤病理切片苏木精-伊红(HE)染色观察瘤体组织和细胞形态,酶联免疫吸附试验法检测小鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)、Fas、Fas配体、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量,实时荧光定量PCR测量小鼠瘤组织中Bax和Bcl-2mRNA的相对表达量。结果:古草生机汤有促进H22荷瘤小鼠体质量增长、抑制体内实体瘤增长和促进肿瘤凋亡坏死的作用,可提高小鼠的胸腺指数同时降低脾脏指数,可显著提高小鼠血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2的含量并降低Fas、Fas配体、AST、ALT的含量(均P<0.01),能够上调小鼠瘤组织中Bax mRNA的表达并下调Bcl-2mRNA的表达。结论:古草生机汤具有明显的体内抗肝肿瘤药效,在抑制肿瘤生长、促进肿瘤细胞凋亡、调节机体免疫方面有一定作用。

独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响

目的探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响。方法建立体内H22肝癌荷瘤小鼠的模型,采用灌胃法给予其100 mg·kg-1·d-1独角莲醇提液,以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照,连续10 d,停药后第2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重,计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量指数,采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果与生理盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较,5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子IL-2、TNF-α水平明显升高;但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论独角莲醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清IL-2和TNF-α水平。

小鼠移植性肝癌(H_(22))模型的研究及在中医药抗肿瘤中的应用

H22肿瘤瘤株属小鼠的肝细胞瘤,系1952年苏联医学科学院肿瘤研究院(莫斯科)用O-Ptoaminoa-zotolyol(OAAT)涂C3H小鼠的皮肤100次后诱发,皮下传代的肝脏实体瘤。1963年中科院上海药物所引进后将肝脏实体型瘤株变成腹水型瘤株(其腹水型又称Hca,HAC或HepA),并在Km小鼠腹腔常规?..

邪毒壅盛和气虚证H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺基因转录的差异

目的揭示H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证肾上腺基因表达的特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注早期2个证候表达量大、差异显著的基因。结果①筛选邪毒壅盛证上调和下调基因20条和7条,气虚证上调和下调基因4条和7条。②邪毒壅盛证上调的基因涉及到信号转导与免疫应答的Pomc1、Tnfaip6、Ccrl2、Rgs1等,调控转录的Bhlhb2、Ell2、Atf3、Hivep2、Klf4等,参与代谢调节的Usp37、Chka、Dusp10等;邪毒壅盛证下调基因有Hbxip、H2-T22、Ndufs6,Tgfb1、Mgat4b、Cdkl3等。③气虚证独特上调基因有Pde10a、Ol-fr1305、Olfr46、Cyp3a13等;气虚证独特下调基因涉及到激素类Gh、Pomc1、Prl、Cga和原癌基因Junb。结论荷瘤小鼠邪毒壅盛证和气虚证肾上腺存在大量基因表达的改变,这可能是证候内在的本质之一。

BABL/C×C57BL/6杂交F1代小鼠H22肝癌实体瘤模型的建立

目的 探讨H22细胞在BABL／CXC57BL／6杂交F1代小鼠的成瘤性，为研究移植物抗肿瘤效应和移植物抗宿主病提供实验对象。方法 BABL／C来源的H22肝癌细胞接种于杂交F1小鼠皮下，观察成瘤状况，并用流式细胞仪检测H22细胞的主要组织相容抗原复合物分子。结果 每只F1小鼠接种2×10^6个H22细胞时，成瘤率为100％，无自发缓解；接种第14天，肿瘤体积的变异系数23％～34％；H22细胞的H-2K。表达率（75．70±9．32）％。结论 H22细胞可成功地接种于F1小鼠皮下成瘤，建立杂交F1代实体瘤动物模型。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg^(2+)-ATP酶、葡萄糖-6-磷酸酶活性的影响

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞Mg2+-ATP酶(Mg2+-ATPase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性的影响。方法用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用酶化学染色法观察H22肝癌细胞酶活性的变化。结果蟾蜍毒素组和氟尿嘧啶组的肿瘤抑制率分别是32.0%和34.4%,与正常对照组比较差异显著(P<0.05),Mg2+-ATPase、G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度变低,提示酶活性明显下降。结论蟾蜍毒素可降低H22荷瘤小鼠肝癌细胞质膜标志酶Mg2+-ATPase及内质网标志酶G-6-Pase的活性,抑制肿瘤细胞的生长。

小鼠H22肝癌肺转移模型的建立及其意义

目的:建立小鼠H22肝癌肺转移模型,为后续研究肝癌的侵袭转移机制奠定实验基础。方法:复苏H22肝癌细胞,在培养皿中进行传代培养并计数,当细胞达到预定数目时,收集处于对数期细胞,用生理盐水洗涤2次,调整细胞浓度为1.0×10~7/ml,取0.5ml细胞悬液在无菌环境下注射到小鼠腹腔进行体内传代培养,收集小鼠腹水瘤细胞,用生理盐水洗涤2次,细胞浓度调至2×10~7/ml,取50μl细胞悬液通过小鼠尾静脉注射到小鼠体内,14d后人道主义处死小鼠,解剖取出小鼠全肺组织,病理组织学方法鉴定肿瘤组织,全肺连续切片,显微镜下计数肿瘤转移灶数目。结果:全部小鼠肺组织均肿瘤转移灶形成,肉眼可见成肺组织表面微小转移灶,病理鉴定为肝癌肺转移灶,小鼠肺部肿瘤转移灶数平均为23个。结论:成功建立了小鼠H22肝癌肺转移模型,为研究肝癌转移机制提供了理想的动物模型。

不同内酯型比例羟喜树碱对H22肝癌模型小鼠药效学

目的考察不同内酯型比例羟喜树碱(HCPT)对H22肝癌模型小鼠的抗肿瘤作用。方法构建H22肝癌小鼠模型,观察不同内酯型(0%,25%,50%,75%,100%)比例HCPT对肿瘤的抑制率以及给药前后小鼠的生长状况,测定血清生化指标,考察不同内酯型比例HCPT对小鼠肝肾功能的影响。结果阳性药和不同内酯比例HCPT对肿瘤均有抑制作用,抑制率分别为65.30%,12.57%,49.23%,75.47%,90.06%,93.22%;与模型对照组比较,不同内酯型比例组小鼠生存状况均有改善。随着内酯型比例增加,小鼠肝损伤明显减轻,但肾脏损伤程度增加。结论 HCPT内酯型比例与抗肿瘤药效呈正相关,内酯型比例约75%有较好的抗肿瘤药效,且毒性较比例为100%内酯型更低。

芍药软肝合剂对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及对Bax、Survivin表达的影响

目的:观察芍药软肝合剂对H22肝癌小鼠的抑瘤效应,并初步探讨芍药软肝合剂对bax及survivin等蛋白表达的影响,以期明确芍药软肝合剂治疗原发性肝癌的作用机制。方法:采用细胞接种的方法建立小鼠H22肝癌动物模型,随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、芍药软肝合剂低、中、高剂量组,观察各组动物的整体情况,测定各组小鼠肿瘤生长抑制率,行免疫组化染色实验对肿瘤组织中Bax、Survivin等蛋白表达进行检测。结果:①成功建立小鼠H22肝癌动物模型;②芍药软肝合剂能改善肝癌小鼠整体情况;③芍药软肝合剂中、高剂量组有较好的抑瘤作用,抑瘤率分别为47.69%、35.56%;④芍药软肝合剂能降低H22肝癌小鼠肿瘤组织中Survivin的表达水平,能上调Bax的表达水平。结论:芍药软肝合剂对H22小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,其抗肿瘤机制可能与抑制荷瘤小鼠中Survivin蛋白的表达、增加Bax蛋白的表达有关。

扶正消癥方(含药血清)对H_(22)肝癌荷瘤小鼠IL-8及VEGF的影响

目的:研究扶正消癥方(含药血清)对H22肝癌荷瘤小鼠血清中IL-8和VEGF的影响及对肿瘤生长、增殖的抑制作用。方法:采用肿瘤双植入模型技术制作H22荷瘤小鼠模型及中药含药血清的制备。40只6周龄昆明种小鼠随机均分为4组:正常组,模型组,顺铂组,扶正消癥方组(含药血清)。造模成功后连续3d把已制备好的含药血清分别注入对应组小鼠的右侧接种肿瘤,共给药3次。观测21d,第21天处死小鼠收集血清,检测血清中IL-8和VEGF的含量。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平明显升高(P<0.01),扶正消癥方(含药血清)组及顺铂组可降低小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平。与模型组相比,顺铂组和扶正消癥方(含药血清)组均可降低小鼠血清中IL-8和VEGF表达水平,顺铂组(P<0.01),扶正消癥方(含药血清)组(P<0.05)。结论:扶正消癥方(含药血清)对H22荷瘤小鼠具有提高免疫作用,降低血清中IL-8和VEGF的表达水平,具有进一步研究的价值。

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响。[方法]用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用光、电镜法观察H22肝癌细胞凋亡的变化。[结果]蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别是25.6%和30.8%(P<0.05),与对照组比较,肿瘤团块较小,细胞体积较小,异型性不明显,病理性核分裂较少,间质血管较少,坏死现象较轻。电镜下可见凋亡小体形成。[结论]蟾蜍毒素可通过诱导H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。

HP-NAP对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:研究幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(HP-NAP)对肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长抑制作用及可能机制。方法:构建p ET28a-NAP重组质粒,转入E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导HP-NAP的表达,Ni柱亲和层析法对其进行分离纯化。取BALB/c小鼠,皮下注射H22细胞(2×106个/只)构建荷瘤模型,随机分为PBS组和HP-NAP组,以皮下瘤旁注射的方式给予PBS或HP-NAP,监测肿瘤体积和小鼠体重变化。1周后牺牲小鼠,取瘤体及各脏器称重,以ELISA法检测脾细胞IFN-γ分泌水平,实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达水平。结果:利用大肠杆菌原核表达系统成功制备了HP-NAP。HP-NAP可显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,对小鼠体重和脏器指数无明显影响。与PBS组相比,HP-NAP组小鼠脾细胞IFN-γ的分泌水平及肿瘤组织中IFN-γmRNA的表达水平均升高(P<0.05)。结论:HP-NAP可能通过上调IFN-γ的表达抑制肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。

艾迪注射液对H22肝癌模型小鼠组织中阿霉素和阿霉醇分布的影响

目的研究艾迪注射液(ADI)对阿霉素(DOX)及其活性代谢产物阿霉素醇(DOXol)在H22肝癌模型小鼠体内组织分布的影响。方法建立H22肝癌移植瘤小鼠模型,将模型小鼠随机分成DOX单次给药组(SDOX组)、DOX多次给药组(MDOX组)和ADI联合MDOX组(AMDOX组)。三组小鼠均造模15d,于造模结束2 h时收集各组小鼠的血液、肿瘤、心、肝、肾、肺组织,样本处理后,采用超高效液相串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定DOX和DOXol浓度,比较各组小鼠DOX和DOXol的组织分布情况。结果与SDOX组比较,MDOX组小鼠各组织中DOX和DOXol的含量均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);联合用药后,DOX和DOXol除了在肿瘤部位的积累量明显增加外,在其余组织中均表现出不同程度的降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ADI可能是通过增加肿瘤中DOX和DOXol浓度增强抗肿瘤能力,并且通过降低心脏中DOX和DOXol浓度、降低DOX的心脏毒性。

含笑内酯对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用

目的探讨含笑内酯(MCL)对H22肝癌腹水瘤模型小鼠腹腔积液的治疗作用及机制。方法取H22肝癌腹水瘤细胞(0.2 m L,约2×10~7个)注射至40只BALB/C小鼠腹腔建立腹水瘤模型。接种24 h后小鼠随机分为MCL组[50 mg/(kg·d)MCL连续腹腔给药7 d]和模型组(等剂量生理盐水),每组20只。每日观察小鼠日常活动状态,记录小鼠体质量、腹围的变化。末次给药24 h后各组处死13只小鼠,采血后检测肿瘤标志物糖类抗原(CA)199、血清癌胚抗原(CEA)、铁蛋白、CA242、甲胎蛋白(AFP)水平;留取肝脏组织及腹水瘤细胞行HE染色,观察其病理状态;流式细胞术检测2组小鼠腹水瘤细胞凋亡情况。结果实验第4天开始,与模型组相比,MCL组体质量下降,腹围缩小(P<0.05)。与模型组比较,MCL组CEA、CA242、AFP水平出现下降,铁蛋白明显升高,肝组织及腹水瘤细胞水肿程度降低,腹水瘤细胞凋亡率升高(均P<0.05)。结论 MCL可抑制H22肝癌腹水瘤小鼠腹腔积液的生成,其机制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡来实现的。

贝参茱萸方抑制H22肝癌模型小鼠肿瘤生长的作用及其分子机制

目的探讨贝参茱萸方抑制H22肝癌模型小鼠肿瘤生长的作用及其分子机制,为贝参茱萸方的临床应用及开发用于治疗和改善原发性肝癌患者生存质量的中成药制剂提供理论依据。方法建立小鼠肝癌H22移植性肿瘤模型。将40只昆明小鼠分为5组:空白组、模型组、贝参茱萸方低、中、高浓度(0.25g·mL-1、0.5g·mL-1、1g·mL-1)组,每组各8只。于造模后第二天开始灌胃给药,每日一次,每次0.4 mL/只,连续给药30天。给药期间对H22荷瘤小鼠体重、饮食量及肿瘤大小进行测量;HE染色法观察肿瘤细胞形态的变化;免疫组化法检测肿瘤增殖标志物Ki67的阳性表达水平;Western blot法检测caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平。结果(1)与模型组相比,贝参茱萸方高、中浓度组的小鼠肿瘤体积在第28天时均明显减小(P<0.05);(2)与模型组相比,贝参茱萸方高、中、低浓度组肿瘤细胞的坏死和凋亡更明显;(3)与空白组比较,模型组小鼠体内Ki67的阳性表达明显(P<0.05)。与模型组相比,小鼠体内Ki67的阳性表达率在贝参茱萸方高、中、低浓度组下降,其中贝参茱萸方高浓度组和中浓度组具有统计学意义(P<0.05);(4)与空白组相比,caspase-3、caspase-9在模型组中的表达降低,具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,促凋亡因子caspase-3在贝参茱萸方高、中浓度组的表达均升高(P<0.05),而促凋亡因子caspase-9在贝参茱萸方高浓度组蛋白水平的表达升高(P<0.05)。结论贝参茱萸方能促进肿瘤细胞的坏死和凋亡,抑制肿瘤的生长,其可能是通过促进促凋亡因子caspase-3、caspase-9蛋白水平的表达发挥作用。

荷H_(22)肝癌阴虚证小鼠病证结合动物模型的研制

目的:建立荷H22肝癌阴虚证病证结合动物模型。方法:实验小鼠随机分成两组,病证模型组先用糖皮质激素法制备阴虚证模型,随后两组同时接种H22肝癌细胞悬液,完成造模。观察记录实验动物符合阴虚证的一般外在表现、体重、毛发情况、二便情况等指标,进行量化评价及分析,第11日处死小鼠,观察比较两组肿瘤生长情况。结果:阴虚病证模型组小鼠较病模组明显表现出阴虚症状,体重增长较病模组明显减慢,肿瘤生长较快。结论:建立了荷H22肝癌阴虚证小鼠的病证结合动物模型,为中医药防治肝癌研究提供平台。

干、鲜壁虎冻干粉对小鼠H22肝癌体内外抑制作用

目的:研究干、鲜壁虎冻干粉对荷H22实体型移植瘤小鼠体内抑瘤作用及其含药血清体外对H22肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:采用昆明小鼠H22移植瘤模型观察干、鲜壁虎冻干粉体内抑瘤活性及小鼠胸腺、脾脏指数变化:MTT法检测不同浓度干、鲜壁虎冻干粉含药血清对H22肝癌细胞体外杀伤作用.结果:干、鲜壁虎低、中、高3个剂量组的抑瘤率分别为25.6%,40.0%,48.5%和20.7%,28.1%,51.1%.各壁虎组与西药5-FU组相比,不同程度提高了荷瘤小鼠的胸腺质量(P<0.01)、胸腺指数(P<0.05或P<0.01)和脾脏质量(P<0.05或P<0.01)、脾脏指数(P<0.05).含药血清在体外能够明显抑制H22细胞的增殖,干、鲜壁虎低、中、高含药血清组的增殖抑制率为17.4%,21.0%,34.5%和16.4%,26.3%,43.2%.结论:干、鲜壁虎冻干粉均具有良好的抗肿瘤作用.

猫爪草不同提取物对移植性肝癌H_(22)小鼠的抗肿瘤作用

目的:探讨猫爪草不同提取物对移植性肝癌H_(22)小鼠的抗肿瘤作用。方法:采用系统溶剂法提取分离猫爪草获得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水5个提取物。建立移植性肝癌H_(22)小鼠模型后,检测各提取物灌胃给药10 d后的抑瘤率、生命延长率、肺脏指数、肝脏指数、脾脏指数和胸腺指数等。结果:石油醚提取物高、中、低剂量组对H_(22)小鼠的肿瘤生长均无明显的抑制作用。氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物高、中、低剂量组的抑瘤率(%)依次分别为51．78,48．80,33．33;55．51,45．10,31．36;32．71,25．08,24．64;生命延长率(%)分别为10．58,60．09, 58．23;-1．05,56．91,45,09;60．98,59．76,50．84;水提物高、中、低剂量组的生命延长率(%)分别为74．98,74．76, 50．05。水提物可以增加脾脏指数和胸腺指数。结论:猫爪草氯仿、乙酸乙酯和正丁醇提取物具有一定体内抗肿瘤作用,而水提取物具有一定的免疫调节作用。