肿瘤坏死因子联合环磷酰胺对H_（22）肝癌小鼠的抗肿瘤作用

肿瘤坏死因子（ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓＦａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）和环磷酰胺（Ｃｙｃｌｏ－ｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ，ＣＹ）联合应用对Ｈ２２肝癌小鼠具有显著协同抗肿瘤作用，这种协同作用与二者用药的先后次序有显著关系。ＴＮＦ、ＣＹ单独应用及ＣＹ先于ＴＮＦ应用的抗瘤作用差（抑瘤率２５．６０％，ＩＬＳ３２．６４％），ＴＮＦ与ＣＹ同时联合应用比单独应用的抗瘤作用略增强（抑瘤率３４．７２％，ＩＬＳ５４．７４％），但如先用ＴＮＦ后用ＣＹ抗瘤作用则显著增强，可以明显改善Ｈ２２肝癌小鼠的免疫功能（ＮＫ活性增长率４９．７０％，ＬＡＫ活性增长率４６．３０％），明显抑制实体瘤生长（抑瘤率６０．１２％），显著延长Ｈ２２肝癌小鼠（腹水型）生存期（ＩＬＳ１０４．７８％），并且有２５％Ｈ２２肝癌小鼠完全治愈。提示：联合ＴＮＦ与ＣＹ治疗肿瘤，ＴＮＦ、ＣＹ序贯用药方法为最佳方案。

小鼠移植性肝癌(H_(22))模型的研究及在中医药抗肿瘤中的应用

H22肿瘤瘤株属小鼠的肝细胞瘤,系1952年苏联医学科学院肿瘤研究院(莫斯科)用O-Ptoaminoa-zotolyol(OAAT)涂C3H小鼠的皮肤100次后诱发,皮下传代的肝脏实体瘤。1963年中科院上海药物所引进后将肝脏实体型瘤株变成腹水型瘤株(其腹水型又称Hca,HAC或HepA),并在Km小鼠腹腔常规?..

白藜芦醇对小鼠肝癌细胞H_(22)的抑制作用

目的 :研究白藜芦醇对体外培养的小鼠肝癌细胞 H2 2 生长的影响。方法 :应用MTT法、流式细胞仪来分析白藜芦醇对 H2 2 细胞生长的影响及细胞周期的变化。结果 :白藜芦醇对 H2 2 细胞的增殖具有抑制作用 ,IC5 0为 6.1 2 mg/L ,流式细胞术证实 ,白藜芦醇能引起 H2 2 细胞 S期阻滞。结论 :白藜芦醇通过改变 H2 2 细胞的细胞周期分布来抑制其生长。

沙冬青提取物(JA1)对小鼠肝癌H_(22)细胞体外增殖和皮下移植生长的抑制

采用噻唑蓝(MTT)还原法测定梯度浓度的沙冬青提取物(JA1)对体外培养小鼠肝癌细胞株H22增殖的影响;同时对皮下移植肿瘤H22小鼠灌服不同剂量的JA1以检测抑瘤率,进一步采用流式细胞术、光镜和透射电子显微镜技术,检测和观察JA1对小鼠移植性肿瘤H22的诱导凋亡作用。结果显示,JA1可显著抑制体外培养小鼠肝癌H22细胞的增殖,并且这种抑制存在浓度和时间关系。同时,JA1对小鼠皮下移植性肿瘤H22也有明显的抑制作用。流式细胞分析表明,JA1灌胃试验组瘤组织细胞DNA直方图上见有明显的凋亡峰;在光镜和电镜下,JA1灌胃试验组也见有明显的瘤细胞凋亡,表明JA1对体内、外H22细胞的增殖抑制是以诱导凋亡为基础的。

复方龙葵糖浆诱导小鼠H_(22)肝癌细胞凋亡作用机制研究

探讨复方龙葵糖浆对小鼠H22肝癌细胞的作用及其机制。用腋下皮下注射H22肝癌细胞造成小鼠腋下皮下肿瘤移植模型。观察复方龙葵糖浆诱导小鼠H22肝癌细胞凋亡以及对小鼠肝癌细胞P53、bc1-2基因表达的影响。结果证实复方龙葵糖菜对b1c一2、P53的表达分别有明显的抑制和促进作用,具有诱导小鼠H22肝癌细胞的凋亡的功效。

青蒿醇提物对H_(22)肝癌小鼠的抑瘤作用研究

目的:观察青蒿醇提物对H22肝癌小鼠的体内抑瘤作用。方法:取H22肝癌细胞接种于小鼠右腋皮下,随机分为模型对照组、5-氟尿嘧啶组(5-FU)及青蒿醇提物125 mg/(kg.d)组、500 mg/(kg.d)组,5-FU组肌肉注射给药,其余各组灌胃给药。连续给药8 d后,剖瘤称取质量,计算抑瘤率;利用高效液相色谱仪测定青蒿醇提物中青蒿素含量。结果:与模型对照组比较,青蒿醇提物各剂量组均不同程度的抑制肿瘤生长(P<0.01),青蒿醇提物125 mg/(kg.d)组和青蒿醇提物500 mg/(kg.d)组的抑瘤率分别为54.6%、50.6%;本实验青蒿醇提物中青蒿素含量为0.02%,而在青蒿素抗H22小鼠肝癌试验中,青蒿素在剂量为10 mg/(kg.d)时,对H22小鼠肝癌已没有明显的抑制作用。结论:青蒿醇提物对肝癌有明显的抑制作用;除青蒿素以外,中药青蒿中可能存在其它的抗肿瘤成分。

SPRIDA对小鼠H_(22)肝癌相关基因表达谱的影响

目的研究SPRIDA(施普睿达)对荷H22肝癌小鼠基因表达的调节差异,探讨SPRIDA治疗小鼠肝癌的可能机制。方法运用基因表达谱芯片技术检测SPRIDA对荷瘤小鼠的基因表达调节,并对差异基因进行Pathway聚类和统计分析。结果SPRIDA作用前后表达有差异的基因共358条(占芯片基因总数的8.74%),其中172条(172/4096,4.20%)基因表达上调,186条(186/4096,4.54%)基因表达下调。经Pathway聚类分析,表达差异基因主要属于细胞凋亡、细胞周期、NK细胞介导的细胞毒、细胞黏附分子、肿瘤生长因子β、Wnt等信号通路。结论SPRIDA主要是通过影响肿瘤细胞周期进程、调节肿瘤细胞凋亡和黏附相关基因的表达等多种途径抑制肿瘤的增殖和转移。

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌H_(22)细胞p53和Caspases-3蛋白表达的影响

目的 :检测扶正抑瘤颗粒 (FYK)含药血清诱导小鼠肝癌H2 2 细胞凋亡过程中对其野生型p5 3和caspases 3蛋白表达的影响。方法 :选用小鼠肝癌H2 2 细胞作为实验的细胞株 ,应用血清药理学方法制备FYK低、中、高剂量实验组含药血清和对照组天仙胶囊含药血清 ,用上述含药血清与H2 2 细胞在体外共同孵育 2 4h、 4 8h、 72h后 ,应用MTT法检测细胞生长抑制率 ,TUNEL法检测细胞凋亡 ,用免疫细胞化学技术检测H2 2 细胞野生型p5 3和caspases 3蛋白表达水平。结果 :FYK含药血清可诱导H2 2 细胞凋亡 ,处理 4 8h和 72h凋亡率明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ,并有大量野生型p5 3和caspases 3蛋白表达 ,天仙胶囊含药血清处理后caspases - 3蛋白表达上调 ,而野生型p5 3蛋白表达水平没有增强。结论 :FYK含药血清在诱导H2 2 细胞发生凋亡过程中野生型p5 3和caspases 3蛋白表达水平均增强 ,这可能是其抗肿瘤作用的分子机制之一 ,而天仙胶囊含药血清仅上调caspases 3蛋白表达 ,二者诱导细胞凋亡的机制有所不同。

青蒿琥酯对H_(22)小鼠肝癌的体内抑瘤作用

目的:探讨青蒿琥酯对H22小鼠肝癌的体内抑瘤作用。方法:取雌性KM小鼠40只,将H22小鼠肝癌细胞接种于小鼠右前肢腋皮下,随机分为模型对照组(Control)、环磷酰胺组(CTX)及青蒿琥酯(ASUN)30、90、150mg/kg低、中、高三个剂量组,共5组,每组8只。连续腹腔注射给药8天后,剥取瘤块和脾脏,称重,计算抑瘤率。结果:青蒿琥酯30、90、150mg/kg剂量组的抑瘤率分别为38.9%、31.1%和21.5%,抑瘤率随剂量增大而降低,其中青蒿琥酯30mg/kg剂量组与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);荷瘤小鼠脾质量随青蒿琥酯剂量增加而增大。结论:青蒿琥酯对H22小鼠肝癌具有体内抑瘤作用。

芪灵益肝煎对小鼠H_(22)肝癌细胞CDK4表达的影响

目的:观察芪灵益肝煎对小鼠肝癌的抑制作用及其对CDK4表达的影响,以明确其对细胞周期调控的影响。方法:将腹水型H22细胞株接种于小鼠右前腋窝皮下,造成实体瘤模型,将30只小鼠随机分为3组,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组和盐水对照组,每组10只。从荷瘤次日起,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组分别以芪灵益肝煎、灵芝煎剂0.4 mL(约含生药0.4 g)灌胃,盐水对照组以0.9%生理盐水0.4 mL灌胃,连续给药20 d后取瘤称重,计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测CDK4的表达。结果:芪灵益肝煎、灵芝煎剂对小鼠H22肝癌细胞的生长均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为36.33%、24.18%,与盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05),且芪灵益肝煎抑瘤作用优于灵芝煎剂;CDK4在3组均呈阳性表达,芪灵益肝煎组CDK4表达减弱,与盐水对照组比较有显著性差异(P<0.05),灵芝煎剂组CDK4表达无明显变化,与盐水对照组比较无显著性差异(P>0.05),芪灵益肝煎组与灵芝煎剂组比较CDK4表达有显著性差异(P<0.05)。结论:芪灵益肝煎对小鼠H22肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与降低肝癌细胞内CDK4的表达有关。

不同单位保存的小鼠肝癌H_(22)细胞特性比较研究

目的 对不同单位保存的小鼠肝癌H2 2 细胞株的细胞特性进行比较研究。方法 从三个单位引进小鼠肝癌H2 2 瘤株 ,KM小鼠腹腔传代 ,然后进行染色体、DNA含量、细胞大小比较分析。结果 中国医学科学院药物研究所(北京H2 2 )、山东省医学科学院药物研究所 (山东H2 2 )和武汉大学典型培养物保藏中心 (武汉H2 2 )三个单位H2 2 瘤株的染色体均数分别为 (30 3± 8 9)条、 (33 0± 8 9)条、 (35 6± 10 1)条 ,方差分析表明不同单位瘤株间差异均有显著性 (P <0 0 1) ;直方图分析显示主流染色体范围分别为 2 7～ 2 9、 30～ 32、 33～ 35。武汉H2 2 瘤株细胞面积、长径、短径与北京H2 2 、山东H2 2 比较差异均有显著性。流式细胞术DNA含量分析表明北京H2 2 DNA含量最少 ,武汉H2 2 DNA含量最多 ,统计学分析表明不同单位瘤株间差异均有显著性 ;DNA指数结果表明武汉H2 2 为非整倍体肿瘤 ,北京H2 2 、山东H2 2 为近二倍体肿瘤。结论 不同单位保种和使用的H2 2 瘤株的细胞特性已存在显著差异。

芍药软肝合剂对肝癌H_(22)荷瘤小鼠的抑瘤作用及对Bax、Survivin表达的影响

目的:观察芍药软肝合剂对H22肝癌小鼠的抑瘤效应,并初步探讨芍药软肝合剂对bax及survivin等蛋白表达的影响,以期明确芍药软肝合剂治疗原发性肝癌的作用机制。方法:采用细胞接种的方法建立小鼠H22肝癌动物模型,随机分为正常组、模型组、环磷酰胺组、芍药软肝合剂低、中、高剂量组,观察各组动物的整体情况,测定各组小鼠肿瘤生长抑制率,行免疫组化染色实验对肿瘤组织中Bax、Survivin等蛋白表达进行检测。结果:①成功建立小鼠H22肝癌动物模型;②芍药软肝合剂能改善肝癌小鼠整体情况;③芍药软肝合剂中、高剂量组有较好的抑瘤作用,抑瘤率分别为47.69%、35.56%;④芍药软肝合剂能降低H22肝癌小鼠肿瘤组织中Survivin的表达水平,能上调Bax的表达水平。结论:芍药软肝合剂对H22小鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,其抗肿瘤机制可能与抑制荷瘤小鼠中Survivin蛋白的表达、增加Bax蛋白的表达有关。

小鼠肝癌H_(22)克隆细胞株H2D8与其原瘤株武汉H_(22)的基本特性比较研究

用细胞克隆的方法获得武汉大学典型培养物保藏中心保存的小鼠肝癌H2 2 瘤株 (武汉H2 2 )的克隆细胞株H2D8。比较武汉H2 2 及H2D8对血清的依赖性、致瘤性、病理特征和对环磷酰胺 (CTX)的敏感性。结果发现H2D8细胞株对血清的依赖性 ,和对小鼠致瘤性及肿瘤病理学特性与武汉H2 2 细胞无明显差异 ;H2D8细胞对CTX治疗的敏感性更高。说明H2D8克隆株在体外培养、致瘤性和病理特征方面能保持原瘤株的细胞特性 ;

华蟾素对小鼠H_(22)肝癌移植瘤作用的研究

目的 :观察华蟾素对小鼠移植肝肿瘤H2 2 生长的影响 ,初步探讨华蟾素对肝肿瘤细胞的作用机制。方法 :以瘤株 (H2 2 )接种于小鼠 ,制备肝癌模型 ,设正常对照组、荷瘤模型组、5 -FU组、华蟾素组。各组小鼠采血计白细胞数 ,切除肿瘤、胸腺及脾脏 ,称取重量 ,计算肿瘤抑制率 ;光、电镜下观察肿瘤组织结构。结果 :华蟾素和 5 -FU组小鼠肿瘤抑制率分别为 3 0 .99%和 74.2 8% ,均明显高于荷瘤模型组 (P <0 .0 1)。华蟾素组白细胞数与正常组比较无明显差异 (P>0 .0 5 ) ,显著高于 5 -FU组 (P <0 .0 1)。电镜观察华蟾素组有典型的细胞凋亡形态学特征。结论 :华蟾素通过提高机体免疫功能 。

“治癌灵”穴贴及针刺对H_(22)肝癌小鼠抑癌作用的影响

目的:通过观察"治癌灵"及针刺对小鼠荷H22移植性肝癌细胞肝细胞生长因子(HGF)和白介素-6(IL-6)蛋白水平表达的调节作用,探讨该疗法抑制肿瘤的作用是否与抑制肝细胞生长因子的生成、降低白介素-6的表达有关。方法:于昆明种雄性小鼠前肢右腋皮下接种0.2mlH22肿瘤细胞悬液(浓度为1×107/ml)进行造模。利用造模动物观察瘤块重量,计算肿瘤生长抑制率,用免疫组化法检测瘤细胞中HGF、IL-6的表达程度。结果:①与模型组相比,各治疗组均降低体内瘤组织内HGF蛋白表达水平(P<0.001),显著抑制瘤体生长(P<0.001),综合组优于穴贴组和针刺组。②与模型组相比,各治疗组均降低体内瘤组织内IL-6蛋白表达水平(P<0.009),显著抑制瘤体生长(P<0.009),明显改善小鼠的生活质量,且综合组优于穴贴组和针刺组。结论:"治癌灵"穴位贴敷及针刺能抑制小鼠荷H22移植性肝癌细胞的生长,控制肿瘤侵袭转移,可降低HGF、IL-6的蛋白表达水平。

恩度抗小鼠肝癌H_(22)作用研究

目的借助鼠模型观察恩度应用后肿瘤从开始生长到长到一定规模时肿瘤组织的生长情况。方法建立肝癌H_(22)小鼠模型,共32只小鼠,随机分为四组。在不同时间分别对各组给药,分析实验第10、14、18天四组小鼠肿瘤体积情况。结果实验第10天、第14天所有给药组肿瘤体积与对照组肿瘤体积比较,差异无统计学意义。实验第18天:接种肿瘤当天开始腹腔给药组(B组)肿瘤体积与对照组(D组)肿瘤体积比较,差异有统计学意义(P<0.05)。接种肿瘤前开始给药组(A组)和接种肿瘤后开始给药组(C组)肿瘤体积与对照组(D组)肿瘤体积比较差异无统计学意义。结论单独应用恩度有抗肿瘤作用,接种肿瘤时为最佳给药时机,而且需给药18 d才能体现恩度抗肿瘤作用。

裴氏肝癌方对小鼠移植性肝癌H_(22)作用的研究

目的:探讨中药裴氏肝癌方治疗原发性肝癌的作用。方法:将52只小鼠随机分为裴氏肝癌方高剂量组(56 g/kg)10只、裴氏肝癌方低剂量组(28 g/kg)10只、5-Fu组(0.02 g/kg)10只、复方斑蝥组(0.25 g/kg)10只及模型对照组12只。裴氏肝癌方两剂量组及复方斑蝥组按0.02 mL/g灌胃给药,5-Fu注射液按0.01 mL/g剂量腹腔注射给药,模型对照组以等容积的蒸馏水灌胃,1 d 1次,共11次。观察动物体质量等一般情况,检测血ALT、AST、TP、ALB及瘤重,计算抑瘤率、胸腺指数及脾脏指数。结果:裴氏肝癌方两剂量组体质量增加,但与模型对照组对比,差别无统计学意义。裴氏肝癌方高剂量组、5-Fu组瘤重与模型对照组对比,差别有统计学意义(依次为P<0.05,P<0.01)。裴氏肝癌方高剂量组动物血清ALT、AST较模型对照组降低,TP、ALB较模型对照组升高,其中AST及ALB与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01)。5-Fu组血清ALT、TP、ALB与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。裴氏肝癌方高剂量组及5-Fu组胸腺指数与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01);各药物组的脾脏指数与模型对照组对比,差别均无统计学意义(P>0.05)。结论:裴氏肝癌方对荷瘤小鼠原发性肝癌有抑制作用。

熊胆粉对小鼠肝癌H_(22)的抑制作用及量效关系研究

目的:研究熊胆粉对小鼠肝癌H22的抑制作用及量效关系,为新药开发确立最佳剂量。方法:建立小鼠体内移植性肿瘤细胞H22模型,熊胆粉分为100、200、400、800、1 600mg/kg 5个剂量组,每日灌胃给药1次,连续12 d。停药后24 h颈椎脱臼处死荷瘤小鼠,剥离肿瘤组织,分别取瘤、胸腺、脾、肝称重。结果:熊胆粉100、200、400、800、1 600mg/kg剂量组对肝癌H22的抑瘤率分别为36.00%、52.81%、61.44%、51.39%、45.96%;各剂量组对肝癌H22小鼠的体质量、胸腺指数、脾指数及肝指数均无明显影响。结论:熊胆粉对小鼠肝癌H22具有明显的抑制作用,其抗肝癌H22的3个最佳剂量为200、400、800mg/kg。