致病性大肠杆菌感染小鼠肠炎模型的建立及其分子机制研究

本试验旨在建立产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)感染小鼠肠炎模型,并初步揭示其分子机制。将120只小鼠随机分为4组,每组30只,每组5个重复,每个重复6只。低、中、高剂量试验组分别经口腔灌服1×10^(5)、1×10^(6)和1×10^(7) CFU/只ETEC,对照组灌服等体积生理盐水,各组注射剂量均为0.2 mL。分别于攻毒后2、48、72、96和120 h观察小鼠临床表现并称量其体重,同时从每个组中随机取6只采集其血液和组织样本。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的含量,通过组织切片和苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠空肠、肝脏和脾脏的病理变化,利用实时荧光定量PCR检测Toll-样受体4(TLR4)、核因子kappa B p65亚基(NF-κB p 65)、髓样分化因子88(MyD88)、B细胞淋巴瘤因子3(BCl3)mRNA相对表达量。结果显示:与对照组相比,攻毒小鼠精神沉郁,进食减少,攻毒后72和96 h试验组小鼠体重均显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05),肠道、肝脏和脾脏组织切片出现明显的炎症反应;攻毒后48和72 h试验组血清中CRP、TNF-α和IL-8的含量极显著升高(P<0.01);攻毒后48、72和96 h试验组空肠组织中TLR4、NF-κB p 65、MyD88 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01);攻毒后24和120 h试验组空肠组织中BCl3 mRNA相对表达量分别极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05),攻毒后72 h呈极显著下降(P<0.01)。综上所述,本研究成功建立了ETEC感染小鼠肠炎模型,并且该病原菌可能是通过TLR4/NF-κB信号通路诱导炎症相关因子生成和组织中炎性细胞浸润,从而引起小鼠炎症反应。

费约果发酵果汁的功效及其在改善DSS诱导的小鼠肠炎中的潜在作用

随着消费者对健康饮食的日益重视,具有保健作用的发酵果蔬汁相关产品引起了研究者的 广泛关注。费约果果实含有大量的生物活性物质,这些化合物有助于一系列健康效应。本文选择费约果 为发酵原料,以商业菌种为发酵菌种,阐述费约果发酵果汁的功效;在此基础上进一步探究发酵费约果 果汁对 DSS 诱导的小鼠肠炎模型改善情况和肠道菌群结构的影响,以期为功能性发酵费约果制品开发 提供基础支撑,同时为 IBD 的辅助治疗提供新策略。

石榴汁对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用

溃疡性结肠炎是一种发病机制尚不明确且难以根治的慢性病,在我国发病率逐年升高,其药物治疗依赖性强,副作用明显,因此寻求天然营养疗法成为人们的关注热点。本研究采用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium salt,DSS)建立小鼠溃疡性结肠炎模型,用美沙拉嗪(130 mg/(kg m_(b)·d))和石榴汁(30%、100%(体积分数),10 mL/d)进行干预,检测小鼠体质量、疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠长度,采用试剂盒检测小鼠肝肾功能指标及氧化应激水平,采用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子水平,并对结肠组织切片观察,采用气相色谱-质谱联用(gaschromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析小鼠粪便短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)含量,综合评价石榴汁对小鼠溃疡性结肠炎的作用及其机制。结果发现:与DSS组相比,石榴汁干预组小鼠体质量和结肠长度增加、DAI降低、肝肾功能改善,促炎因子表达量极显著降低(P<0.01),抗炎因子表达量极显著提升(P<0.01),氧化应激水平及炎性标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力极显著降低(P<0.01),粪便SCFAs含量上调,结肠上皮结构改善。石榴汁能改善小鼠肠黏膜损伤和肝肾功能障碍,对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有良好的治疗作用。

TREM-2在DSS诱导小鼠肠炎中的作用

目的探讨髓样细胞触发受体-2(TREM-2)对小鼠肠炎模型肠道炎症发生发展的影响。方法构建葡萄糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠实验性肠炎模型,采用流式细胞术检测TREM-2在炎症肠道细胞的表达,采用TREM-2敲除小鼠构建小鼠肠炎模型,检测体重、临床评分以及结肠长度,采用荧光定量PCR检测小鼠脾脏(SPs)和肠系膜淋巴(MLNs)细胞因子的表达。结果肠炎小鼠肠道TREM-2表达显著高于正常小鼠,TREM-2基因敲除肠炎小鼠体重以及结肠长度均显著高于野生型对照组,疾病临床评分(DAI)以及肠道病理评分显著低于野生型对照组小鼠,脾脏和肠系膜淋巴结的促炎性细胞因子(IFN-γ和IL-17a)表达显著低于野生型对照组小鼠(P<0.05)。结论 TREM-2增强肠道炎症反应和病理损伤,增强促炎性细胞因子分泌,从而调控炎症性肠病的发生发展,TREM-2有望成为治疗炎症性肠病的一个有效靶点。

富含Gln小麦水解蛋白对DSS诱导小鼠结肠炎的作用研究

探讨了富含谷氨酰胺(Gln)小麦水解蛋白对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠结肠炎的影响。将24只小鼠分为正常对照组(Ⅰ组)、DSS诱导模型组(Ⅱ组)和营养液组(Ⅲ组)。观察了临床表现及结肠黏膜的病理组织变化,检测了结肠组织的抗氧化活性,荧光定量PCR测定了结肠组织中炎症因子的表达。结果表明,营养液处理后,减轻了由结肠炎造成的结肠黏膜的病理损伤,结肠组织中的IFN-γ和IL-6的表达较模型组低,而IL-10和TGF-β的表达差异不显著,表明富含Gln的小麦水解蛋白可以促进促炎/抑炎因子的相对平衡,从而缓解肠道炎症,是一种潜在的抗氧化和抗炎资源。

以DSS致小鼠溃疡性结肠炎为动物模型呼吸道sIgA为检测指标探讨“肺合大肠”理论的相关途径

目的:从黏膜免疫角度探讨“肺合大肠”理论的具体相关途径,丰富“肺合大肠”理论的内涵,为溃疡性结肠炎的治疗,提供新的思路。方法:以DSS致小鼠溃疡性结肠炎为动物模型,检测模型组与空白对照组呼吸道灌洗液中分泌性IgA(sIgA)的含量。结果:模型组与空白对照组分泌性IgA(sIgA)含量经统计学处理后,无统计学意义。结论:①本次动物实验设计丰富了“肺合大肠”理论的实验研究方法;②实验结果可能和3种因素的影响有关;③通过本实验探讨动物实验方法存在的问题;④该实验的启示。

双歧杆菌对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道黏膜的保护作用及其对NF-κB的影响

目的随着对炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)发病机制的深入研究,肠道微生态与免疫系统的密切关系日益受到重视。本研究旨在评价双歧杆菌单一活菌制剂对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的小鼠结肠炎肠道黏膜的保护作用及其可能作用机制。方法 BALB/c小鼠饮用含7%DSS的饮用水10d,诱导小鼠亚急性结肠炎的模型,模拟人类溃疡性结肠炎。空白对照组(n=6)饮用未添加DSS的饮用水。饮用DSS的小鼠(n=37)随机分为5组,分别给予不同的药物治疗:①提前给予双歧杆菌治疗组(Pre-BIF):在小鼠暴露于DSS前10d及暴露过程中给予双歧杆菌治疗;②强的松治疗组(PRED):在小鼠暴露于DSS同时给予强的松治疗;③双歧杆菌治疗组(BIF):小鼠暴露于DSS的同时给予双歧杆菌治疗;④强的松+双歧杆菌联合治疗组(PRED+BIF):小鼠暴露于DSS的同时给予强的松和双歧杆菌联合治疗;⑤生理盐水对照组(NS):小鼠暴露于DSS的同时给予生理盐水作为对照。不同药物皆以溶液形式灌胃给药。从4方面评价各组的处理反应:①一般情况:包括体重、结肠长度、大体评分;②组织病理评分;③化学比色法检测病变组织髓过氧化物酶(MPO)活性;④免疫组织化学方法检测活化的NF-κB。结果 Pre-BIF治疗组和BIF治疗组的大体评分、组织病理评分、MPO活性与NS对照组相比明显改善(P<0.01;P<0.05)。Pre-BIF治疗组、BIF治疗组和PRED+BIF治疗组的NF-κB活性评分显著低于NS对照组(P均<0.01)。结论双歧杆菌对小鼠DSS结肠炎肠道黏膜具有保护作用,提前应用保护效果更好。双歧杆菌对肠道黏膜的保护作用与抑制NF-κB的活化有关。

小鼠急性结肠炎中亚硒酸钠对滤泡辅助性T细胞的调控作用

微量元素硒对炎性肠道疾病的免疫调控效应一直是研究关注的焦点.本文采用葡聚糖硫酸钠诱导的实验性小鼠急性溃疡性结肠炎模型,观察了亚硒酸钠(Na_(2)SeO_(3))灌胃对肠道局部及相关淋巴组织中的天然免疫细胞、适应性免疫B细胞、细胞毒性T细胞(cytotoxic T cells,CTL)和辅助性T细胞(helper T cells,T_(H))的不同亚群T_(H)1,T_(H)2,调节性T细胞(regulatory T cells,T_(reg))及滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,T_(FH))等的功能分化调控效应,并在体外观察了Na_(2)SeO_(3)对T_(FH)细胞分化的调控规律.结果显示,亚硒酸钠灌胃补硒可以加重急性肠炎,并促进T_(FH)细胞在肠道局部及肠周围淋巴组织浸润和B细胞免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)分泌.这为微量元素硒免疫调控肠道炎性疾病研究提供了依据,也为硒的临床应用研究提供了实验数据.

双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎肠道黏膜Toll样受体表达的影响

目的:研究双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型中肠道组织Toll样受体(TLR)2、4、9表达的影响。方法:出生24 h内Sprague-Dewley新生鼠随机分为对照组、实验组、治疗组,每组12只。对照组由母鼠喂养,实验组采取人工喂养+缺氧冷刺激进行造模,治疗组采用人工喂养+缺氧冷刺激并添加喂养双歧杆菌处理(2次/日,1×108cfu/次)。每日定时称体重做记录,在实验第3天处死新生鼠。用HE染色病理切片观察新生鼠肠道病理变化,RT-PCR方法检测肠道黏膜TLR2、TLR4、TLR9的mRNA表达量。结果:3组小鼠体重比较均具有统计学意义,对照组体重增长高于实验组及治疗组,治疗组体重增长高于实验组(P<0.05);实验组病理评分高于对照组及治疗组,治疗组高于对照组(P<0.05);TLR4 mRNA相对表达量实验组高于对照组及治疗组(P<0.05),治疗组的TLR2 mRNA、TLR9 mRNA相对表达量均高于实验组,TLR4 mRNA相对表达量低于实验组,这两组的3种受体mRNA相对表达量比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论:双歧杆菌可减轻新生鼠坏死性小肠结肠炎肠道组织病理变化,作用机制可能与双歧杆菌能降低肠道黏膜的TLR4表达及增加TLR2、TLR9表达有关。