缺营养状况下培美曲塞对小鼠肺癌细胞系LLC化疗的影响

目的观察小鼠肺癌细胞系LLC分别在全营养和缺营养(无氨基酸无血清培养)情况下,使用化疗药物培美曲塞的效果。方法噻唑蓝(MTT)方法检测培美曲塞对小鼠肺癌细胞LLC细胞的半抑制浓度(IC50),决定培美曲塞干预浓度。将小鼠肺癌细胞系(LLC)培养在全营养和无氨基酸无血清培养基中,分别用培美曲塞处理12 h,用MTT法检测细胞活性,用采用凯基活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB荧光显微镜法)检测细胞凋亡。结果培美曲塞对LLC的IC50为28.67 mM。将0、3.58 mM、7.16 mM、14.33 mM、28.67 mM和57.34 mM做为培美曲塞的干预浓度,培美曲塞浓度在以上干预浓度下,无营养培养基中(NF),对LLC的抑制率分别为0,17.4%,26.6%,37.7%,39.0%,45.8%;全营养组(FN)中的抑制率为0,23.7%,30.2%,48.9%,57.4%,67.4%。缺营养的状况下,培美曲塞对小鼠肺癌细胞LLC的杀伤作用明显下降(P<0.05)。缺营养和全营养的情况下,LLC细胞的凋亡率分别为24.9%,22.6%;缺营养情况下和全营养情况下,肺癌细胞在化疗药物作用下的死亡率分别为25.3%,34.2%。结论缺营养的情况下,小鼠肺癌细胞对化疗药物培美曲塞的敏感性降低。

小鼠肺癌细胞诱导分化后的力学特性比较

通过鬼笔环肽染色技术观察比较了小鼠肺癌细胞经诱导分化后的微丝变化,利用免疫印迹技术测定了小鼠肺癌细胞经诱导分化后α-SMA蛋白含量的变化,利用CTFM法测定了小鼠肺癌细胞在诱导分化后的牵引力变化.结果发现,小鼠肺癌细胞在诱导分化后,细胞的形态及微丝骨架均发生了变化,同时,α-SMA蛋白含量明显增多并且变得集中;细胞投影面积显著增大,约增37%;细胞牵引力也显著增强,均方根值大约增加了一倍.这说明细胞骨架、细胞的形态、α-SMA蛋白和细胞牵引力均与细胞的癌变过程有密切关系.

丹参酮ⅡA磺酸钠联合顺铂对小鼠lewis肺癌细胞上皮性钙黏蛋白表达的影响

目的探讨活血化瘀药丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)联合顺铂(DDP)对小鼠lewis肺癌细胞上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法运用CCK8法摸索STS不同浓度对肿瘤细胞的抑制率影响;Western-blot检测E-cadherin蛋白的表达水平;Transwell小室侵袭转移实验检测各组细胞转移数量。结果浓度为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/mL的STS与空白对照组比较,细胞的抑制率明显升高且呈浓度依赖性(P<0.05);STS联合DDP处理后,肺癌细胞侵袭能力和黏附能力明显减弱(P<0.05);药物处理后E-cadherin蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。结论活血化瘀药STS联合DDP能调节小鼠lewis肺癌细胞E-cadherin表达并抑制其侵袭转移,在肺癌转移过程中具有重要作用。

PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达

目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞(LLC),RT-PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real-time PCR和RT-PCR检测mClock的mRNA表达水平。结果发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡。结论经PMA诱导后,LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡,为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供证据。

不同功率的氩离子(Ar^+)激光对小鼠Louis肺癌细胞生长的影响

目的 :探讨氩离子 (Ar+)激光对体外小鼠 Louis肺癌细胞生长的影响。方法 :在相同时间内 ,采用不同功率的激光照射小鼠 Louis肺癌细胞 ,通过脱落细胞 -时间曲线来研究。结果 :不同功率的激光对细胞生长的影响不同 ,当功率大于 50 m W时 ,具有明显的抑制作用 ,而低于 50 m W则波动较大 ,甚至有负性生长作用。结论 :采用激光治疗肿瘤 。

吲哚美辛联合茶多酚对荷Lewis肺癌小鼠抗肿瘤作用的初步研究

目的探索吲哚美辛联合茶多酚对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的抑制作用.方法建立C57小鼠Lewis肺癌皮下移植瘤模型并随机分为4组:吲哚美辛组、茶多酚组、吲哚美辛联合茶多酚组和生理盐水对照组,每天灌胃给药1次,连续16 d.观察各组小鼠的出瘤时间、瘤体大小和肿瘤抑制率.结果与对照组相比,吲哚美辛和茶多酚低、高剂量对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤生长均有显著的抑制作用(P<0.05),二者联合应用低、高剂量对肿瘤的抑制作用高于单独用药(P<0.05).结论联合应用吲哚美辛和茶多酚对荷Lewis肺癌小鼠肿瘤生长具有显著的抑制作用,且有一定增效作用.

小鼠sFlt重组腺病毒抑制小鼠Lewis肺癌的生长

背景与目的实体肿瘤组织的生长具有血管依赖性,肿瘤新生血管生成已证实为肿瘤生长的控制点之一。本研究拟探讨编码小鼠可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt1)的复制缺陷型腺病毒对肿瘤新生血管和肿瘤生长的影响。方法应用小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)株建立肺癌模型进行抗肿瘤的研究,以编码sFlt1的复制缺陷型重组腺病毒(sFlt1Adv)作为治疗组,编码绿色荧光蛋白的复制缺陷型重组腺病毒(GFPAdv)和生理盐水作为对照组,皮下接种小鼠LLC一周后,经尾静脉给药2次(间隔2周),第二次给药后2周,处死全部实验鼠,剥离肿瘤组织并称重,用3%多聚甲醛固定,用抗CD31作免疫组织化学染色。结果sFlt1Adv治疗组肿瘤明显小于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01),其抑瘤率达到71.8%;治疗组的肿瘤微血管密度低于GFPAdv对照组和生理盐水组(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒能抑制肿瘤组织的新生血管形成,从而抑制肿瘤的生长,有较好的应用价值。

pcDNA3.1(+)-mIL-12在Lewis细胞中生物活性的探讨

目的:建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-mIL-12,脂质体转染LLC细胞并测其表达,流式细胞仪(FCM)观察细胞周期和凋亡,G418筛选获得阳性克隆后大量培养并检测mIL-12活性。结果:pcDNA3.1(+)-mIL-12质粒构建正确并成功转导入LLC细胞,重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL-12,mIL-12使LLC细胞周期重新分布,并促进其凋亡。LLC/mIL-12细胞培养上清能明显引起刀豆蛋白A(ConA)激活的小鼠脾细胞增殖。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达质粒,建立具有mIL-12生物学活性的LLC细胞系。

小鼠正常肺细胞和肺癌细胞之间的力学特性比较研究

该实验通过鬼笔环肽染色技术观察并比较了小鼠正常肺细胞和肺癌细胞的微丝差异,利用荧光抗体染色技术测定了小鼠单个正常肺细胞和肺癌细胞的α-SMA蛋白含量变化,以及利用CTFM法测定了小鼠正常肺细胞和肺癌细胞的牵引力变化。结果发现,小鼠肺细胞癌变后,细胞内微丝骨架发生了变化,影响了细胞的形态;α-SMA蛋白含量明显下降并且变得分散;细胞投影面积显著减少,大约减少27%,细胞牵引力也显著减小,均方根值大约减少49%。这说明细胞骨架、细胞的形态、α-SMA蛋白和细胞牵引力均与细胞的癌变过程密切相关。

蛇葡萄素钠体外协同卡铂抗小鼠肺癌Lewis细胞的作用

目的:研究蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞的体外抗肿瘤作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT比色法测定蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞仪检测蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用诱导细胞凋亡作用。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单用在12.5、25、50、100μg/ml浓度范围内对小鼠肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;6.25~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂3.12~25μg/ml联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪结果表明,蛇葡萄素钠25、50、100μg/ml与卡铂25μg/ml联合应用时,凋亡率显著增高。结论:蛇葡萄素钠单用在一定的浓度范围内对Lewis细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,蛇葡萄素钠与卡铂合用可以增强卡铂的活性,有协同抑制作用,蛇葡萄素钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。

拓扑异构酶Ⅰ抑制剂对小鼠Lewis肺癌细胞杀伤和诱导凋亡作用的研究

目的观察拓扑异构酶Ⅰ抑制剂（拓扑替康，TPT）对小鼠Lewis肺癌细胞杀伤和诱导凋亡作用。方法采用MTT法、AnnexinV染色、梯状DNA电泳与细胞形态学观察等方法分析TPT对小鼠Lewis肺癌细胞的杀伤作用、凋亡作用，分析靶细胞杀伤、凋亡作用与Caspase的关系。结果TPT对靶细胞株具有较强的杀伤作用，而且具有明显的时间依赖性，同时，靶细胞出现凋亡表现。Caspase酶特异性抑制剂对凋亡具有一定的影响。结论唧对小鼠Lewis肺癌细胞具有较强的杀伤和诱导凋亡作用，其机理可能涉及到Caspase-8、Caspase-3的有序性活化。

新型悬浮细胞连续培养法分离小鼠Lewis肺癌干细胞及鉴定

该文主要探索从小鼠Lewis肺癌亲代细胞系(Lewis lung carcinoma parental cell line,LLC-Parental)中分离能够在体外长期培养的肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)的方法。在体外贴壁条件下培养LLC-Parental细胞,通过连续富集悬浮生长的细胞,经过8代后,成功富集出可悬浮成球的小鼠Lewis肺癌干细胞样细胞株(LLC-spheroid enrichment,LLC-SE)。为了验证其干细胞特性,我们使用荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测表示干细胞特性的基因Bmi1(B-cell-specifi c moloney murine leukemia virus insertion site 1)、Cd133(cluster of differentiation-133)、Aldh1a1(aldehyde dehydrogenase family 1,subfamily A1)、Oct4(octamer-binding transcription factor 4)、Sox2(sexdetermining region Y box 2)、Nanog和Klf4(Kruppel-like factor 4)的表达。6孔板琼脂成球实验检测其增殖和悬浮成球能力。96孔板单细胞克隆形成实验检测单个细胞的克隆形成能力。裸鼠皮下移植这一干细胞特性检测的经典模型检测其体内致瘤能力以及C57同源小鼠左肺原位种植模型检测其肿瘤转移能力。Real-time PCR结果显示,LLC-SE细胞中Bmi1的表达水平显著高于LLC-Parental细胞。6孔板琼脂成球实验、96孔板单细胞克隆形成实验表明,LLC-SE细胞的悬浮成球能力和单细胞克隆能力显著高于LLC-Parental细胞。动物实验表明,LLC-SE细胞的体内致瘤能力、肿瘤转移能力强于LLC-Parental细胞。该文首次运用连续8次悬浮聚球法分离获得大量的可稳定传代的具有干细胞特性的LLC-SE细胞,为建立肿瘤干细胞细胞模型提供了新的方法,为进一步研究肿瘤干细胞的生物学特性奠定了基础。

白桃汤剂的抗肿瘤作用机制初探

本研究以Lewis肺癌细胞为对象,对白桃汤剂的抗肿瘤作用进行初步研究,为该药应用于临床提供理论依据。1材料与方法1.1材料小鼠Lewis肺癌细胞（购于中科院上海细胞库）。白桃汤剂（吉林医药学院制备,含核桃皮15g,白附子15g,甘草10g,黄芪20g等）,按常规方法制成1g/ml备用。环磷酰胺（上海生化制剂厂）。

Influence of Vein Injury in Different Methods of Chemotherapy in Mice

OBJECTIVE To explore the effects of cisplatin chemotherapy via the vein and the abdominal cavity on the functions of endothelial cells of mice with non-small cell lung cancer. METHODS 75 mice were divided equally into a untreated group, a group treated with chemotherapy （cisplatin： 2 mg/kg, 0.5 mL） via an intravenous method and a group treated with chemotherapy （cisplatin： 2 mg/kg, 0.5 mL） via an intraperitoneal method; changes in the morpholoqy and ultrastructure of vein endothelial cells were observed.