法尼基转移酶抑制剂诱导小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞凋亡的实验研究

目的探讨法尼基转移酶抑制剂对小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞的抑制生长和诱导凋亡作用,为其作为抗肿瘤药物提供理论基础。方法体外培养小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6,用不同稀释度的法尼基转移酶抑制剂R115777处理对数生长期的Beta-TC-6细胞,用MTT法观察不同浓度R115777对Beta-TC-6细胞增殖的抑制作用,用碘化丙啶染色荧光显微镜下观察R115777处理后Beta-TC-6细胞的形态学改变。用流式细胞术检测分析DNA含量直方图、亚G1期细胞所占百分比和细胞周期改变。结果R115777使小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6的增殖受到明显抑制,并出现显著的凋亡现象,其作用与R115777的浓度成正相关。结论法尼基转移酶抑制剂R115777能抑制小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞Beta-TC-6增殖,有必要作为一种可选的抗肿瘤药物而进一步研究。

棕榈酸诱导胰岛素瘤细胞MIN6细胞凋亡

目的探讨蛋白激酶B及其磷酸化在棕榈酸诱导的胰岛素瘤细胞MIN6凋亡中的作用。方法胰岛素瘤细胞MIN6分别在含有不同棕榈酸浓度(0～0.5 mmol/L)的DMEM高糖培养基中孵育,培养基中加或不加PI3K/PKB的阻断剂LY294002;TUNEL法观察凋亡并计数凋亡率;透射电镜观察MIN6细胞超微结构;Western blot检测蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白p-PKB(Ser473)的表达;RT-PCR法检测BAX、BCL-2mRNA的表达。结果MIN6细胞凋亡随着培养基中棕榈酸浓度的增加而增加,LY294002可增强其凋亡程度;棕榈酸抑制MIN6细胞的PKB在473位丝氨酸位点的磷酸化,抑制BCL-2mRNA的表达并促进BAXmRNA的表达。结论棕榈酸可能通过抑制PKB磷酸化的激活而诱导糖尿病时胰岛β细胞的凋亡。

高脂性肥胖小鼠脂肪细胞大小与其血清胰岛素、瘦素水平相关性研究

目的对脂肪细胞大小与血清胰岛素、瘦素水平的关系进行初步探讨。方法用高脂饲料喂养健康C57BL/6乳鼠建立肥胖小鼠动物模型,测量体重(Wt)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、血清胰岛素(FINS)及瘦素(LEP)水平,计算Lee’s指数及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),脂肪组织HE染色观察脂肪细胞大小改变,统计学分析其相关性。结果与同周龄对照组小鼠相比,肥胖组小鼠Wt、FPG、TG、FINS、LEP和Lee’s指数及HOMA-IR均升高;相同放大倍数视野下,肥胖组小鼠脂肪细胞数目较正常组减少,脂肪细胞面积增大;统计学分析显示脂肪细胞大小与体重、血清胰岛素、瘦素和胰岛素抵抗指数呈正相关。结论肥胖小鼠脂肪细胞显著增大,易并发瘦素和胰岛素抵抗,且胰岛素抵抗严重程度与脂肪细胞大小呈高度正相关。

GLP-1、Betacellulin、Activin A、bFGF和Nicotinamide联合诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞

【目的】探讨体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ES细胞)诱导分化为胰岛素分泌细胞。【方法】以GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicoti-namide5种生长因子诱导E14.1小鼠ES细胞30d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素分泌细胞的分化率,用RIA法测定培养液中胰岛素水平。【结果】分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性,胰岛素分泌细胞的分化率平均为13.6%±3.7%,在5.6mmol/L和25mmol/L葡萄糖浓度作用下培养液中胰岛素水平分别为(0.04±0.01)ng/mL和(0.09±0.02)ng/mL。【结论】体外联合应用GLP-1、betacellulin、activinA、bFGF和nicotinamide5种生长因子能将小鼠ES细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞,但胰岛素分泌功能较差。

黄连温胆汤含药血清改善小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗的机制探讨

目的探讨黄连温胆汤含药血清对小鼠脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)的改善作用及其分子机制。方法取SD大鼠各15只,分别灌服黄连温胆汤、等体积蒸馏水5 d后,腹主动脉采血,制备黄连温胆汤含药血清及空白血清。经典鸡尾酒方法使小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1分化为脂肪细胞,再应用地塞米松刺激使其发生IR制备IR模型,随机分为模型组、黄连温胆汤组和二甲双胍组。另取未进行IR造模的脂肪细胞作为正常组。各组细胞均培养于DMEM高糖+5%FBS培养基,模型组、黄连温胆汤组和二甲双胍组分别加入8%空白血清、4%含药血清+4%空白血清、盐酸二甲双胍溶液1 mmol/L,正常组加入8%空白血清,均培养36 h。采用Real time q PCR法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路相关基因胰岛素受体底物1(IRS1)、PI3K-p85α亚基、GLUT4 mRNA表达。采用Western blotting法检测IRS1、p-IRS1(Tyr612)、PI3K-p85α、p-PI3K-p85α(Tyr607)、GLUT4蛋白表达。结果模型组葡萄糖消耗量低于正常组,黄连温胆汤组葡萄糖消耗量高于模型组(P均<0.05)。与正常组比较,模型组GLUT4 mRNA表达下调,黄连温胆汤组和二甲双胍组GLUT4 mRNA表达上调(P均<0.05);与模型组比较,黄连温胆汤组和二甲双胍组GLUT4 mRNA表达上调(P均<0.01)。与正常组比较,模型组p-IRS1(Tyr612)/IRS1、p-PI3K-p85α(Tyr607)/PI3K-p85α、GLUT4蛋白表达下调(P均<0.05),黄连温胆汤组和二甲双胍组蛋白表达均较模型组上调(P均<0.05)。结论黄连温胆汤含药血清可以改善鼠脂肪细胞的IR,其机制为可能通过PI3K-GLUT4信号传导途径发挥作用。

成纤维细胞生长因子和胰岛素对小鼠软骨细胞增殖的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和胰岛素对小鼠原代软骨细胞的影响。方法 :在低血清培养基培养条件下进行小鼠原代软骨细胞培养 ,采用WST1比色法和荧光染色法观察bFGF和胰岛素对软骨细胞增殖的影响。结果 :原代软骨细胞在 0 .4%胎牛血清培养基培养条件下 ,不同浓度的bFGF和胰岛素对软骨细胞的增殖有剂量相关性。形态学观察表明 ,bFGF和胰岛素不仅促进细胞增殖 ,而且可使细胞分泌基质增多。结论

胰岛素样生长因子1基因转染成肌细胞促小鼠胫骨骨折愈合的作用

背景:随着基因治疗的研究发展,将转有胰岛素样生长因子1基因的细胞移植入损伤区,达到该基因在体内的持续表达已可行,并有可能解决骨折患者骨不连及骨延迟愈合等难题。目的:观察携带人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞体内局部多点注射对C57BL/6J小鼠胫骨骨折愈合的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-01/2008-04在汕头大学医学院完成。材料:8周龄雄性C57BL/6J小鼠42只,体质量22～25g,建立左胫骨骨折的动物模型。方法:42只小鼠随机数字表法分为2组,每组21只。实验组于骨折处周围肌肉中多点注射0.3mL转人胰岛素样生长因子1基因成肌细胞悬液;对照组注射0.3mL生理盐水。分别在造模后2,3,4周每组各随机取7只小鼠处死,取材,行苏木精-伊红染色。主要观察指标:各组动物骨折部位形成骨痂面积的大小和组成成分的变化;外源性细胞在体内存活及表达人胰岛素样生长因子1情况;各组动物骨密度及骨痂细胞生长情况。结果:①实验组转基因成肌细胞BrdU及人胰岛素样生长因子1免疫组织化学染色均阳性,4周实验组平均灰度值虽稍高于2周实验组,但差异无显著性意义(P>0.05)。②携人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞移植入C57BL/6J小鼠胫骨骨折处周围肌肉中可存活4周以上,并能稳定地分泌人胰岛素样生长因子1。③实验组造模后各时间点外骨痂中小梁骨占骨痂总面积的百分比均高于对照组,其中第3,4周经F检验差异有显著性意义(P<0.05);4周实验组骨痂骨密度高于对照组(P<0.05)。④电镜观察可见实验组骨生成细胞的数量、活跃程度和胶原纤维的数量、分布均优于对照组。结论:局部注射转人胰岛素样生长因子1基因的成肌细胞可以促进C57BL/6J小鼠胫骨骨折的愈合。

尼克酰胺与胰腺损伤提取物诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞的比较

目的探讨诱导小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为胰岛素产生细胞较好的方法。方法大鼠胰腺提取物和尼克酰胺分别诱导小鼠的BMSCs分化,经免疫组织化学、双硫腙染色、放射免疫学方法和RT-PCR技术(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)鉴定两种诱导方法诱导细胞的分化程度。结果两种方法诱导后的细胞均可以表达胰岛素。双硫腙染色和胰岛素免疫组织化学的染色结果发现,两种分化后的细胞无明显差异。放射免疫学检测胰岛素及C肽片段:两种分化后的细胞表达的胰岛素随25mmol/L葡萄糖刺激时间的延长产生的胰岛素分泌曲线有明显差别,尼克酰胺分化的小鼠BMSCs产生的胰岛素产生细胞(IPCs)与正常小鼠胰岛细胞的曲线一致性欠佳,而大鼠胰腺损伤提取物分化的小鼠骨髓间充质干细胞产生的胰岛素产生细胞的分泌曲线一致性很好。尼克酰胺分化后的细胞不能产生C肽片段,而大鼠胰腺损伤提取物能够表达C肽片段。RT-PCR结果显示,尼克酰胺与大鼠胰腺提取物均可以表达胰岛细胞相关的几个mRNA(Ins-1、Ins-2、Glut-2、GK)。结论大鼠胰腺提取物与尼克酰胺相比,可能是一种较好的诱导BMSCs分化成熟产生胰岛素的诱导剂。

ELF4通过激活Akt通路促进胰岛素瘤细胞增殖并抑制细胞凋亡

目的探索ELF4促进胰岛素瘤细胞增殖与抗凋亡的作用及其机理。方法利用逆转录病毒载体系统,构建稳定高表达ELF4的胰岛素瘤细胞BON-ELF4,以及载体对照组细胞BON-Vector。采用MTT法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector各组细胞的生长情况。采用0.1μmol/L化疗药物表阿霉素处理BON-ELF4和BON-Vector细胞24 h后,检测细胞凋亡相关指标,采用免疫印迹法检测各组肿瘤细胞中凋亡通路关键因子caspase-9,caspase-8和PARP切割带的表达水平;采用Annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术分析各组细胞凋亡情况。采用免疫印迹法检测胰岛素瘤细胞BON-ELF4和BONVector细胞中Akt磷酸化水平。结果免疫印迹法检测结果显示,BON-ELF4细胞中ELF4蛋白表达量高于对照组细胞BONVector(P=0.013),稳定高表达外源性ELF4蛋白的细胞系BON-ELF4构建成功。稳定高表达ELF4的细胞系BON-ELF4生长明显较快(P<0.05)。相比较于载体对照组BON-Vector,BON-ELF4细胞在0.1μmol/L表阿霉素处理24 h后caspase-8,caspase-9的蛋白前体降低,而caspase-8,caspase-9切割成熟体升高(P<0.05);同时,相应的PARP切割带随着ELF4的高表达而降低(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,22.90%的载体对照组BON-Vector细胞呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果,6.03%的BON-ELF4细胞组呈现出Annexin V阳性、PI阴性的早期凋亡结果。外源高表达ELF4的肿瘤细胞中Akt的磷酸化显著升高(P<0.05),而Akt总蛋白的水平基本未受影响(P>0.05)。结论ELF4能通过激活Akt通路而促进胰岛素瘤细胞增殖和抗凋亡。

小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性

【目的】探讨小鼠骨髓干细胞有无被诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性。【方法】培养小鼠骨髓干细胞,采用含GLP-1和nicotinamide的无血清培养液诱导分化,在培养过程中,检测有关基因的表达。【结果】培养的小鼠骨髓干细胞具有与文献报道相似的生物学特性;在诱导分化第7天,有ngn3和pdx-1基因表达;在诱导分化第14天,有nkx2.2、pdx-1和ins2基因表达。【结论】小鼠骨髓干细胞有诱导分化为胰岛素分泌细胞的可能性,值得进一步研究。

甲壳低聚糖对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛细胞生长及胰岛素分泌量的影响

目的探讨甲壳低聚糖对非肥胖性糖尿病 (NOD)小鼠胰岛 β 细胞生长增殖和释放胰岛素的影响。方法通过胰导管逆行灌注胶原酶静止消化NOD小鼠胰腺及不连续密度梯度Ficoll液纯化胰岛细胞 ,并用转板以及碘乙酸处理的方法除去其中的成纤维细胞 ,得到比较纯的胰岛细胞。以此为材料 ,将细胞分为干预组及对照组 ,干预组在细胞培养液中加入 3%甲壳低聚糖 ,对照组在细胞培养液中加入生理盐水。分别检测细胞增殖情况和急性胰岛细胞释放胰岛素实验。结果干预组细胞增殖优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而急性胰岛素释放则两组相比较差异无显著性。结论甲壳低聚糖能够促进胰岛 β

稠李花色苷酶法制备及对H_2O_2诱导大鼠胰岛素瘤细胞损伤的保护作用

目的:探究纤维素酶酶法制备稠李花色苷的最佳条件,并研究制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠胰岛素瘤(Ins-1)细胞损伤的保护作用。方法:通过单因素试验和正交试验,优化得到酶法制备稠李花色苷的最佳条件;稠李花色苷处理大鼠Ins-1细胞,进行形态学观察、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]细胞活力实验、2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichloro dihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧实验研究稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞保护作用。结果:纤维素酶法提取稠李花色苷的最佳条件为:温度60℃、纤维素酶添加量9 mg/g、料液比1∶35(g/m L)、p H 3.5,此条件下稠李花色苷得率为(0.956±0.027)mg/g;形态学观察及MTT细胞活力实验显示,稠李花色苷对H_2O_2诱导损伤的Ins-1细胞具有较强的保护作用,DCFH-DA法检测细胞内活性氧实验说明,稠李花色苷能够显著地清除Ins-1细胞内的活性氧。结论:纤维素酶法制备稠李花色苷是一种有效的方法,制备的稠李花色苷对H_2O_2诱导的大鼠Ins-1细胞损伤具有较强的保护作用。

体外应用大鼠胰腺提取物诱导小鼠间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞

目的探讨大鼠胰腺提取物(RPE)是否可以使小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)分化为胰岛素产生细胞(IPCs),以及小鼠BMMSCs的分化条件,为糖尿病的干细胞治疗提供新的方法。方法传代纯化培养昆明小鼠的骨髓间充质干细胞,应用SD大鼠的RPE诱导分化小鼠BMMSCs为IPCs,首先取18瓶小鼠BMMSCs随机分为6组,每组3瓶,分别加入RPE 10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、100mg/L,筛选出最佳的分化剂量,然后用最佳的分化剂量(50mg/L)分化BMMSCs,免疫酶细胞化学鉴定细胞内胰岛素的表达;双硫腙染色检测胰岛素产生细胞的分化和纯度。放射免疫分析检测C肽片段表达。结果50mg/L RPE可以使间充质干细胞分化良好,形态较规则,1周后细胞分化成熟,双硫腙染色呈现猩红色;免疫酶细胞化学和免疫荧光细胞化学显示:胰岛素表达阳性,C肽放射免疫学显示有C肽释放。结论RPE可以使小鼠的骨髓间充质干细胞分化为胰岛素产生细胞。

小鼠肝细胞胰岛素信号转导的动力学研究

目的从细胞整体水平观察细胞内信号蛋白在胰岛素刺激下发生的动力学变化,找出胰岛素相关信号蛋白的动力学改变及其对胰岛素信号转导最终生理效应的影响。方法采用双向电泳及放射性同位素标记技术,分析小鼠肝细胞在胰岛素(100 nmol/L)持续刺激不同时间得到的胰岛素信号蛋白磷酸化水平发生的动力学变化。结果小鼠肝细胞胰岛素信号转导相关磷蛋白有数十种,其中磷蛋白Shc、MKP3等的时间动力学曲线均呈峰型。结论在细胞整体水平,胰岛素多条信号转导途径之间存在相互交流,这种相互交流对信号转导的最终效应产生了复杂的整合和调控,使细胞对持续高浓度的胰岛素刺激产生了自适应控制。

小鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞诱导分化过程中调控PDX-1基因表达miRNAs的鉴定

目的实现小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰岛素分泌细胞(IPCs)的诱导分化并对分化过程中可能调控胰十二指肠同源异型盒基因-1(PDX-1)基因表达miRNAs进行鉴定。方法首先分离培养BMSCs,应用conophylline和尼克酰胺将其诱导分化为IPCs,采用双硫腙(DTZ)染色和免疫荧光检测胰岛素的表达。然后采用靶基因预测软件miRanda和Target Scan对调控PDX-1基因表达miRNAs进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测诱导分化过程中miRNAs及PDX-1的表达。结果诱导分化后的细胞双硫腙染色呈猩红色,免疫荧光化学显示有胰岛素表达。生物信息学方法预测得到4个可能调控PDX-1表达的miRNAs,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现其中的miR-149和miR-346能结合到PDX-1 mRNA的3’UTR并有效抑制其表达。Real-time PCR检测结果表明,miR-149和miR-346的表达水平与PDX-1表达呈负相关。结论 miR-149和miR-346能负性调控IPCs诱导分化过程中PDX-1的表达。

高糖条件下小鼠巨噬细胞对骨骼肌细胞成肌分化和胰岛素敏感性的影响

目的:探讨高糖环境下小鼠巨噬细胞对骨骼肌细胞成肌分化和胰岛素敏感性的影响。方法:Transwell小室内共培养小鼠骨骼肌成肌细胞C2C12细胞和单核巨噬细胞RAW264.7细胞并给予60 mmol/L葡萄糖处理,结合培养条件随机分为单独培养对照组(SC组,n=12)、共培养对照组(CC组,n=12)、单独培养高糖组(SH组,n=12)和共培养高糖组(CH组,n=12)。相差显微镜观察细胞形态,共培养1 d和3 d后收集C2C12细胞,CCK-8检测细胞活性,免疫荧光技术检测细胞融合率和基础与胰岛素刺激的GLUT4蛋白表达,实时定量PCR检测成肌调节因子Myf5、MyoD和myogenin基因表达,2-NBDG法检测细胞基础和胰岛素刺激的糖摄取。结果:正常糖浓度下,与RAW264.7细胞共培养促进C2C12细胞肌管形成,促进E-MHC蛋白表达(P<0.01),促进MyoD和myogenin基因表达(P<0.05),提高胰岛素刺激的2-NBDG摄取(P<0.05),提高基础GLUT4水平(P<0.05)。高糖刺激抑制C2C12细胞肌管形成,抑制成肌调节因子基因表达,抑制2-NBDG摄取,抑制GLUT4表达(P<0.05)。高糖环境下与RAW264.7细胞共培养时未见明显肌管形成,与共培养对照组和单独培养高糖组相比,细胞活性、E-MHC蛋白水平、成肌调节因子基因水平、2-NBDG摄取和GLUT4蛋白水平均明显下降(P<0.05)。结论:与RAW264.7共培养促进C2C12成肌分化并提高胰岛素敏感性,高糖条件处理这一作用可逆转,抑制C2C12成肌分化的同时诱发C2C12细胞胰岛素抵抗。

AdipoRon对小鼠骨骼肌细胞胰岛素敏感性的影响及其机制

目的:观察脂联素受体激动剂AdipoRon对小鼠成肌细胞株(C2C12)胰岛素敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:使用马血清将C2C12诱导分化为成肌细胞,分为6组(9个复孔):空白对照组、AdipoRon(脂联素受体激动剂)高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组以及AdipoRon低剂量+PI3K(磷脂酰肌醇3激酶)抑制剂组和胰岛素+PI3K抑制剂组,作用12 h,收集上清检测葡萄糖消耗量,使用CCK8测定细胞增殖。六孔板中将C2C12诱导分化为肌管细胞,加入药物作用12 h,并用RT-PCR法检测GLUT4的mRNA水平。结果:与空白对照组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组耗糖量均有所增加,具有统计学意义(P<0.05)。加入PI3K抑制剂组后,耗糖量与空白对照组无统计学意义。与空白对照组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组细胞均有增殖,但只有胰岛素组具有统计学意义(P<0.05)。与对照空白组相比,AdipoRon高剂量组、AdipoRon低剂量组、胰岛素组GLUT4mRNA水平均有所提高,具有统计学意义(P<0.05)。加入PI3K抑制剂组后,GLUT4mRNA水平与空白对照组无统计学意义。结论:AdipoRon能够不影响细胞增殖的情况下增加葡萄糖的消耗量,这可能是通过提高胰岛素敏感性发挥作用的,但具体机制尚待进一步的研究。

脂联素对胰岛素抵抗小鼠心肌细胞凋亡率的影响

目的观察野生型小鼠和脂联素基因敲除(APN^(-/-))小鼠胰岛素抵抗状态对心肌细胞凋亡率的影响及脂联素干预作用。方法选择雄性野生小鼠16只和雄性APN^(-/-)小鼠24只,分5组,每组8只,分别为对照组(con)、胰岛素抵抗组(IR)、基因敲除组(KO)、基因敲除+胰岛素抵抗组(KIR)、基因敲除+胰岛素抵抗+脂联素干预组(APN)。高脂饲料诱导小鼠胰岛素抵抗模型。测空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOME-IR),采用FITC-PI凋亡试剂盒测心肌细胞凋亡率。结果 (1)与con组比较,IR、KO组小鼠FINS、HOME-IR值以及心肌细胞凋亡率均升高(P均<0.05)。(2)与KO组相比,KIR组体重、FINS、HOME-IR值以及心肌细胞凋亡率均明显升高(P均<0.05)。(3)与KIR组相比,APN组小鼠FPG、FINS、HOME值及心肌细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论胰岛素抵抗小鼠心肌细胞凋亡率升高,脂联素干预可以改善胰岛素抵抗,降低心肌细胞凋亡率。

胰岛素样生长因子-1诱导新生小鼠海马源性神经干细胞增殖分化的研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生小鼠海马源性神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法通过取新生C57BL／6J小鼠海马组织，机械分离，体外培养NSCs，特异性标志蛋白Nestin免疫荧光鉴定。在细胞培养液中加入100μg／L的IGF-1记为IGF-1组，同时设立正常细胞对照组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况，GFAP、133Tubulin细胞免疫化学检测细胞分化情况。结果体外成功培养NSCs，特异性蛋白Nes-tin具有表达。IGF-1组NSCs较对照组增殖显著，且IGF-1组细胞具有显著的迁移和分化能力。细胞免疫荧光鉴定，IGF-1可促进细胞分化为星形胶质细胞和神经元（P〈0．05）。结论IGF-1能够促进体外培养的新生小鼠海马源性NSCs增殖，并诱导NSCs向星形胶质细胞和神经元分化。

多种生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素生成细胞团

目的探讨体外联合应用激活素A、全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和烟酰胺4种生长因子能否将小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导分化为胰岛素生成细胞团。方法先后以激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子诱导小鼠ESC 14 d后,应用RT-PCR、DTZ染色和免疫荧光检测分化细胞胰岛素表达。结果分化细胞可检测到胰岛素mRNA表达,DTZ染色和免疫荧光染色阳性。结论体外联合应用激活素A、ATRA、bFGF和烟酰胺4种生长因子能够将小鼠ESC诱导分化为胰岛素生成细胞团。