小鼠胸腺髓质上皮细胞系体内诱导胸腺细胞功能成熟

来源于BALB/c小鼠 (H 2 d)胸腺的髓质上皮细胞系MTEC1细胞表达H 2 d和I Ad 分子 .为研究上皮细胞诱导胸腺细胞阳性选择及功能分化的能力 ,首先用γ 线照射C5 7BL/6J小鼠 (H 2 d) ,再经静脉注射 (H 2 b×d)F1代骨髓细胞 ,制备 (H 2 b×d→H 2 b)嵌合体 ,然后将MTEC1细胞注射到嵌合体胸腺内 .注射后 2个月 ,经HE染色显示 ,MTEC1细胞在嵌合体小鼠胸腺被膜下皮质区成簇存在 ,体外免疫学试验发现 ,嵌合体小鼠脾细胞含有抗原特异性H 2 d 识别限制的杀伤T细胞 (CTL) ,IL 2产生T细胞及增殖应答T细胞 .在MLR试验中 ,嵌合体小鼠脾细胞显示对H 2 d 同种异型抗原的明显耐受 .从而证明MTEC1髓质上皮细胞能在胸腺微环境内诱导H 2 d 识别限制的对特异抗原应答的T细胞发育及功能成熟 .由此提出在胸腺髓质区进行“2次胸腺选择”的假说 ,并讨论了其意义 .

小鼠胸腺髓质上皮细胞系MTEC1对3G11^-6C10^-CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞亚群的作用

3G1 1 -6C1 0 -CD4+CD8-胸腺髓质细胞是CD4单阳性 (SP)胸腺细胞中的亚群之一 ,表型为TCRαβ+CD6 9loHSAmed/lo,可接受ConA刺激产生增殖应答和细胞因子分泌 所分泌的细胞因子以Th2型为主 ,还有少量IFNγ存在 ,是处于CD4SP成熟过程的中后期 ,Th0向Th2转化的过渡型细胞 为探讨胸腺微环境中基质细胞对这一亚群细胞的作用 ,在研究体系中加入一株胸腺髓质型上皮细胞系MFEC1 ,发现MTEC1可促进ConA刺激的 3G1 1 -6C1 0 -CD4+CD8-胸腺髓质细胞增殖和IL 6分泌 ,但IL 4及IL 1 0的产生部分地受到抑制 ,不增加IFNγ分泌 ,亦不诱导IL

Aire对胸腺髓质上皮细胞异位基因表达影响的研究

目的探讨自身免疫调节因子(Autoimmune regulator,Aire)对胸腺髓质上皮细胞(Medullary thymic epithelial cells,mTECs)异位基因表达的影响。方法原代培养高纯度C57BL/6小鼠胸腺上皮细胞,脂质体法转染pEGFPC3/Aire质粒,RT-PCR法检测mTECs表达Aire及3种常见异位基因mRNA的水平。结果(1)体外培养9天后胸腺上皮细胞占85%左右,转染pEGFPC3/Aire质粒可获得较高转染效率。(2)mTECs中Aire和异位基因表达随培养时间逐渐减弱,至第11天都完全消失。(3)Aire能在mTECs培养早期促进异位基因短期表达。(4)胸腺细胞可延长Aire-mTECs上异位基因表达时间。结论(1)Aire对mTECs异位基因表达有明显的促进作用;(2)胸腺细胞是Aire和异位基因上游激活信号的重要来源。

小鼠胸腺上皮细胞培养及其异质性的研究

用EDTA抑制成纤维细胞污染的方法培养小鼠TEC．纯度为92%．透射和扫描电镜观察培养细胞有两种类型，均具有上皮细胞的特征性结构。抗角蛋白抗体PAP法表明，培养对抗角蛋白多抗体的阳性反应细胞约占92%。抗角蛋白抗体PAP法表明，培养对抗角蛋白多抗的阳性反应细胞约占92%。培养对抗角蛋白单抗K12及K27对部分TEC呈阳性反应；单抗K174及HK2对上皮细胞均为阴性。提示TEC能表达不同的角蛋白组分，12种生物素化凝集素ABC法显示，除STA及UEA-1，其余10种凝集素对TEC具有不同程度和不同形式的反应．PNA只对部分体积较大的TEC(约50%)呈阳性反应．胸腺切片的PNA阳性反应定位于皮质和髓质交界处，这与曾报道的酶标或荧光标记的FNA染色结果不一致．我们认为生物素化的PNA可能作为部分胸腺髓质上皮细胞的表面标志．综上所述，培养的TEC无论是形态结构，还是角蛋白及凝集素受体的表达均存在着差异．即具有异质性．

狼疮肾炎小鼠模型的诱导及胸腺髓质上皮异位基因在SLE的作用研究

目的:通过慢性移植物抗宿主病的方法诱导狼疮肾炎小鼠模型,狼疮肾炎模型经甲强龙治疗后小鼠一般状态和胸腺髓质上皮细胞(m TECs)2种异位基因的改变,探讨异位基因在SLE中的作用。方法:采用慢性移植物抗宿主病的方法诱导狼疮肾炎小鼠模型,分为对照组、模型组及模型治疗组。观察甲强龙治疗后SLE小鼠尿蛋白变化,肾脏及唾液腺病理的改变,检测小鼠m TECs2种异位基因(唾液蛋白2、组织蛋白酶L)m RNA的水平,观察肾脏、唾液腺的病理变化。结果:慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease,c GVHD)的方法诱导出狼疮肾炎模型,模型组2种异位基因水平均较对照组降低,异位基因相关器官出现唾液腺炎及全身改变,治疗组异位基因水平升高,狼疮症状及病理损害明显改善。结论:慢性移植物抗宿主病的方法可成功诱导出狼疮肾炎模型,SLE小鼠异位基因甲强龙治疗后的升高,表明中枢耐受异常的恢复为狼疮好转的原因。

胸腺髓质上皮细胞干细胞对胸腺发育的影响

来源于胸腺双能祖细胞的胸腺髓质上皮细胞干细胞(medullary thymic epithelial cell stem cells, mTECSCs),在胸腺发育过程中的胚胎早期阶段既可能发生分化,又可能在胎儿出生后维持胸腺髓质上皮细胞(medullary thymic epithelial cells, mTECs)的再生,充分发挥组织干细胞的功能,确保终身外周血中央型记忆T细胞自身耐受。mTECSCs对胸腺的发育起着重要的作用和影响,得到很多学者的关注。现就mTECSCs对胸腺功能、生理性退化及胸腺衰老和免疫稳态等发育过程中的作用和影响作一概述,并探讨其在胸腺相关疾病治疗方面的潜在价值。

胸腺上皮细胞的起源与分化

胸腺提供复杂的微环境来调节T细胞的存活、分化、选择和迁移，是T细胞发育、分化和成熟的场所也是自身免疫耐受的中心。胸腺上皮细胞包括胸腺皮质上皮细胞和髓质上皮细胞，其来源于内胚层，并由胸腺上皮祖细胞分化而来。胸腺上皮细胞的分化空间结构的建立有赖于转录因子和信号通路分子在胸腺上皮细胞不同时段复杂的分子调控。胸腺上皮细胞成熟过程也是胸腺上皮细胞一系列特异性表面标记分子的变化过程，对胸腺上皮细胞特异标记分子的研究是分析胸腺上皮细胞复杂分化过程的重要工具。本文重点探讨胸腺上皮细胞起源发展模型及分化过程中分子调控作用，以期更好的理解胸腺上皮细胞如何成为能够支持T细胞分化的特异哺育者。

胸腺上皮细胞中雌激素诱导lncRNA的鉴定分析及表达载体构建

为研究胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)中雌激素(estradiol,E2)对长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1(medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1),经50 nmol/L E2作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E2对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E2能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E2处理组细胞的D450 nm值极显著降低(P<0.01),表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E2作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调(P<0.01),约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E2作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。

STZ诱导小鼠糖尿病模型中胸腺异位基因表达的研究

目的探讨胸腺异位基因表达与自身耐受及自身免疫病的相互关系。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导昆明小鼠糖尿病作为动物模型;利用RT-PCR方法检测小鼠胸腺异位基因表达水平。结果1型糖尿病(IDDM)小鼠胸腺的异位基因表达水平明显低于对照组小鼠。结论异位基因表达水平降低可能是引起IDDM的重要原因。

BALB/c小鼠胸腺发育中AcP及NsE的酶组织化学研究

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠胸腺发育中ＡｃＰ及ＮｓＥ的酶组织化学研究殷彦君孙品伟朱小辉（北京医科大学组织学与胚胎学系）取１５ｄ、１７ｄ、１９ｄ胎鼠、新生鼠及成鼠胸腺的冰冻切片，用偶氮偶联法做酸性磷酸酶（ＡｃＰ）、非特异性酯酶（ＮｓＥ）的酶组织化学染色。结果发现：...

地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的形态学及组织化学研究

地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的形态学及组织化学研究陈英杰孙品伟朱小辉（北京医科大学组织学与胚胎学系）采用半薄切片技术研究小鼠胸腺内细胞凋亡。对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔内注射地塞米松诱发胸腺细胞凋亡，制成凋亡模型。于注射后１、７、１５、１９、３０ｈ取材，常规电...

强力霉素抑制丝裂霉素诱导的MTEC1细胞凋亡及其蛋白质组初步分析

目的:探讨强力霉素(doxycycline,Dox)保护胸腺上皮细胞的作用及其机制,为进一步研究Dox的免疫调节作用奠定基础。方法:利用光学显微镜观察Dox对丝裂霉素(mitomycin,MMC)诱导MTEC1凋亡的影响,同时采用Hochest33342、PI单染、Annexin V和PI双染确认其作用,最后利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析了SAX2芯片捕获的Dox作用前后的差异蛋白质。结果:通过形态学观察、Hochest33342、PI单染及Annexin V和PI双染发现Dox确实能保护MTEC1抵抗丝裂霉素诱导的细胞凋亡。随后采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析SAX2芯片捕获蛋白,发现Dox能调控15种蛋白,其中上调8种,下调7种。结论:Dox具有保护MTEC1,抑制MMC诱导的细胞凋亡作用,并对MTEC1的蛋白表达有调控作用。

胸腺微环境

1961年,Miller等将新生小鼠胸腺摘除后,发现其淋巴器官发育不良,淋巴细胞数量锐减,同种移植排斥反应与抗体生成能力降低,易发感染,动物生长迟缓,死亡率高。此后,一系列实验逐步确立和阐明了胸腺在机体免疫系统的中枢地位,即胸腺是T细胞的生成器官.

识别胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞的单链抗体的筛选

目的 利用噬菌体展示技术寻找胸腺基质细胞表面的新抗原。方法 用培养的胸腺基质细胞系MTDC作为靶抗原富集初级噬菌体抗体库 ,从经过富集后的次级抗体库中挑选克隆 ,制备单链抗体 ,并在冰冻切片及培养的细胞系上检测抗体的特异性。结果 从经 4轮富集的次级抗体库中挑选到一个新的克隆。用此克隆制备的单链抗体可同时辨认胸腺髓质上皮细胞亚群和胸腺树突状细胞亚群。结论 胸腺髓质上皮细胞和胸腺树突状细胞均具有异质性 ,同时噬菌体展示技术可以作为寻找细胞表面新分子的强有力工具。

九株小鼠胸腺基质细胞系自发分泌白细胞介素7的能力

胸腺基质细胞（ＴＳＣ）及其分泌的细胞因子在Ｔ细胞发育中起重要作用。我们以真核表达质粒ｐＣＤ－ＳＲα－ｍＩＬ－７在Ｃｏｓ细胞中表达了小鼠重组白细胞介素７（ｍｒＩＬ－７），活性为１．０６×１０＾４ｕ／ｍｌ。应用特异依赖ＩＬ－７生长的ｃｌｏｎｅＫ细胞株测定ＩＬ－７的生物活性方法，检测了本室自建的９株小鼠胸腺基质细胞（ＭＴＳＣ）系分泌ＩＬ－７的能力，９株均可自发分泌低水平的ＩＬ－７。

胸腺素及其临床应用

胸腺素主要由胸腺被膜下上皮网状细胞和胸腺髓质的球形细胞分泌。近来研究证明,胸腺的同源组织表皮的角质形成细胞和呼吸道的上皮细胞,也能分泌胸腺激素。自从Goldstein于1966年首先获得胸腺提取物,命名为胸腺素(Thymosin)其分子量为12000,热温定。嗣后陆续研究证明。

胸腺和重症肌无力症

现已确认,胸腺摘除术是治疗重症肌无力(MG)尤其是全身型MG的方法。但此方法缺乏控制性,且无摘除胸腺何以有效的理论根据。故在治疗MG时必须注意阐明胸腺、胸腺瘤对MG作用的研究。一、胸腺在质上在细胞和正选择、髓质树枝状细胞和负选择分子遗传学等新方法对有关胸腺的T细胞分化、选择作用提出了许多新见解。一个T细胞具有一种T细胞抗原受体(TCR)。TCR和抗原结合与抗体和抗原结合不同。

益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力mTEC和Treg细胞增殖的影响

目的:探讨益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力(MG)患者胸腺髓质上皮细胞(mTEC)和调节性T细胞(Treg)增殖的影响。方法:采用血清药理学方法,将35只SD大鼠适应性喂养1周后随机分为益气解毒复方低、中、高剂量组,空白组,强的松组,每组7只。大鼠连续灌胃1周,制备上述各组含药血清。利用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法观察不同浓度益气解毒复方含药血清对mTEC和Treg细胞增殖的作用,并通过共同培养方式观察mTEC及益气解毒复方含药血清对Treg细胞增殖的作用。结果:胸腺细胞经培育,使用mTEC特征性标记荆豆凝集素Ⅰ(UEAI)做流式检测阳性率均值为92.54%。采用磁珠分选Treg细胞,多次磁珠分选后的Treg细胞纯度高达92%,mTEC和Treg细胞均呈较高阳性率表达,细胞为mTEC和Treg细胞,细胞纯度符合后续实验的要求。益气解毒复方含药血清体积分数2.5%~15%时,对mTEC和Treg细胞均有抑制作用,益气解毒复方含药血清浓度≥20%时对细胞的增殖有促进作用,且随作用的时间延长,含药血清对细胞的增殖的促进作用越为明显。培养48 h后的结果显示,与空白组比较,强的松组和益气解毒复方低剂量组差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。与mTEC共同培养的Treg细胞,与空白组比较,强的松组、益气解毒复方低剂量组Treg细胞增殖抑制率差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。结论:益气解毒复方含药血清能够影响胸腺增生型MG患者mTEC和Treg细胞的增殖,独立培养MG患者的Treg细胞相比,与mTEC共同培养的MG患者Treg细胞增殖具有促进作用,提示mTEC能够调控Treg细胞的增殖,且这种作用在予以益气解毒复方含药血清干预之后更为明显,说明益气解毒复方对Treg细胞的干预,可以通过对mTEC的治疗作用产生,这可能是益气解毒复方治疗MG的作用机制之一。

细胞重建胸腺可替代免疫抑制剂

日前,英国弗朗西斯·克里克研究所和伦敦大学学院的科学家利用人类干细胞和生物工程支架,重建了人类免疫系统中的重要器官——胸腺,该项研究朝着构建可用于移植的人工胸腺迈出了重要一步。为了重建该器官,研究人员从患者那里收集了胸腺,并在实验室中将捐赠组织的胸腺上皮细胞和胸腺间质细胞培养成数十亿个细胞的菌落。为获得胸腺的结构支架以便于用培养的胸腺细胞重新组装,研究人员开发了一种从小鼠胸腺中去除所有细胞仅保留结构支架的新方法。

自身免疫调节因子AIRE借助于ATF7ip-MBD1抑制复合体来诱导免疫耐受

自身免疫调节因子AIRE（autoimmune regulator,AIRE）是一种转录因子。Aire发生变异可导致人类出现APECED（autoimmune polyendocrinopathy candidiasis ectodermal dystrophy）疾病,患者表现为多种内分泌器官的特异性自身免疫性破坏,另外还有慢性皮肤黏膜念珠菌病和外胚层退行性病变等。AIRE-/-小鼠具有与APECED患者相似的自身免疫缺陷。2002年,Mark Anderson教授第一次明确了AIRE可以调节多种组织特异性抗原（TSA）在胸腺髓质上皮细胞（mTECs）的转录,从而启动阴性选择,维持T细胞的中枢耐受,解释了单一基因的突变却导致了多器官的免疫性损伤。