人狂犬病病毒抗体检测技术研究进展

人狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibody,RVNA)检测的标准方法是小鼠脑内中和法(mice neutralizationtest,MNT)和快速荧光灶抑制试验(mpid nuorescent focus inhibition test,RFFIT)。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,EusA)、胶体金(colloidal go1d,CD)法是MNT、RFFIT替代性检测方法。改良RFFIT包括结果判读自动化和以表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组狂犬病病毒替代CVS-11。优秀的ELISA试剂检测结果与RFFIT高度一致。CG试剂在检测灵敏性方面有待提高。持续改进人狂犬病病毒抗体检测方法仍然具有现实意义。

抗狂犬病病毒中和抗体效价快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的建立及应用

目的建立抗狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),验证其与小鼠脑内中和法(MNT)的相关性,并用于马抗狂犬病病毒血清(ERIG)和人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)及狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体效价的测定。方法待测血清或免疫球蛋白在96孔板中作3倍系列稀释,与能感染80%～95%细胞量的攻击病毒混合后,37℃体外中和1h,接种BSR细胞,培养24h后荧光染色,荧光显微镜下读取结果。用建立的RFFIT法与MNT法同时标定狂犬病免疫球蛋白国家标准品,并检测ERIG和HRIG以及疫苗免疫后血清样品的抗狂犬病病毒中和抗体效价,以比较两种方法的精密度和相关性。结果采用MNT法和RFFIT法检测我国抗狂犬病免疫球蛋白国家标准品的GMT分别为21.4和23.8IU/ml,两种方法的变异系数分别为62.3%和13.3%;两个实验室用RFFIT法测定我国国家标准品的结果分别为21.71和23.81IU/ml。两种方法测定ERIG和HRIG及疫苗免疫后血清中和抗体效价的结果差异无统计学意义,相关系数为0.976,两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论RFFIT法可替代MNT法检测抗狂犬病病毒中和抗体效价。