LC-MS/MS法测定小鼠脑组织中色氨酸及其3种代谢物

目的：建立检测小鼠脑组织中色氨酸、5-羟基色氨酸、5-羟色胺和5-羟基吲哚乙酸含量的LC-MS/MS分析方法。方法：采用TSK Gel amide 80（2.0 mm×15 cm,3μm）色谱柱,柱温35℃,乙腈：甲酸铵水溶液（15 mmol·L-1,p H5.5）（40∶60,v/v）为流动相,流速0.4 m L·min-1,采用正离子多反应监测（MRM）模式进行扫描。结果：4种待测物均在5 min内完成测定,色氨酸、5-羟基色氨酸、5-羟色胺和5-羟基吲哚乙酸最低定量限分别为0.2、0.1、0.2、0.2 ng·m L-1,最低检测限分别为0.05、0.02、0.05、0.05 ng·m L-1,在1~500 ng·m L-1浓度范围内线性关系均良好,方法的精密度和加样回收率均符合生物样品的分析要求。将该方法应用于口服萱草花总黄酮的小鼠脑提取物检测后发现：脑内四种待测物浓度明显发生改变,且变化规律与阳性药物帕罗西汀相同。结论：本方法简便、准确、灵敏度高,专属性强,重复性好,适用于脑组织中色氨酸-五羟色胺代谢过程中的4种成分的测定,可应用于神经精神类药物的药理作用机制研究。

苦荞黄酮对缺氧小鼠脑组织MDA含量的影响

目的观察苦荞黄酮对小鼠脑缺血的保护作用。方法部分结扎颈总动脉建立脑缺氧小鼠模型,灌胃给与苦荞黄酮200、100、50mg/kg,测定小鼠脑组织MDA的含量。结果结扎颈总动脉2小时后脑内MDA含量明显增加。苦荞黄酮200、100、50mg/kg均可明显抑制脑缺血所致脑内MDA含量的升高。结论苦荞黄酮对脑缺血有一定的保护作用。

HPLC-ECD法测定小鼠脑组织内去甲肾上腺素的含量

目的:建立小鼠脑内去甲肾上腺素含量的高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)测定方法。方法:小鼠脑组织采用70%高氯酸沉淀蛋白后,以HPLC-ECD法进行分析。使用汉邦lichrospher C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为醋酸钾缓冲液-甲醇(95:5,pH 4.5),流速为1.0 ml·min^(-1),温度为25℃;电化学检测器电压为0.6 V,电流为100 nA,频率为0.05 Hz。结果:去甲肾上腺素在0.1～25μmol·L^(-1)范围内线性关系良好,日内、日间RSD分别小于7.81%和3.61%,回收率为75.05%,测得小鼠脑内去甲肾上腺素含量为(8.94±0.71)μg·g^(-1)。结论:该方法快速、准确。

姜黄素对痴呆小鼠脑组织中MDA含量、SOD活性的影响

老年性痴呆（AD）病因及发病机制迄今尚不清楚,更没有研究出根治AD病的药物,目前在临床上已经使用的治疗药物副作用大,疗效均不能令人满意[1]。姜黄素（curcumin）是从姜科姜黄属植物姜黄根茎中提取的一种酚性色素,由于其色泽稳定且毒性很低,目前已广泛应用于食品添加剂和染料中。已有研究发现姜黄素可降低氧化应激、抑制细胞凋亡。

茶多糖-茶多酚对D-半乳糖诱导的小鼠脑组织氧化损伤的改善作用

目的:探究茶多糖-茶多酚混合成分(茶多糖含量为56.93%,茶多酚含量为19.37%)对D-半乳糖(Dgalactose,D-Gal)诱导的小鼠脑组织氧化损伤的改善作用,为功能性食品的研发提供理论依据。方法:以DGal诱导小鼠建立氧化应激损伤模型,保留12只小鼠作为正常组。将建模成功的小鼠随机分为模型对照组、阳性药物组(还原型谷胱甘肽,200 mg/kg·bw)、茶多酚对照组(50 mg/kg·bw,与茶多糖-茶多酚高剂量组中茶多酚剂量相当)以及茶多糖-茶多酚混合成分的低、中、高剂量组(40、100、250 mg/kg·bw),连续灌胃45 d,测定小鼠脑组织匀浆中生物大分子氧化损伤标志物含量及酶类抗氧化系统相关指标的变化。结果:与模型组对比,茶多糖-茶多酚高剂量组小鼠脑组织匀浆中蛋白质羰基(protein carbonyl,PCO)、晚期蛋白氧化产物(advanced oxidation,AOPP)、3-硝基酪蛋白(3-nitrotyrosine,3-NT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、8-异前列腺素(8-iso-prostaglandin,8-iso-PG)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(8-hydroxy-2’-desoxyguanosine,8-OHdG)、5-羟基胞嘧啶(5-hydroxy-2’-desoxyguanosine,5-OH-DG)分别降低22.95%、15.23%、15.29%、25.23%、23.15%、32.36%、28.63%(P<0.05);超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)水平分别增加71.15%(P<0.05)、36.90%(P<0.05),均恢复到正常水平(P>0.05)。与茶多酚组相比,茶多糖-茶多酚高剂量组的PCO、AOPP、3-NT、MDA、8-iso-PG、5-OH-DG水平分别降低4.06%、1.81%、 4.96%、 10.12%、 3.40%、 12.50%(P>0.05), 8-OHdG水平下降21.19%(P<0.05);SOD浓度增加15.63%(P>0.05),GPX浓度增加5.84%(P<0.05)。结论:茶多糖-茶多酚混合成分能有效改善小鼠脑组织的氧化损伤,且茶多糖-茶多酚混合成分的改善作用优于同剂量茶多酚。

小鼠脑组织制样过程中不同染色时间对结果的影响

目的比较在透射电镜(TEM)制样过程中不同染色时间对小鼠脑组织超微结构观察效果的影响。方法选取3只健康KM小鼠,进行脑组织灌注固定,切取每只小鼠2个海马区样品做常规制样,每个样品制备2个超薄切片,醋酸铀和柠檬酸铅双染色法染色,醋酸铀染色时间分为10 min(A组)、30 min(B组)、50 min(C组),柠檬酸铅染色时间分为2 min(A1、B1、C1)、5 min(A2、B2、C2)、10 min(A3、B3、C3)、20 min(A4、B4、C4),选择放大倍数为5 000和25 000,采用透射电镜观察。结果放大5 000倍时,可观察到B2、B3样品着色最佳,图像反差明显,观察效果最好;放大25 000倍时,各组样品观察效果一样。结论染色时间对小鼠脑组织制样的透射电镜观察效果有明显的影响,铀染30 min后铅染5~10 min效果最佳。

高效液相色谱法测定百草枯染毒后小鼠脑组织中8种单胺类神经递质的含量变化

应用高效液相色谱法测定小鼠脑组织中8种单胺类神经递质(去甲肾上腺素、肾上腺素、左旋多巴、多巴胺、二羟基苯乙酸、5-羟色胺、5-羟基吲哚乙酸和高香草酸)的含量,并研究其含量随百草枯中毒时间的长短而产生的变化情况。取小鼠36只,分为6组,每组6只。其中一组为对照组,其余5组的小鼠均按30mg·kg^-1的剂量给予灌服百草枯,对照组小鼠灌服同体积的生理盐水。按给毒后达到6,12,24,48,72h时,用1%戊巴比妥钠溶液先后将其麻醉并在低温条件下取其脑组织。按1g∶7.5mL的比例在每份脑组织中加入组织匀浆液并匀浆30s,在4℃高速离心2次,每次15min,取其上清液供色谱分析。在Hypeisil GOLD aQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)上,用不同比例的甲醇和30mmol·L^-1磷酸二氢钾-磷酸缓冲溶液(pH 4.6)的混合液为流动相进行梯度洗脱,并用荧光检测器测定各组分的峰面积,用外标法定量。上述8种单胺类神经递质的线性范围均在1000μg·L^-1以内,其检出限(3S/N)在0.34~5.26μg·L^-1之间。对样品重复测定5次,测得8组分测定值的相对标准偏差(n=5)在0.58%~4.2%之间,加标回收试验得出其回收率在90.8%~106%之间。同时测得了在百草枯染毒后3d内8种单胺类神经递质含量的变化情况,为进一步研究提供可靠依据。

巴西蘑菇多糖对小鼠脑组织表达粒-巨噬细胞集落刺激因子的影响

目的 :研究巴西蘑菇多糖 (ABPS)对小鼠脑组织表达粒 巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)的影响。方法 :应用组织培养技术、克隆形成法、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)等方法检测小鼠脑组织在ABPS作用下表达GM CSF的变化。结果 :不同浓度的ABPS对小鼠脑组织表达GM CSF有明显的促进作用 ,浓度范围为 2～ 6mg·ml-1之间 ,最佳浓度为4mg·ml-1。经LightFramesoftware分析 ,小鼠GM CSF在 96 0bp处出现一高峰。结论 :ABPS有促进小鼠脑组织表达GM CSF的作用 。

转基因小鼠脑组织中突触素和发动蛋白Ⅰ及衔接蛋白180表达的变化

[摘要]目的：探讨瑞典型淀粉样前体蛋白突变基因转基因小鼠脑组织中突触素（synaptophysin）、发动蛋白I（dynamin Ⅰ）及衔接蛋白180（AP180）表达变化。方法：选择6只瑞典型淀粉样前体蛋白突变基因转基因小鼠为转基因组，

PM_(2.5)对小鼠脑组织急性氧化损伤的影响研究

目的探讨PM_(2.5)对小鼠脑组织的急性毒性效应。方法将SPF级雄性Balb/c小鼠48只随机分为6组:对照组(生理盐水组)、生理盐水+褪黑素组、4μg/d PM_(2.5)组、20μg/d PM_(2.5)组、100μg/d PM_(2.5)组、100μg/d PM_(2.5)+褪黑素组,每组8只。各染毒组分别以0.1、0.5、2.5 mg/ml PM_(2.5)溶液进行气道滴注,每只小鼠每天滴注40μl,连续7 d;生理盐水+褪黑素组、100μg/d PM_(2.5)+褪黑素组每天以1.0 mg/ml褪黑素灌胃,灌胃剂量为10 mg/(kg·d),连续7 d。检测脑组织中活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法检测脑组织中白细胞介素-4(IL-4)的水平。结果 100μg/d PM_(2.5)组小鼠脑组织ROS、MDA、IL-4含量高于对照组,GSH含量低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);20μg/d PM_(2.5)组小鼠脑组织MDA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。100μg/d PM_(2.5)+褪黑素组小鼠脑组织ROS、MDA、IL-4含量低于100μg/d PM_(2.5)组,GSH含量高于100μg/d PM_(2.5)组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 100μg/d PM_(2.5)气道滴注染毒可能对小鼠脑组织造成损伤,产生炎症反应,并通过氧化应激反应介导;褪黑素对PM_(2.5)引起的脑组织氧化损伤有一定的拮抗作用。

高压氧对脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织基因表达的影响

目的 探讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织基因表达的影响。方法 依照文献建立脑缺血再灌注损伤C57BL/6小鼠模型,用BiostarM-20s型表达谱芯片检测经HBO处理48h、第 10天后的小鼠脑组织基因表达的变化。结果 HBO治疗 48h时,可以使精子酵素前体结合蛋白(PBP)等 13条基因表达下调;HBO治疗第 10天时,可以使细胞色素P450等 4条基因表达上调,微管蛋白α亚基等 74条基因表达下调。结论 HBO治疗对脑缺血再灌注损伤后小鼠脑组织相关基因表达有一定的影响,有助于探索HBO治疗缺血性脑损伤的分子机制。

不同剂量钼对小鼠脑组织CO、ACh、AChE和AChR-Ab含量的影响

为探究钼对小鼠脑组织CO、ACh、AChE和AChR-Ab的影响,选用30日龄昆明小鼠160只,随机平均分成4组(Ⅰ~Ⅳ组),分别在饮水中添加0,100,200,400mg/L剂量的钼酸钠(以钼离子计),建立钼中毒动物模型,定期剖杀取样,检测小鼠脑组织内CO、ACh、AChE和AChR-Ab含量动态变化,试验期11周。结果显示:1Ⅲ、Ⅳ组小鼠脑组织中CO含量随时间延长呈下降趋势且差异显著(P<0.05),但Ⅱ~Ⅳ组CO含量显著高于对照组(Ⅰ组)(P<0.05)。2Ⅱ~Ⅳ组小鼠脑组织中ACh含量随着时间延长均呈下降趋势,不同时间的检测值之间有显著性差异(P<0.01或P<0.05);第7周开始,Ⅱ~Ⅳ组小鼠脑组织中ACh的含量显著低于Ⅰ组,且钼剂量越高、作用时间越长ACh含量越低。3试验周期内,Ⅱ~Ⅳ组AChE含量与Ⅰ组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),第7周开始,Ⅱ~Ⅳ组AChE含量随着试验时间延长呈上升趋势,且均高于Ⅰ组。4Ⅱ~Ⅳ组AChR-Ab含量先下降(5~7周)后上升(9~11周),不同检测时间的数值有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结果表明,200mg/L以上剂量的钼作用7周能造成小鼠脑组织内源性CO升高,ACh含量降低、AChE以及AChR-Ab含量上升。

绿色荧光蛋白在绿色裸小鼠脑组织中的表达

自1997年Okabe等研究出增强型绿色荧光蛋白（EGFP）转基因小鼠，EGFP荧光示踪在干细胞研究中便发挥着重要作用。我们将这种绿色小鼠与NC裸小鼠杂交，建立了表达EGFP的裸小鼠C57BL／6J—EGFPXNC／Nud，本文着重对小鼠脑组织中EGFP表达进行分析鉴定。

健忆口服液对老年小鼠全脑组织重量、单胺类神经递质和β淀粉样蛋白作用的实验研究

目的观察健忆口服液对老年小鼠脑组织重量、单胺类神经递质和β淀粉样蛋白(Aβ)的作用.方法设昆明种老年小鼠(18～20月龄)中药治疗组(健忆口服液20 g·kg-1·d-1)及对照组;另设8～10月龄小鼠为青年对照.灌胃给药,疗程为4周.观察指标:1、小鼠脑重量;2、全脑组织去甲肾上腺素(NA)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)含量;3、全脑组织Aβ含量.结果老年鼠的脑重量及脑组织NA、DA、5-HT和Aβ含量变化均较青年小鼠有非常显著差异(P＜0.01);服药四周后治疗组上述指标变化,与对照组比较均有显著差异(P＜0.05),但与青年鼠比较仍有显著差异(P＜0.05).结论健忆口服液对老年小鼠脑组织Aβ具有明显降低治疗作用,提示可能对阿尔茨海默病相关指标具有相似治疗作用;其对老年小鼠脑萎缩和单胺类神经递质下降也有明显改善治疗作用,提示可能具有多水平、多靶点的治疗作用.

弓形虫慢性感染小鼠脑组织差异表达蛋白质组学

通过比较弓形虫慢性感染小鼠与健康小鼠的脑组织,筛选差异表达的鼠脑蛋白质,以期从蛋白质组学角度挖掘其导致中枢神经系统(central nervous system,CNS)损伤的机制,并为寻找生物标志物提供靶标。建立弓形虫PRU株慢性感染小鼠模型,运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR和Western blot验证iTRAQ数据。结果共鉴定出4 983个蛋白,差异表达蛋白461个,其中215个蛋白上调表达,246个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢和神经过程等通路。结果表明,iTRAQ结合LCMS/MS技术能快速有效地进行蛋白质组学研究,为研究弓形虫慢性感染致宿主CNS损伤机制以及发现新的生物标志物提供参考。

邻苯二甲酸二异壬酯单独暴露及与褪黑素联合作用对小鼠脑组织损伤研究

人类神经系统成熟的海马神经元细胞不能进行复制与自我修复,导致了神经系统易受到环境污染物损伤的风险.邻苯二甲酸二异壬酯(Diisonyl phthalate,DINP)是一种增塑剂替代产品,类雌激素作用较弱,正受到欧盟的推广使用.虽然目前已有一些研究表明了DINP的毒性,但有关其神经毒性的体内研究国内还较少.因此,本研究探讨了DINP单独暴露及与褪黑素联合作用对小鼠脑组织的影响.行为学分析显示,经灌胃200 mg·kg^(-1)·d^(-1)的DINP会导致小鼠行为学出现明显变化;脑组织病理学观察、免疫组化分析(半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP))、氧化应激水平检测(活性氧簇(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、8-羟基脱氧鸟苷(8-OH-d G)、DNA-蛋白质交联(DPC))、炎症水平检测(肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)、白介素1β(IL-1β))结果显示,小鼠脑组织海马区出现了病理学损伤,氧化应激和炎症水平上升(p<0.01).DINP处理后予以50 mg·kg-1·d-1的褪黑素可以降低氧化应激水平,对小鼠脑组织海马区起到保护作用.以上数据表明,实验剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))DINP处理后可以导致小鼠脑组织损伤,同时予以褪黑素可以在一定程度上缓解这种损伤.

苯并(a)芘和铅对小鼠大脑神经元损伤的研究

[目的]研究苯并(a)芘(BaP)、铅单独及其联合作用对小鼠大脑神经元DNA的损伤。[方法]将80只昆明种小鼠随机分为10组(每组8只) ,即空白对照组、溶剂对照组、低浓度铅染毒组、高浓度铅染毒组、低剂量BaP染毒组、高剂量BaP染毒组、低浓度铅+低剂量BaP联合染毒组、低浓度铅+高剂量BaP联合染毒组、高浓度铅+低剂量BaP联合染毒组及高浓度铅+高剂量BaP联合染毒组。空白对照组不作处理,溶剂对照组用等容量植物油平行处理;低、高浓度的铅染毒分别为5 .4、5 4mg/L的醋酸铅饮水染毒;低、高剂量BaP染毒分别为0 .5、5mg/kg的BaP植物油溶液,每周4次腹腔注射,联合染毒组接受两种处理。染毒8周后取各组小鼠脑组织制作细胞悬液,单细胞凝胶电泳法检测小鼠大脑神经元DNA的损伤。[结果]①单独染毒:BaP 5mg/kg染毒组小鼠大脑神经元DNA的损伤程度高于对照组(P <0 .0 5 )。②联合染毒:5 .4mg/L的醋酸铅+ 0 .5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 5 ) ;5 .4mg/L的醋酸铅+ 5mg/kg的BaP染毒组(P <0 0 1) ;5 4mg/L的醋酸铅+ 0 .5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 1) ;5 4mg/L的醋酸铅+ 5mg/kg的BaP染毒组(P <0 .0 1)小鼠大脑神经元DNA的损伤程度显著高于对照组。[结论]高剂量BaP连续8周暴露可损伤小鼠大脑神经元;

健忆口服液对老年小鼠脑内β淀粉样蛋白和Tau蛋白的作用

目的观察健忆口服液对老年小鼠脑组织中β淀粉样蛋白(Aβ)和Tau蛋白的作用及其与单胺类神经递质的相关性.方法设昆明种老年小鼠(18～20月龄)为中药治疗组(健忆口服液20g·kg-1·d-1)和对照组;另设昆明种小鼠(8～10月龄)为青年对照组.灌胃给药2～4周.检测:小鼠全脑组织Aβ、Tau蛋白、去甲肾上腺素(NA).结果青年与老年鼠相比全脑组织NA、Aβ和Tau蛋白含量水平差异均有高度显著性(P<0.01);服药2周后,治疗组Aβ含量变化较对照组差异有显著性(P<0.05);疗程4周时,NA、Aβ和Tau蛋白含量变化,在治疗组与对照组之间差异均有高度显著性(P<0.01),但与青年鼠比较差异仍有显著性(P<0.05);老年小鼠脑组织NA含量与Aβ、Tau蛋白含量之间,在对照组和治疗组均无显箸相关性.结论健忆口服液对老年小鼠脑组织Aβ和Tau蛋白具有明显改善治疗作用,提示可能对阿尔茨海默病相关指标具有相似治疗作用;NA与Aβ、Tau蛋白无相关性,不能相互替代检测.

沙棘汁对铅所致小鼠脑脂质过氧化和单胺类神经递质变化的影响(英文)

[目的]研究沙棘汁对醋酸铅所致小鼠脑脂质过氧化、胆碱酯酶及MAO -A、B活性及单胺类神经递质变化的影响。[方法]采用硫代巴比妥酸比色法测定脂质过氧化作用中的中间产物MDA ;碱性羟胺法测定胆碱酯酶活性;苄胺法测定MAO- A、B活性;荧光法测定单胺类神经递质含量。[结果]2 0d腹腔注射醋酸铅1 0mg/kg组小鼠,其脑组织MDA含量明显增多,胆碱酯酶活性升高,MAO A、B活性增高,同时给予2 0 %、4 0 %沙棘汁可以不同程度地缓解这种脑组织神经生化改变。给铅组小鼠脑组织NE、5- HE、5- HIAA含量明显减少,80 %沙棘汁能拮抗此种变化,但DA含量未见明显改变。[结论]2 0 %、4 0 %沙棘汁能拮抗铅致小鼠脑脂质过氧化、胆碱酯酶及MAO- A、B活性及单胺类神经递质含量的改变。