彗星试验检测酚类化合物对小鼠脾脏细胞DNA损伤的研究

应用彗星试验技术 ,研究了酚类化合物对小鼠脾脏细胞DNA的损伤作用 ,试验结果表明 ,12种酚类化合物对小鼠脾脏细胞均能引起不同程度的DNA损伤 ,并呈现剂量效应关系。与对照组相比 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。试验结果亦表明 。

灵芝三萜对小鼠脾脏树突状细胞增殖的影响

目的:观察灵芝三萜(Ganoderma Triterpene,GT)对小鼠脾脏树突状细胞(Dendritic cells,DC)增殖的影响.方法:采用MTT法,以细胞因子(GM-CSF+IL-4)作比较,观察不同浓度GT以及细胞因子+不同浓度的GT对小鼠脾脏DC的增殖作用.结果:GT在实验浓度范围内(40～200μg/ml)均可显著刺激小鼠脾脏DC增殖,但其刺激强度均明显低于细胞因子组;GT+细胞因子,与对照组相比均有显著的促增殖作用,且明显高于细胞因子组.结论:GT不仅能直接促进小鼠脾脏DC的增殖,而且与细胞因子有显著的协同作用.

氨基酚类化合物对人淋巴细胞及小鼠脾脏细胞DNA损伤的比较

目的研究氨基酚类化合物对人外周血淋巴细胞及小鼠脾脏细胞DNA的损伤效应。方法选用人淋巴细胞及小鼠脾脏细胞进行研究。暴露时间为1h。应用单细胞凝胶电泳技术,计算细胞损伤率及专用单位。结果3种氨基酚类化合物均能引起两种细胞不同程度的DNA损伤,高剂量组与阴性对照组相比,差异均有显著性(P<0.05),其中对氨基酚的毒性高于邻氨基酚和间氨基酚,其损伤的程度随剂量的增加而增加。结论与小鼠脾脏细胞相比,人外周血淋巴细胞的敏感性较强,更能直接反映氨基酚类化合物对人群的遗传毒性。

不同细胞因子诱导的小鼠骨髓树突状细胞亚群与小鼠脾脏树突状细胞亚群的比较

目的对粒-单集落刺激因子(GM-CSF)/白介素4(IL-4)或脱氧氟胸腺嘧啶配体(Flt3-L)体外诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)亚群和正常小鼠脾脏DC亚群进行比较,探索诱生DC的特性。方法分离Balb/c小鼠骨髓细胞,分别加入含GM-CSF/IL-4或Flt3-L的培养液,体外培养7d,倒置显微镜观察细胞形态,并用流式细胞术检测CD11c、MHCⅡ、CD4、CD8α、CD45RA及Sirp-α分子;利用免疫磁珠从小鼠脾脏细胞中分离DC。结果两组细胞因子均可在体外诱导小鼠骨髓细胞分化发育为未成熟的DC;倒置显微镜下观察可见BMDCs表面有树突状突起,具有典型的DC形态学特点,与Flt3-L诱导的BMDC相比GM-CSF/IL-4诱导的DC体积大,树突长;但是,流式细胞术检测发现Flt3-L体外诱导的BMDCs与小鼠脾脏DC亚群更为相似。结论 GM-CSF/IL-4及Flt3-L均可在体外诱导小鼠骨髓细胞分化发育为DC,且Flt3-LDC亚群与脾脏DC亚群相似,有可能成为体外研究脾脏来源DC的一种方法。

蒙药特润舒都乐对模型小鼠脾脏NK细胞活性的影响

目的：观察和探讨蒙药特润舒都乐对小鼠脾脏NK细胞杀伤活性的影响，了解该蒙药的生物学活性。方法：采用皮下给药的体内实验及3H-TdR掺入抑制法检测小鼠脾脏NK细胞活性。结果：蒙药特润舒都乐能显着提高小鼠脾脏NK细胞杀伤活性，且呈剂量依赖性，其高、中、低剂量（50，25，10mg／L）各组的NK活性分别为64．39±16．53、46．21±13．28、36．09±12．26，与空白对照及阴性对照均有显着性差异（P〈0．05）。结论：蒙药特润舒都乐能提高NK细月缸活性，并有剂量依赖性。

小鼠脾脏成纤维网状细胞的分离、培养及鉴定

目的建立小鼠脾脏基质细胞培养的方法 ,分离出成纤维网状细胞并对其进行鉴定。方法取健康C57小鼠脾脏,胶原酶消化后,用磁珠分选出CD45-脾脏基质细胞,接种于α-MEM培养基,传代培养待其稳定生长。流式细胞仪进一步分选出成纤维网状细胞(gp38+CD31-),并用PCR、免疫荧光的方法检测其趋化因子表达。结果利用磁珠分离出脾脏的基质细胞培养后可以稳定传代,成功的分选出小鼠脾脏成纤维网状细胞(gp38+CD31-),并检测到其CCL19和CCL21的表达。结论成功分离培养脾脏基质细胞,并分选出有功能的成纤维网状细胞,为实验研究提供稳定的细胞来源。

小鼠脾脏B淋巴细胞纯化培养方法的建立

背景:B淋巴细胞是机体免疫系统重要的参与者,目前的研究主要采用磁珠、补体等方法进行B淋巴细胞的分离纯化,但是这些方法费用高或者细胞损伤大、纯度低,体外分离、培养B淋巴细胞的方法还有待进一步改进。目的:探讨从小鼠脾脏细胞中对B淋巴细胞同时进行分离、培养的方法。采用加入白细胞介素4、脂多糖或者CD3单克隆抗体及其组合,探讨体外分离、培养小鼠脾脏B淋巴细胞的适宜条件。方法:体外分离培养小鼠脾脏细胞,随机分为7组,分别用白细胞介素4,CD3,脂多糖,白细胞介素4+CD3,白细胞介素4+脂多糖,CD3+脂多糖组进行干预、将未给予刺激的脾细胞作为对照组。用流式细胞仪检测在不同培养条件下小鼠脾脏细胞T、B淋巴细胞及其亚群的变化。结果与结论:与对照组比较,白细胞介素4组淋巴细胞在培养后第3-5天数量达到高峰;脂多糖组在培养初期无明显作用,第3天开始淋巴细胞数量有明显的增加,第5天达到高峰;培养体系中加入CD3单克隆抗体,可导致T淋巴细胞消失,培养2 d后,可得到较为单一的B淋巴细胞,其细胞数量在第3天达到高峰。其中B220+IgD+成熟B淋巴细胞亚群数量显著增加。体外培养24 h后,各组B220+CD93+Transitional B淋巴细胞亚群均完全消失。结果说明,体外培养的小鼠脾脏细胞加入CD3单克隆抗体和白细胞介素4可以去除T淋巴细胞,并维持成熟B淋巴细胞的生存和增殖。

羧胺三唑增强小鼠脾脏淋巴细胞促进结肠癌细胞系MC38和C26凋亡

目的探讨羧胺三唑(CAI)直接或通过小鼠脾脏淋巴细胞间接对小鼠结肠癌细胞系(MC38和C26)存活和凋亡的影响。方法体外培养结肠癌细胞系MC38和C26细胞,分离小鼠脾脏淋巴细胞,MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养,不同浓度CAI处理细胞。CCK-8法检测细胞存活,流式细胞测量术检测细胞凋亡以及小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例。结果不同浓度CAI处理MC38和C26细胞后,活细胞数目减少(P<0.05、P<0.01和P<0.001),凋亡率升高(P<0.01和P<0.001);MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养48 h后,MC38和C26细胞数目减少(P<0.001),凋亡率升高(P<0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞共培养条件下的MC38和C26细胞48 h,与单独小鼠脾脏淋巴细胞处理相比,MC38和C26细胞数目进一步减少(P<0.001),凋亡率进一步升高(P<0.05和P<0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞48 h后,小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例显著升高(P<0.05和P<0.01)。结论CAI抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡,并可能通过升高小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例增强小鼠脾脏淋巴细胞抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡。

穿龙薯蓣皂苷提取及其对小鼠脾脏细胞活性的影响

利用回流提取法分别提取穿龙薯蓣粉末和穿龙薯蓣粗块,并利用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇三种有机溶剂对提取液进行萃取,再利用这四种提取液对小鼠脾脏细胞活力进行检测试验.结果表明:薯蓣皂苷在水中的溶解性较其他三种有机溶剂好,穿龙薯蓣表面积越大,越有利于薯蓣皂苷的提取.MTT试验表明,穿龙薯蓣皂苷对小鼠脾脏细胞活力的影响不明显.

蜜蜂巢脾多糖对免疫抑制小鼠脾脏Th1/Th2细胞因子及转录因子mRNA表达的影响

为了研究蜜蜂巢脾多糖的免疫调节活性,试验设置空白对照(K)组、模型对照(M)组、阳性对照(Y)组及蜜蜂巢脾多糖低剂量(F1)组、蜜蜂巢脾多糖中剂量(F2)组、蜜蜂巢脾多糖高剂量(F3)组,对除K组外的各组小鼠腹腔注射环磷酰胺构建免疫抑制模型,采用qRT-PCR技术检测各组小鼠脾脏细胞因子IL-4、IFN-γ及Th1/Th2转录因子T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果表明:相比K组,M组Th2转录因子GATA-3 mRNA及细胞因子IL-4 mRNA的表达显著提高(P<0.05),而Th1转录因子T-bet mRNA及细胞因子IFN-γmRNA的表达显著降低(P<0.05)。与M组相比,Y组及F2组Th1转录因子T-bet mRNA及细胞因子IFN-γmRNA的表达均显著提高(P<0.05),而Y组及蜜蜂巢脾多糖各组中Th2转录因子GATA-3 mRNA及细胞因子IL-4 mRNA的表达虽有所降低,但与M组差异不显著(P>0.05)。说明蜜蜂巢脾多糖可通过上调Th1转录因子T-bet mRNA及细胞因子IFN-γmRNA的表达促进免疫抑制小鼠机体Th1/Th2恢复平衡。

应用基因芯片技术研究小鼠脾脏T细胞激活后与老龄化相关的基因表达的变化

老龄化与免疫失调有关,而T细胞发育对免疫功能的调节发挥重要作用。本实验应用抗CD3/CD28抗体刺激小鼠脾脏T细胞,应用基因芯片技术研究与老龄化相关的基因在不同时间点的变化。分别取C57BL年幼小鼠(4~6月龄)与年老小鼠(22~24月龄)的脾脏,提取T细胞,进行体外培养,并加入CD3/CD28抗体刺激T细胞后0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48

两种胃癌细胞株与小鼠原代脾脏淋巴细胞共培养对Th17细胞分化的影响

目的观察不同胃癌细胞株与CD4^(+)T细胞共培养后Th17细胞分化的改变情况。方法将分离并鉴定后的小鼠原代脾脏淋巴细胞分别与人胃癌SGC-7901细胞株、人胃癌BGC-823细胞株共培养,分为SGC-7901共培养组、BGC-823共培养组和对照组。以细胞内细胞因子染色FCM测定Th17细胞,计算CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数量百分比。结果SGC-7901共培养组、BGC-823共培养组、对照组的CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数量分别为(3.97±0.27)%、(5.17±0.14)%、(1.96±0.29)%,与SGC-7901共培养组比较,BGC-823共培养组Th17细胞数量均显著增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在胃癌环境下,CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化增多。

小鼠脾淋巴细胞辐射死亡与凋亡之间的关系

探讨细胞凋亡在小鼠脾脏辐射损伤与重建中的作用及其机制，为急性放射病的防治提供依据。用原位末端标记、ＤＮＡ电泳和免疫组化技术观察经２～８Ｇｙ不同剂量γ射线整体照射后，小鼠脾脏淋巴细胞凋亡的动态变化过程和Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２蛋白在其中的作用。结果表明，（１）照射后早期淋巴细胞凋亡率迅速增加，如６Ｇｙ照射后４ｈ和１ｄ凋亡率分别为对照值的４９和９７倍；凋亡率还随照射剂量的增加而迅速升高，照射后８ｈ当照射剂量为２、４、６、８Ｇｙ时，凋亡率分别为对照值的３７、５４、６２和８３倍。（２）透射电镜观察表明，６Ｇｙγ－线照射后，小鼠脾脏淋巴细胞出现早、中、晚期典型凋亡细胞的形态学特征。ＤＮＡ凝胶电泳显示６Ｇｙ照射后４和６ｈ，脾脏淋巴细胞出现特征的ＤＮＡ梯形谱；末端标记法显示６Ｇｙ照射后４ｈ凋亡率约为照前值的３４倍。（３）照射后Ｂａｘ、Ｂｃｌ－２蛋白的异常表达证实两者在淋巴细胞凋亡的调控中起重要作用。细胞凋亡参与了小鼠脾脏辐射损伤与修复的全过程，Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２蛋白对淋巴细胞凋亡的调控起重要作用。

钩吻素子对小鼠CD4^+T淋巴细胞Th1类及Th2类细胞因子分泌的影响

目的研究钩吻素子(Koumine,Kou)对小鼠CD4+T淋巴细胞Th1类及Th2类细胞因子分泌的影响。方法分离纯化小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,经刀豆球蛋白A(ConcanavalinA,ConA)刺激诱生细胞因子,然后加入不同浓度的Kou,继续培养24小时后离心收集细胞培养上清。用酶联免疫法(ELISA法)检测细胞上清中Th1类细胞因子IL2、IFNγ以及Th2类细胞因子IL4、IL10的含量变化情况,观察药物对CD4+T淋巴细胞因子表达的影响。结果对于Th1型细胞因子,各浓度组Kou作用24h后均可显著降低IL2、IFNγ的水平,并呈剂量依赖性;对于Th2型细胞因子,Kou对IL4表达影响不大,但中浓度组Kou(100μg/ml)可显著升高IL10的水平。结论对CD4+T细胞Th细胞因子分泌的调节可能是Kou治疗银屑病等T细胞活化异常炎症性疾病的免疫药理机制之一。

丝裂霉素C诱发小鼠外周血和骨髓细胞微核率的比较

微核实验自创建以来,已得到广泛应用。但仅有小鼠骨髓嗜多染红细胞(polyc-hromatic erythrocytes,PCE)微核实验发展为标准实验。而以骨髓为实验材料易受采样限制,也不能对动物进行长期动态观察。1980年,MacGregor等首先证明小鼠外周血PCE微核(micronuclei,MN)率与骨髓PCE微核率相当,若能以外周血作为材料,实验无疑会大大简化。但近年来国内外有关外周血微核率的报道结果有些混乱。为了进一步研究微核在外用血PCE、正染红细胞(normochromatic erythrocytes,NCE)和骨髓PCE中的分布情况,我们以丝裂霉素C)(mitomycinC,MMC)为诱变剂,观察了小鼠外周血PCE、NCE以及骨髓PCE微核率之间的关系。

伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗大肠杆菌感染的作用

目的:研究伴大豆球蛋白水解肽对小鼠抗大肠杆菌感染的作用.方法:选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠,随机分为5个处理组,饲喂基础日粮3d后,将E.coliO138(菌浓为2×1011CFU/L)依次10倍稀释,分别灌喂5个处理组,每组0.2mL/只,计算灌菌56h后,其LD50值为4.73×1010CFU/L.分两批选用21日龄昆明系清洁级雄性小鼠,随机分为6个处理组:NOR组(正常对照组)和FEC组(灌菌对照组):基础日粮+生理盐水;HCL-FHC组:基础日粮+盐酸彻底水解伴大豆球蛋白液;Conglycinin组:基础日粮+伴大豆球蛋白;PTC组:基础日粮+伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽;P2-PTC组:基础日粮+水解肽提纯B组分;除NOR组和FEC组外,各处理组灌喂液体总含氮量相等,0.2mL/只.连续灌喂21d后,第22d中午将E.coliO138(第1批菌浓为2×109CFU/L,第2批菌浓为2×1011CFU/L)分别灌喂FEC至P2-PTC组,0.2mL/只.观察小鼠发病及死亡情况直至灌菌后48h,处死各组小鼠,取血、脾脏和整段小肠,用放射免疫分析(RLA)法测定免疫学指标.结果:小鼠灌喂伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽后,对感染不同剂量E.coli,反应不同.伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能显著提高灌喂2×109CFU/LE.coliO138后小鼠脾脏IL-2水平(P2-PTC组19.2±9.6μg/gvsNOR组11.5±4.7μg/g,P<0.05;P2-PTC组19.2±9.6μg/gvsFEC组9.4±3.7μg/g,P<0.01),能提高肠黏膜sIgA水平;显著降低脾脏IL-6(P2-PTC组127.1±52.8ng/gvsNOR组276.4±60.1ng/g,P<0.01:P2-PTC组127.1±52.8ng/gvsFEC组224.5±38.9ng/g,P<0.05)和TNF-α(PTC组9.1±2.0μg/gvsNOR组16.3±3.9μg/g,P<0.05)水平;但对血清IL-2水平无显著性影响;能显著提高灌喂2×1011CFU/LE.coliO138后小鼠脾脏IL-6水平(P2-PTC组480.5±184.7ng/gvsNOR组206.7±72.3ng/g,P<0.05),能极显著提高脾脏TNF-α水平(P2-PTC组43.3±5.8μg/gvsNOR组10.5±4.1μg/g,P<0.01:P2-PTC组43.3±5.8μg/gvsFEC组19.7±9.0μg/g,P<0.01);降低血清IL-6,TNF-α水平(P2-PTC组2.8±1.0μg/LvsFEC组4.6±2.0μg/L,P<0.05).结论:伴大豆球蛋白胃蛋白酶水解肽能提高动物机体免疫机能,抵御外源性大肠杆菌的侵袭感染,预防胃肠道疾病的发生.