羧胺三唑增强小鼠脾脏淋巴细胞促进结肠癌细胞系MC38和C26凋亡

目的探讨羧胺三唑(CAI)直接或通过小鼠脾脏淋巴细胞间接对小鼠结肠癌细胞系(MC38和C26)存活和凋亡的影响。方法体外培养结肠癌细胞系MC38和C26细胞,分离小鼠脾脏淋巴细胞,MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养,不同浓度CAI处理细胞。CCK-8法检测细胞存活,流式细胞测量术检测细胞凋亡以及小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例。结果不同浓度CAI处理MC38和C26细胞后,活细胞数目减少(P<0.05、P<0.01和P<0.001),凋亡率升高(P<0.01和P<0.001);MC38和C26细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共培养48 h后,MC38和C26细胞数目减少(P<0.001),凋亡率升高(P<0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞共培养条件下的MC38和C26细胞48 h,与单独小鼠脾脏淋巴细胞处理相比,MC38和C26细胞数目进一步减少(P<0.001),凋亡率进一步升高(P<0.05和P<0.001);不同浓度CAI处理小鼠脾脏淋巴细胞48 h后,小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例显著升高(P<0.05和P<0.01)。结论CAI抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡,并可能通过升高小鼠脾脏淋巴细胞中CD4^(+)CD3^(+)T细胞和CD8^(+)CD3^(+)T细胞的比例增强小鼠脾脏淋巴细胞抑制MC38和C26细胞存活、促进细胞凋亡。

两种胃癌细胞株与小鼠原代脾脏淋巴细胞共培养对Th17细胞分化的影响

目的观察不同胃癌细胞株与CD4^(+)T细胞共培养后Th17细胞分化的改变情况。方法将分离并鉴定后的小鼠原代脾脏淋巴细胞分别与人胃癌SGC-7901细胞株、人胃癌BGC-823细胞株共培养,分为SGC-7901共培养组、BGC-823共培养组和对照组。以细胞内细胞因子染色FCM测定Th17细胞,计算CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数量百分比。结果SGC-7901共培养组、BGC-823共培养组、对照组的CD4^(+)IL-17A^(+)细胞数量分别为(3.97±0.27)%、(5.17±0.14)%、(1.96±0.29)%,与SGC-7901共培养组比较,BGC-823共培养组Th17细胞数量均显著增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在胃癌环境下,CD4^(+)T细胞向Th17细胞分化增多。

人外周血淋巴细胞增殖试验的优化及其应用

目的:优化人外周血淋巴细胞增殖试验条件;考察动物源材料的Gal抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;并比较人外周血淋巴细胞与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验对动物源材料的敏感性差异。方法:从细胞接种量,阳性对照(刀豆球蛋白A,Con A)的工作浓度与细胞培养时间,优化人外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件;利用优化的试验方法,通过人外周血淋巴细胞与动物源性材料的(牛跟腱或由牛跟腱纯化的胶原蛋白海绵)匀浆液或浸提液共培养,考察材料的不同前处理方式对人外周血淋巴细胞增殖的影响;参考标准YY/T 1561-2017,检测材料匀浆液或浸提液的Gal抗原含量,分析其抗原含量与淋巴细胞增殖效应的相关性;同时参考标准YY/T 1465.1-2016,考察材料匀浆液与浸提液对小鼠脾脏淋巴细胞增殖效应的影响,并对比分析对动物源材料的敏感性差异。结果:人外周血淋巴细胞增殖试验最佳反应条件经优化确定为:细胞接种量为1×10^5,阳性对照(Con A)的终浓度选择5~10μg·mL^-1,培养时间为4 d。人外周血淋巴细胞与胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)共培养后,样品组与正常细胞对照组相比不存在明显差异;与牛跟腱匀浆液共培养后,与正常细胞对照组相比不存在显著性差异。胶原蛋白海绵(匀浆组与浸提液组)对小鼠脾脏淋巴细胞均无明显增殖效应。牛跟腱匀浆液在5倍稀释与50倍稀释后,对小鼠脾脏淋巴细胞均有明显增殖效应(增殖率为143.20%和128.71%)。牛跟腱匀浆液的Gal抗原含量为(3.98±1.06)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵匀浆液为(2.24±0.60)×10^13个·mg^-1、胶原蛋白海绵浸提液为(1.89±0.64)×10^13个·mg^-1。结论:淋巴细胞增殖效应与动物源性生物材料中残留Gal抗原含量的正向相关性不强。与小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验相比,采用人外周血淋巴细胞增殖试验评价含Gal抗原的动物源性生物材料细胞免疫的敏感性未见优势。淋巴细胞增殖试验是评价动物源生物材料细胞免疫的可用方法之一。