TcpC在尿路致病性大肠埃希菌引发小鼠膀胱炎中的作用及致病机制研究

目的探究TcpC对尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)引发小鼠膀胱炎的作用,并初步了解其致病机制。方法从尿道向C57BL/6小鼠膀胱滴注10^(9) CFU分泌TcpC的UPEC CFT073^(wt)或敲除tcpc基因的CFT073^(Δtcpc),构建膀胱炎模型小鼠。3 d后处死小鼠取膀胱观察大体病理变化。膀胱4%多聚甲醛固定24 h后,包埋、切片、HE染色观察膀胱组织病理改变情况,免疫组化法对组织中TcpC进行定位。采集上述UPEC菌株感染的小鼠尿液,十倍稀释法计数尿液中细菌载量,PCR检测CFT073^(wt)感染组膀胱组织和尿液细菌基因组DNA中是否存在tcpc基因。实时荧光定量PCR和Western blot检测CFT073^(wt)菌株感染巨噬细胞后胞内TcpC mRNA和蛋白质水平。Western blot和ELISA分别检测上述UPEC菌株对巨噬细胞NF-κB活化和促炎因子表达水平的影响,激光共聚焦显微镜和荧光显微镜分别观察上述UPEC菌株感染巨噬细胞后细菌和细胞活力。结果与CFT073^(Δtcpc)组相比,CFT073^(wt)组小鼠膀胱明显肿大,膀胱组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073^(wt)组小鼠尿液中的细菌数量显著多于CFT073^(Δtcpc)组;PCR结果显示,膀胱组织和尿液中的细菌均为CFT073^(wt)。在CFT073^(wt)菌株感染巨噬细胞过程中,胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073^(wt)促进巨噬细胞NF-κB信号通路IκBα的蛋白质水平并抑制p65的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073^(wt)在巨噬细胞内的存活和侵袭。结论TcpC在CFT073^(wt)感染及引发小鼠膀胱炎过程中表达水平显著升高,并通过抑制巨噬细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生提高CFT073^(wt)在巨噬细胞内的存活率,与UPEC致病及逃逸巨噬细胞固有免疫密切相关。