牛源肠聚集性大肠杆菌的分离鉴定

为了探究犊牛腹泻死亡的原因,本试验采集死亡犊牛胸腔液、肝脏组织、肠组织和粪便样品共4份,进行细菌分离培养、生化鉴定、16S rDNA测序。以1株肝脏样品分离的纯化菌为供试菌株进行小鼠致病性试验、毒力基因检测和药物敏感性试验,并用MEGA 6.0软件构建系统进化树。结果显示,从4份样品中分离的4株病原菌与大肠杆菌生长形态及生化特征一致,分离率为100%;16S rDNA序列与GenBank中大肠杆菌同源性为98%;肝脏样品分离菌命名为HCDE/17-1,其可在12 h内致小鼠死亡,用改良寇氏法计算其半数致死量(LD_(50))为1.38×10^(7) CFU/mL,毒力基因检测结果显示,astA、aggR基因呈阳性,表明该菌属致泻性大肠杆菌亚群肠聚集性大肠杆菌;药敏试验结果显示,分离株HCDE/17-1对庆大霉素、头孢唑林、苯唑西林、多西环素、复方新诺明、恩诺沙星、克林霉素等12种抗菌药高度耐药,对氯霉素、红霉素敏感;系统进化树结果显示,分离株HCDE/17-1与GenBank中10个大肠杆菌代表株形成2个大的分支,与菌株O112ab∶H8(登录号:CP062910.1)在同一个小的分支上,亲缘关系较近。结果表明,分离株HCDE/17-1为一种毒力较强的肠聚集性大肠杆菌,对抗菌药呈多重耐药,该菌可能是引起犊牛腹泻的主要原因,日常需加强监测,防止疫情流行。

猪源污蝇杆菌GZPA426株的分离鉴定及生物学特性分析

污蝇杆菌(Wohlfahrtiimonas chitiniclastica)是一类新出现的罕见人畜共患致病菌,可侵袭动物机体并引起化脓性病症。2018年贵州某猪场送检了2只患病仔猪,呈典型的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)混合感染病症。无菌采集病猪肺脏组织,进行细菌培养,通过16S rRNA测序检测到污蝇杆菌。为了解该病原特性,对该菌进行分离纯化培养。从培养特性、革兰染色、生化试验、16S rRNA序列分析、电镜观察等方面对该菌进行系统鉴定;采用药敏试验测定其药物敏感性;通过人工感染小鼠确定其致病性。结果显示,该分离菌株的16S rRNA基因与污蝇杆菌参考株核苷酸相似性介于95.9%~97.6%,与参考株KBL006(NR_133893.1)遗传距离最近;分离株在血平板、LB固体培养基等的生长良好,在高盐培养基上不生长;生化鉴定结果显示分离菌株的生化特性与污蝇杆菌符合;扫描电镜观察显示该菌菌体长宽为1.30μm×0.53μm;药敏试验结果显示分离株对头孢菌素类、多黏菌素B及部分青霉素、氨基糖苷类药物较为敏感,对四环素类、大环内酯类及喹诺酮类等药物耐药;小鼠致病性试验结果显示分离菌株对小鼠具有致死能力。本试验成功分离到1株猪源污蝇杆菌并对其病原生物学特性进行了初步研究,结果为污蝇杆菌病的病原检测和防控治疗提供了重要参考依据。

一株牛源约翰逊不动杆菌的分离鉴定

目的分离并鉴定1株致2018年7月四川省某肉牛场肉牛患呼吸道疾病并死亡的约翰逊不动杆菌。方法采集发病牛鼻腔拭子并从中分离得到一株优势菌株,对其进行形态学鉴定、生化鉴定、测定16s rRNA基因序列,用MEGA-X软件进行同源性分析、构建进化树,并进行药敏检测。结果分离菌为革兰染色阴性短杆菌,生化特性与约翰逊不动杆菌相符合,16S rRNA序列与GenBank中约翰逊不动杆菌株的同源性均达99%,因此将分离菌确定为约翰逊不动杆菌,并命名为ZZCNC-7B。8只SPF级昆明小鼠用1.4×10^(8) CFU/ml的ZZCNC-7B菌液腹腔注射(0.2 ml/只)后出现精神沉郁、腹式呼吸、眼部出现黏性分泌物、眼睑粘连、畏寒抱团等症状,有6只小鼠在16~36 h内死亡,另2只小鼠出现相同的症状但仍存活。剖检死亡小鼠,大体观察肺、肾充血肿大;肝、脾淤血肿大,肠道积气积液;组织学观察肺充血、出血,肝淤血,脾淤血、出血,肾小管坏死等病变。药敏试验显示,分离菌对四环素类药物四环素和磺胺类药物磺胺异恶唑耐药,对氨苄西林、亚胺培南、左氧氟沙星以及庆大霉素等药物均敏感。结论病牛分离菌为约翰逊不动杆菌,对小鼠具有较强的致病性和致死性,可引起肉牛呼吸道感染,甚至导致肉牛死亡,应引起高度重视。