小鼠谷胱甘肽S转移酶K1启动子荧光素酶报告基因的构建及功能鉴定

目的:构建小鼠谷胱甘肽S转移酶K1(mGSTK1)启动子荧光素酶报告基因质粒,并分析其活性。方法:根据GeneBank中mGSTK1基因序列设计引物,应用PCR技术扩增mGSTK1启动子片段,插入pGL3-basic载体,获得mGSTK1启动子报告基因质粒pGL3-mGSTK1-2046。再以pGL3-mGSTK1-2046为模板,进一步构建了2个5’端部分缺失的报告基因质粒:pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76。将构建的报告基因质粒瞬时转染不同的细胞株3T3-L1和人胚肾(HEK)293,48 h后检测荧光素酶的活性。结果:所构建的质粒经酶切、测序鉴定正确。pGL3-mGSTK1-2046在3T3-L1和HEK293中均有不同程度的转录活性。将pGL3-mGSTK1-2046、pGL3-mGSTK1-936和pGL3-mGSTK1-76转染HEK293细胞,结果显示pGL3-mGSTK1-936转录活性最高,而pGL3-mGSTK1-76转录活性显著降低。结论:成功构建mGSTK1启动子荧光素酶报告基因质粒;翻译起始点上游的-971～-111 bp片段是mGSTK1启动子的重要区域。为深入了解mGSTK1启动子的调控机制以及今后对代谢性疾病的治疗提供一定的实验基础。

孕酮调节谷胱甘肽S-转移酶Omega-1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中的表达

目的研究谷胱甘肽S-转移酶Omega-1（Gsto 1）在小鼠胚胎着床过程中的表达和孕酮的调节。方法105只CD1小鼠,分为正常妊娠模型和类固醇激素处理模型。正常妊娠模型中,收集妊娠第1~第5天子宫,采用Real-time PCR、原位杂交和Western blotting 3种方法检测Gsto1的表达变化;类固醇激素处理模型均采用卵巢切除2周后的小鼠,又分为雌孕激素处理组、孕酮处理不同时间组和孕酮受体拮抗剂Ru486处理组,所有组中的对照均用芝麻油处理。雌孕激素处理组中,收集芝麻油、雌激素、孕酮、雌激素加孕酮分别处理12h后的子宫;孕酮处理不同时间组中,收集芝麻油和孕酮分别处理1、3、12、24 h后的子宫;Ru486处理组中,收集芝麻油、Ru486、孕酮、Ru486加孕酮分别处理12 h后的子宫。类固醇激素处理模型使用Real-time PCR和Western blotting两种方法检测Gsto1的表达变化。结果 Gsto1主要在妊娠第1~4天的子宫腔上皮及腺上皮中表达,其中,妊娠第1~3天表达量较高,第4天表达量较低,第5天着床点和非着床点均不表达。孕酮诱导Gsto1的表达,雌激素不能诱导Gsto1的表达,并能抑制孕酮对Gsto1的诱导。Ru486降低孕酮对Gsto1的诱导,孕酮处理1、3、12 h均促进Gsto1的表达,但作用24 h后,抑制Gsto1的表达。结论 Gsto1在小鼠妊娠早期子宫腔上皮及腺上皮中表达,雌激素能够拮抗孕酮对Gsto1的诱导,孕酮可以通过孕酮受体调节Gsto1的表达,并且具有短时调节作用。

谷胱甘肽S转移酶M1、T1和P1基因多态与肝癌易感性研究

目的 探讨谷胱甘肽S转移酶M 1、T1和P1基因多态与肝癌的关系。方法 应用PCR技术对 84例肝癌患者和 14 4例健康对照的谷胱甘肽S转移酶M 1、T1和P1基因多态进行检测。结果 病例组GSTM 1和GSTT1空白基因型频率分别为 6 6 6 7%和 4 0 4 8% ,对照组则分别为 4 7 92 %和 2 5 0 0 % ,两组差别均有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;病例组GST13种基因型频率分别为 6 4 2 9% ,33 33%和 2 38% ,对照组分别为 6 1 80 % ,34 0 3%和 4 17% ,两组差别无统计学意义。平衡性别因素后其比值比分别为 2 2 0 ,1 93和 0 94。同时携带GSTM 1空白基因型和GSTT1空白基因型的个体患肝癌的危险性显著增加。结论 GSTM

谷胱甘肽S转移酶P1 Ile105Val多态性与肺癌易感性关系的Meta分析

目的用Meta分析的方法综合评价谷胱甘肽S转移酶P1基因(GSTP1)105氨基酸位点Ile/Val多态性与肺癌易感性的关系。方法检索公开发表的关于谷胱甘肽S转移酶P1基因105氨基酸位点Ile/Val多态性与肺癌易感性关系的文献,把研究人群分为高加索人群及东亚人群,以病例组及对照组比值比(OR值)为效应指标,应用Meta分析软件RevMan 4.2分别计算两种人群及其亚组的合并OR值及95%CI,进行敏感度分析和发表偏倚评估,给出Meta分析森林图和漏斗图。结果共纳入文献24篇,其中高加索人群15篇,纳入病例6 601例,对照6 821例,东亚人群9篇,纳入病例1 822例,对照2 017例,分别计算两组人群及其各亚组的GG+AG/AA合并OR值,两种人群总体OR值及各亚组OR值均未提示有相关性,敏感度分析表明结果稳定,高加索人群研究有发表偏倚,东亚人群研究未见发表偏倚。结论谷胱甘肽S转移酶P1基因(GSTP1)105氨基酸位点Ile/Val多态性与高加索人群和东亚人群肺癌易感性均不具有相关性,但是没有根据吸烟量进行亚组分析。

谷胱甘S肽转移酶P1多态性与慢性阻塞性肺疾病易感性的研究

目的 :探讨谷胱甘S肽转移酶P1(GSTP1)基因外显子 10 5位多态性与慢性阻塞性肺疾病 (COPD)易感性的关系。方法 :应用PCR RFLP技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色 ,对 10 4例COPD患者和 44例非COPD人群GSTP1基因外显子 10 5位多态位点进行检测 ,并根据性别、年龄及吸烟史对其易感性进行分析。结果 :( 1)COPD组与对照组GSTP1基因A/A基因型频率分别为 0 62 5、0 5 2 2 ,二者未发现差异有显著性 (P >0 0 5 ) ,两组A/G基因型频率、G/G基因型频率也未发现差异有显著性 (P >0 0 5 )。COPD组与对照组GSTP1基因 10 5位A型等位基因频率分别为 0 78、0 73 ,未发现差异有显著性 (P >0 0 5 )。 ( 2 )根据性别、不同年龄组、不同吸烟史分析 ,COPD组与对照组之间GSTP1等位基因频率的差异均无显著性 (P值均 >0 0 5 )。结论 :GSTP1基因外显子 10

谷胱甘肽S 转移酶M1和T1基因多态性与鼻咽癌遗传易感性的Meta分析

鼻咽癌（NPC）是恶性程度较高的肿瘤，EB病毒与NPC的发生密切相关，且受遗传、环境、饮食等因素影响［1，2］，谷胱甘肽-S-转移酶M1（GSTM 1）、谷胱甘肽-S-转移酶T1（GSTT 1）、细胞色素P450、HLA I型和II型的突变可以增加NPC的发病风险［3］。GSTT 1和GSTM 1为谷胱甘肽硫转移酶（GST）超基因家族中的成员，参与机体毒物代谢和解毒，属于II相代谢酶，基因多态性表现为GST酶活性的升高或降低进而影响机体对毒物和致癌物易感性的改变［4，5］。目前探讨GSTT 1、GSTM 1基因多态性与NPC的文献不少，但因样本量小、地区差异、肿瘤部位、遗传、饮食和环境等因素的交互作用导致研究结果存有争议。本文对已发表的文献进行Meta分析，以寻找NPC特异性的筛查、诊断指标。

谷胱甘肽S转移酶P1基因多态性与慢性阻塞性肺疾病关系的研究

目的:了解湖北地区健康汉族人群和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)基因多态性,探讨汉族人GSTP1基因多态性与COPD的关系。方法:用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)检测68例健康汉族人和50例COPD患者GSTP1基因型。结果:健康人群和COPD人群中有3种基因型,但以Ile105纯合子基因型为主,两组人群的基因型和基因频率比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:GSTP1基因多态性可能与COPD的发生无相关性。

谷胱甘肽S转移酶T1基因多态性与口腔癌易感性的meta分析

目的:通过既往相关研究,综合评价谷胱甘肽S转移酶T1(glutathione S-transferase class Theta-1,GSTT1)基因多态性与口腔癌易感性间的关联。方法:根据系统评价的原理和规范,检索PubMed数据库,纳入GSTT1基因与口腔癌的病例对照研究。根据种族,采用分层Meta分析评估GSTT1基因多态性与口腔癌的关联性,同时评估发表偏倚。结果:Meta分析显示,GSTT1基因多态性与口腔癌总的效应为OR=1.17(95%CI:0.87～1.58)。进一步亚组分析显示,亚洲人种OR=0.99(95%CI:0.71～1.36);高加索人种OR=1.07(95%CI:0.69～1.64);混合人种OR=1.89(95%CI:0.76～4.67)。结论:尚不能认为GSTT1基因多态性能影响口腔癌的易感性,这一结论尚需要大规模、多种族的流行病学或功能学研究验证。

谷胱甘肽S转移酶M1基因多态性与直肠癌的相关性的初步探讨

目的探讨谷胱甘肽S转移酶M1基因多态性与直肠癌的关系。方法以聚合酶链反应方法,分析了56个直肠癌病人和性别、年龄配对的143个正常对照的谷胱甘肽S转移酶M1基因型及其对直肠癌的相关性。结果GSTM1基因缺失频率在病例组和对照组之间无有显著差异。结论GSTM1基因缺失可能不是结直肠癌发生的易感基因型。

76例重庆地区汉族正常人谷胱甘肽S转移酶P1基因多态性研究

目的 探讨重庆地区正常人谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1) 5号外显子 10 5位氨基酸基因型频率分布情况。方法 用聚合酶链反应 (PCR)技术和限制性片段长度多态性 (RFLP)技术检测 76例重庆地区汉族正常人GSTP15号外显子 10 5位氨基酸基因型和等位基因分布。结果 重庆地区汉族正常人GSTP15号外显子 10 5位点氨基酸基因型分布以野生型纯合子Ile(异亮氨酸 ) 10 5Ile基因型为主 ,占 93.4 2 % ,而杂合子Ile 10 5Val(颉氨酸 )和突变型纯合子Val 10 5Val基因型均较少 ,仅占3.95 %和 2 .6 3%。GSTP15号外显子 10 5位点氨基酸等位基因分布以Ile 10 5等位基因为主 (95 .39% ) ,而Val 10 5等位基因极少 (4 .6 % )。结论 中国重庆地区汉族正常人GSTP15号外显子 10 5位点氨基酸基因型频率和基因频率分布与国外其它民族分布情况有显著性差异 ,与国内其它地区的报道结果也有差异 ,提示在中国汉族人群内部其不同的地区GSTP1基因多态性可能不一致。

谷胱甘肽硫转移酶K1研究进展

谷胱甘肽硫转移酶K1(glutathione S-transferase kappa 1,GSTK1)是一个参与脂联素分泌和多聚化的关键蛋白,且在线虫中已经证实,GSTK1与能量产生和脂质代谢有关。同时GSTK1表达水平与肥胖呈负相关,并能缓解内质网应激诱导的脂联素水平下降,而且人GSTK1启动子的多态性与胰岛素分泌和脂肪沉积有关,因此,GSTK1可能成为一个治疗胰岛素抵抗及其相关的代谢疾病潜在的药物新靶点。

癫痫耐药患者血清和脑脊液中P-糖蛋白、转化生长因子-β1及谷胱甘肽S转移酶的表达

目的观察难治性癫痫患者血清和脑脊液中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)β1及谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase,GST)的表达。方法选取2018年2月~2020年11月期间解放军联勤保障部队第983医院规范治疗2年以上的癫痫耐药患者79例作为耐药组,同期接受抗癫痫治疗控制良好的患者60例作为敏感组。比较敏感组和耐药组脑脊液、血清中P-gp、GST、TGF-β1水平差异,分别计算同组患者脑脊液和血清中P-gp、GST、TGF-β1的相关性。结果耐药组脑脊液中P-gp、GST、TGF-β1水平均高于敏感组,两组间差异均有统计学意义(P<0.05)。耐药组血清中P-gp、GST水平高于敏感组,两组间差异均有统计学意义(P<0.05);TGF-β1水平差异无统计学意义(P>0.05)。耐药组和敏感组的血清和脑脊液中P-gp和GST表达正相关,耐药组P-gp的相关系数为0.873,GST相关系数为0.891。耐药组和敏感组脑脊液和血清TGF-β1表达无相关性。结论癫痫耐药患者脑脊液中P-gp、GST、TGF-β1水平升高,外周血P-gp、GST水平升高,监测外周血的P-gp、GST变化可能为癫痫药物治疗方案制定提供参考。

GSTP1通过调控STAT3信号通路促进乳腺癌细胞增殖与阿霉素耐药

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法 Western blotting检测野生型乳腺癌细胞MCF-7和阿霉素耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR中的GSTP1表达量,通过在MCF-7细胞中转染Flag-GSTP1质粒过表达GSTP1,在MCF-7/ADR细胞中转染GSTP1敲低慢病毒(shGSTP1)干扰GSTP1表达;平板克隆形成实验、CCK-8法和流式细胞术检测转染后乳腺癌细胞的增殖能力、阿霉素耐药性及凋亡水平的变化。Western blotting检测GSTP1表达水平的变化对STAT3通路激活的影响。结果 GSTP1在MCF-7细胞中表达量极低,且显著低于MCF-7/ADR细胞系。GSTP1过表达的MCF-7/ADR细胞克隆形成数量显著多于野生型MCF-7细胞(P<0.05)。过表达GSTP1显著提升了MCF-7细胞的增殖能力,而在MCF-7/ADR细胞系干扰GSTP1表达水平后显著抑制了细胞增殖能力(P<0.05)。CCK-8结果显示,在0.1、1、10、50μmol/ml不同浓度的阿霉素处理下,GSTP1表达水平与MCF-7细胞对阿霉素的耐药性呈正相关(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,GSTP1过表达组(Flag-GSTP1)和对照组(Flag)的凋亡率分别为(11.41±1.16)%和(21.1±1.72)%,GSTP1过表达显著抑制了阿霉素诱导的细胞凋亡(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,GSTP1的过表达激活了STAT3信号通路,同时在MCF-7/ADR细胞系中抑制STAT3显著降低了GSTP1的表达水平(P<0.05)。结论 GSTP1通过上调STAT3表达调节乳腺癌细胞MCF-7的增殖能力和对阿霉素的耐药性。

利用谷胱甘肽S转移酶表达标签捕获系统性红斑狼疮相关基因IFIT1的相互作用蛋白质

目的 试图运用蛋白组学的策略研究系统性红斑狼疮 (SLE)相关的干扰素诱导蛋白IFIT1的蛋白质相互作用 ,以揭示其可能的功能。方法 应用荧光实时定量PCR进一步验证SLE患者外周血白细胞转录水平IFIT1基因的表达 ;应用分子克隆技术在大肠杆菌克隆并表达谷胱甘肽S转移酶 (GST) IFIT1融合蛋白 ;利用GST表达标签 ,以GST IFIT1为饵蛋白捕获SLE外周血白细胞蛋白裂解物中与IFIT1存在相互作用的蛋白质 ,MALDI TOF MS肽指纹图谱进行蛋白质鉴定。结果 荧光实时定量PCR证实IFIT1基因确在SLE(4 0例 )较正常对照 (2 9例 )表达上调 (P <0 0 0 1)。克隆表达了GST IFIT1融合蛋白 ,并捕获到一个与IFIT1存在相互作用的蛋白质 ,经肽指纹图谱初步鉴定为Rho/Rac鸟嘌呤核苷交换因子。结论 IFIT1是SLE新的相关基因。运用蛋白组学的策略研究IFIT1蛋白质水平的相互作用显示 ,IFIT1与Rho/Rac鸟嘌呤核苷交换因子存在相互作用 ,IFIT1可能通过该途径影响Rho蛋白的活化 ,参与SLE的发病。

DNMT1基因沉默对前列腺癌细胞增殖、凋亡及GSTP1、SHOX2、DAPK甲基化状态的影响

目的探讨siRNA技术沉默DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因表达对前列腺癌细胞(LNCap)增殖、凋亡的影响,初步分析其对谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、矮小同源盒基因2(SHOX2)、凋亡相关蛋白激酶(DAPK)甲基化状态的影响。方法体外培养人前列腺癌细胞LNCap、正常前列腺上皮细胞RWPE-1,采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)及蛋白印迹(WB)检测细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平。实验分为3组:空白对照组(未经任何处理LNCap细胞); si-NC组(转染DNMT1阴性对照质粒的LNCap细胞); si-SH2B1组(转染si-DNMT1的LNCap细胞)。采用CCK-8法检测三组细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡水平。采用甲基化特异性PCR (MSP)检测GSTP1、SHOX2、DAPK基因甲基化状态; qRT-PCR与WB法分别检测各组LNCap细胞DNMT1、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达情况。结果与正常组细胞相比,前列腺癌组细胞中DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P <0. 05);si-DNMT1组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均显著低于空白对照组、si-NC组(P <0. 05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组LNCap细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、GSTP1、SHOX2、DAPK mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0. 05);与空白对照组、si-NC组相比,si-DNMT1组GSTP1、DAPK、SHOX2基因甲基化水平均显著降低(P <0. 05)。结论沉默DNMT1基因后可明显抑制LNCap细胞增殖并促使其凋亡,其可能通过逆转GSTP1、DAPK、SHOX2甲基化状态并上调其表达而发挥作用。

温石棉对A549细胞细胞色素P4501 A1和谷胱甘肽S转移酶活性的影响

目的 探讨温石棉对体外培养细胞中外源性化合物代谢酶活性的影响。方法 采用不同剂量的UICC温石棉 (UC)和国产茫崖温石棉 (MC)分别作用于A5 4 9细胞 ,测定A5 4 9细胞中细胞色素P4 5 0 1A1(CYP1A1)和谷胱甘肽S转移酶 (GST)活性 ,并用苯并 (a)芘对酶活性进行诱导 ,再测定温石棉对 2种酶诱导活性的影响。结果 UC与A5 4 9细胞作用 2 4h ,乙氧基异酚恶唑 O 去乙基酶 (EROD)活性随剂量增加呈缓慢递增趋势 ,2 0 0mg/LUC可使EROD活性升高 4 0 % ,但 2 0 0mg/LUC作用 4 8h则使其活性下降 32 % ,提示UC对A5 4 9细胞EROD活性的影响呈现低剂量短时间诱导 ,而高剂量长时间抑制的趋势。MC对EROD活性的影响呈现多向性 ,无论作用 2 4h还是 4 8h ,2 5mg/L的MC诱导作用最强 (分别为对照组的 1 86和 1 2 8倍 ) ,但随MC剂量增大和作用时间延长 ,EROD活性也随之下降 ,最低仅为对照组的 35 %。UC作用对GST的影响不明显 ,最高仅使GST活性升高 2 0 %。MC在 2 5mg/L时对GST的诱导最强 ,为对照组的 1 4倍 ,但随着剂量的增加 ,对GST活性的作用由诱导转为抑制 ,2 0 0mg/L时GST活性下降了 18 7%。先用温石棉与A5 4 9细胞作用 2 4h ,再加入苯并 (a)芘对酶活性进行诱导 ,发现无论是UC还是MC ,均未对苯并 (a)

黄曲霉素B1诱发大鼠肝癌前期GST—P和r—GT酶动态变化

利用黄曲霉素B1(AFLATOXINB1,AFB1)诱发大鼠肝癌形成体内短期实验模型:发现胎盘型谷胱甘钛S-转移酶(GST—P)在诱癌阶段(实验第4周)开始异常表达,其阳性灶面积随时间呈上升趋势;而r-谷氨酸转肽酶(r—GT)则在促癌阶段(实验第6周)才开始异常表达,其阳性灶面积随时间呈下降趋势:结果表明:GST—P是一种出现较早,敏感而又稳定的肝脏肿瘤标记物。

外周血谷胱甘肽S转移酶M1和T1基因多态性与乙型肝炎肝硬化易感性及肝功能的关联

目的 探讨外周血谷胱甘肽S转移酶M1(GSTM1)和T1基因(GSTT1)与乙型肝炎肝硬化易感性及肝功能的关系。方法 选取2018年3月-2021年3月医院收治的乙型肝炎肝硬化患者110例(研究组)、乙型肝炎患者45例(对照组)为研究对象,检测患者外周血GSTM1和GSTT1基因分型,Child Pugh分级标准评估患者肝功能,并检测血清肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBiL)、谷草转氨酶(AST)],比较两组外周血GSTM1、GSTT1基因型分布情况,分析不同临床特征乙型肝炎肝硬化患者GSTM1及GSTT1基因暴露水平,明确GSTM1和GSTT1与乙型肝炎肝硬化易感性及肝功能的关系。结果 研究组肝功能指标、肝功能分级较对照组高(P<0.05)。研究组GSTM1空白基因占比、GSTT1非空白基因占比高于对照组(P<0.05)。乙型肝炎肝硬化患者Child Pugh分级为C级的GSTM1空白基因分布频率较GSTM1非空白基因高,GSTT1非空白基因分布频率较GSTT1空白基因高(P<0.05)。多因素非条件Logistic回归结果显示GSTM1空白基因、GSTT1非空白基因是乙型肝炎肝硬化及肝功能的影响因素(P<0.01)。结论 具备GSTM1空白基因、GSTT1非空白基因的个体,乙型肝炎肝硬化风险更高,且易出现肝功能损害,两者对乙型肝炎肝硬化的早期诊治有指导意义。

MDR-1与GST-π在柔红霉素诱导Kasumi-1细胞耐药中的作用

目的探讨柔红霉素诱导M2型急性髓系白血病(AML-M2)细胞株Kasumi-1耐药性与多药耐药基因-1(MDR-1)和谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)表达的相关性。方法长期间歇性小剂量递增法诱导Kasumi-1对柔红霉素耐药,四氮唑蓝(MTT)法检测细胞耐药程度;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测MDR-1和GST-π基因表达变化情况;Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)和GST-π蛋白表达的变化情况。结果诱导后Kasumi-1对柔红霉素耐药倍数为(3.9±0.6)倍,耐药细胞与非耐药细胞MDR-1表达无明显差别,耐药细胞GST-π表达明显高于非耐药细胞(P<0.01)。Western blot检测结果与RT-RCR一致,两种细胞P-gp表达情况无明显差异,耐药株GST-π蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论 AML-M2细胞株Kasumi-1对柔红霉素耐药与MDR-1表达无关,与GST-π表达有关,抑制GST-π在Kasumi-1细胞中的表达可能成为逆转柔红霉素耐药的靶点。