豫医无毛小鼠分离近交系的繁殖学特征及HLC小鼠近交系的建立

对豫医无毛小鼠和有毛小鼠生殖器官的大体形态、组织学结构及其繁殖能力进行了比较研究.结果表明,无毛小鼠生殖器官的位置、形态、组织学结构及发情周期与有毛小鼠无明显差异;无毛雄鼠明显具有生育能力,但其生育期短;无毛雌鼠有生育能力,但繁殖能力下降,受孕率较低,乳腺功能受损,母性差,不能很好地护理幼仔,幼鼠很难成活,一般1～3 d内死亡.杂合子有毛小鼠的生育能力正常.在昆明小鼠繁殖群基础上,采用全同胞兄妹交配方式培育建立了HLC小鼠近交系,应用生化标记检测、皮肤移植试验和毛色基因测试法对育成的HLC小鼠进行遗传监测,证实其基因位点高度纯合;对其基本生物学特性进行研究,结果表明其为具有新特性的近交系小鼠,现已近交繁育30代.

清洁级BALB/c近交系小鼠常规生物学特性研究

目的建立BALB/c近交系小鼠常规生物学特性指标。方法采用日本光电MEK-5126血球计数仪、荷兰半自动生化仪、流式细胞仪及常规的实验方法检测。结果血液细胞计数、血液生化指标、体重、脏器重量、脏器指数等常规生物学指标结果比较均一;清洁级BALB/c近交系小鼠的血液细胞计数和血液生化指标同普通级BALB/c近交系小鼠比较差异显著;普通级的CD4+/CD8+指标雌雄之间及普通级与清洁级的CD4+/CD8+差异显著。结论清洁级BALB/c近交系小鼠具有比较稳定的生物学特性。

四氯化碳诱导近交系C57BL/6小鼠建立肝纤维化模型

目的比较不同剂量四氯化碳诱导近交系C57BL/6小鼠肝纤维化模型的效果,以建立稳定的肝纤维化模型。方法选择5周龄的C57BL/6近交系小鼠,分别腹腔注射给予高、中、低剂量的四氯化碳诱导肝纤维化,实验结束后取血及肝脏组织,检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平及肝脏病理变化。结果近交系C57BL/6小鼠药物诱导后,各剂量组动物均能存活到8周,高剂量组存活率仅为20%远低于中、低组;血清转氨酶含量升高程度、肝组织病理改变存在剂量时间效应关系。病理分析表明,各剂量组均可见肝细胞变性/坏死、中央静脉周围/汇管区混合细胞浸润及肝脏纤维化。结论10%四氯化碳给药8周后能诱导近交系C57BL/6小鼠形成较稳定的肝纤维小鼠模型,为后续肝纤维化机制研究及药物筛选工作奠定了基础。

不同小鼠品系对天花粉蛋白诱导免疫抑制易感性的差异

为了解不同品系小鼠对天花粉蛋白 (Tk )诱导的免疫抑制应答能力的差异 ,应用OVA特异性T细胞体外增殖抑制试验 ,发现 8种近交系小鼠对Tk相关免疫抑制的敏感性不同。根据抑制幅度 ,C5 7BL/ 6 (H 2 b)被判为高易感品系 (HS ,highsusceptible ) ,同属H 2 k 的C3H/He和AKR为低易感品系 (LS ,lowsusceptible)。Tk浓度为 5 0ng/ml时的T细胞增值抑制百分率对HS为 4 7 8%± 3 4 % ;对两个LS分别为 15 9%± 3 0 %和 18 9%± 3 5 % ,两组间差异显著 (P <0 0 0 1)。这一差异可持续出现在 5 0～ 2 0 0ng/ml的Tk剂量范围内。其余 5个品系 (BALB/c、 6 15、T739、A、DBA/ 2 )的抑制幅度介于HS和LS之间。这一结果有助于研究相应免疫抑制的基因调控。

天花粉蛋白对不同小鼠品系T细胞亚群分化的影响

为进一步探讨不同品系小鼠对天花粉蛋白(Tk)免疫抑制敏感性不同的机制,选择Tk高敏感品系(C57BL/6)和低敏感品系(C3H/He)小鼠,建立OVA特异性体外增殖系统,应用流式细胞术胞内细胞因子染色技术分析Th和Tc细胞亚群,real-time PCR检测细胞因子及相关转录因子的mRNA水平。发现Tk作用下,高敏感品系小鼠C57BL/6 IL-4阳性T细胞明显增多,表达IFN-γ阳性T细胞则显著减少。而低敏感品系C3H/He相关变化不明显。T细胞分化相关细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ及转录因子T-bet、gata-3的基因表达水平也呈现类似的格局。提示Tk发挥免疫抑制作用可能与其诱导的以Th2/Tc2为主的T细胞亚群有关,且这种诱导特定细胞亚群的作用在小鼠中和H-2b基因型相关。

天花粉蛋白诱导小鼠Th2/Tc2亚群分化与MHC背景相关

为阐明天花粉蛋白 (Tk )诱导免疫抑制和基因调控的机制 ,应用ELISA方法动态测定小鼠OVA特异性T淋巴细胞培养上清液中T细胞亚群相关细胞因子的含量 ,观察Tk对高、低易感品系小鼠T细胞分泌细胞因子格局的影响。发现Tk作用下 ,高易感品系C5 7BL/ 6 (H 2 b)IL 4、IL 10分泌量大幅度增高 ,IFN γ显著下降 ;而低易感品系C3H/He (H 2 k)相应的细胞因子变化极小。上述结果表明 :(1)Tk可诱导功能性T细胞亚群向Th2 /Tc2方向分化 ,并导致OVA特异性T细胞增殖受抑 ;(2 )T细胞亚群分化与MHC背景密切相关。

大小鼠癌组织内毛细淋巴管的形态学观察

目的观察大小鼠癌组织内的毛细淋巴管的形态特征,并探讨肿瘤组织内是否有淋巴管新生,为研究癌的淋巴道转移机制提供形态学依据。方法构建大鼠结肠癌和小鼠移植瘤模型,取材后进行5′-Nase-ALPase双重染色,透射电镜观察肿瘤内毛细淋巴管超微结构。结果肿瘤的周边区的毛细淋巴管多于组织正常区,肿瘤中心无毛细淋巴管,毛细淋巴管壁上可见破坏和开放连接,同时观察到淋巴管内皮细胞亚细胞结构的改变,在移植瘤内可见从一些较大的毛细淋巴管上伸出小的管腔。结论肿瘤细胞可通过破坏的淋巴管壁或内皮细胞间的开放连接侵入淋巴管腔,细胞器的改变是内皮细胞损伤的结构基础,在移植瘤内发现的毛细淋巴管可能为新生淋巴管,它们通过质膜小泡引导物质的转运。

建立小鼠异位心脏移植模型

目的:建立小鼠腹腔异位心脏移植模型。方法:选用建康C57近交系小鼠和BALB/c近交系小鼠,参考大鼠心脏移植Ono式模型,并加以改良。同系移植组(n=20)供、受体均采用BALB/c小鼠;同种异品系移植组(n=20)供体为C57近交系小鼠,受体为BALB/c近交系小鼠。结果:成功建立了小鼠腹腔异位心脏移植模型,供心热缺血时间为(0.9±0.05)min,冷缺血时间为(34.8±0.7)min,手术成功率为90%。同系移植组小鼠心脏移植物获得长期存活(>100d);同种异品系移植组小鼠心脏移植物存活期为(7.5±0.1)d。结论:提高供心的摘取技术及受体的血管吻合技术是手术成功的关键。

模式识别分子Mindin蛋白在CCl_4诱导急性肝损伤小鼠模型中的表达

目的研究Mindin蛋白在CCl4诱导的小鼠急性肝损伤过程中的动态表达情况,并探讨其作用机制。方法雄性C57B1/6小鼠48只,随机抽取40只应用CCl4橄榄油溶液腹腔注射诱导急性肝损伤,分别于造模后6、12、24、48和72 h取小鼠肝脏组织作病理学观察(实验组),余下8只腹腔注射橄榄油作为对照(对照组)。应用Western Blot法检测Mindin蛋白的表达以及变化趋势,实时荧光定量PCR检测肝组织Mindin mRNA的表达。计量资料两组间比较采用t检验。结果 CCl4诱导肝损伤后,小鼠肝脏失去其正常结构,48 h时肝脏病理改变最为显著。肝脏Mindin蛋白在注射CCl4后12～72 h内呈现低表达水平,而其转录水平即Mindin mRNA在给予CCl4后12 h降至最低(实验组vs对照组:0. 183±0. 105 vs 1. 023±0. 247,t=8. 841,P <0. 01),随后逐渐升高,在48 h(2. 548±0. 775 vs 1. 023±0. 247)和72 h(2. 699±0. 995 vs 1. 023±0. 247)时转录水平甚至是正常水平的2倍以上,差异均有统计学意义(t值分别为5. 428、4. 621,P值均<0. 01)。结论 CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程中,Mindin蛋白显著变化,表现为蛋白表达下调,以及转录后mRNA水平的调节。提示Mindin蛋白在CCl4诱导急性肝损伤过程中可能发挥重要作用。

小鼠胚胎腭突融合过程中IRF6蛋白在腭突组织中表达的实验研究

目的观察小鼠胚胎腭突融合过程中IRF6蛋白在腭突组织中的表达情况,探讨唇腭裂发生原因。方法 60只C57BL/6J近交系受孕小鼠分别于妊娠第13.0天(GD13.0)、GD14.0、GD14.5及GD15.0时断颈处死,取小鼠胚头经固定、石蜡包埋、切片,行苏木素-伊红染色及免疫组织化学检测不同胚胎发育时期的腭突组织中IRF6蛋白的表达。结果 GD13.0时,腭突上皮、舌上皮可见IRF6蛋白表达;GD14.5时,腭突中嵴上皮接触,IRF6蛋白的表达水平达到高峰;GD15.0时,表达水平下降(P<0.05)。结论 IRF6蛋白在两侧腭胚突的接触、融合期发挥调节作用。

甘氨酸补充对力竭性运动小鼠部分生化指标的影响

目的探讨甘氨酸补充对一次力竭性运动小鼠部分生化指标的影响。方法将雄性昆明小鼠分为3组,每组10只:力竭性游泳运动组(E组),甘氨酸补充后力竭性游泳组(G组)及静息正常对照组(S组)。G组小鼠采用甘氨酸灌胃处理4周,其余两组给予生理盐水。4周后,E组和G组均做力竭性游泳运动。采样后进行补体溶血活性测定,并测定血清中部分生化指标的水平。结果与E组比较,G组的力竭性游泳运动时间显著延长(P<0.01)。力竭性游泳后,E组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、尿素氮、血清铁(Fe3+)和补体溶血活性(CHA)的水平较S组发生了显著性的变化(P<0.01),与E组比较,G组小鼠血清中上述生化指标得到了显著改善(P<0.01),其中ALP和LDH的水平可以恢复到与S组相当的水平(P>0.05)。结论力竭性游泳小鼠血清部分生化指标异常,甘氨酸预补充对这些异常有明显的改善作用,可以一定程度地提高小鼠的运动能力。

防哮饮早期干预对哮喘小鼠血清白细胞介素-10水平影响的实验研究

目的观察中药"防哮饮"早期干预对哮喘小鼠血清白细胞介素10(IL-10)水平以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)的影响。方法将60只健康昆明小鼠随机分为6组:正常对照组、哮喘模型组、"防哮饮"小剂量组、"防哮饮"中剂量组、"防哮饮"大剂量组、布地奈德组各10只,用卵蛋白致敏激发造模。中药"防哮饮"组从致敏第1天起,将中药"防哮饮"按小剂量(含生药0.5 g/mL)、中剂量(含生药1.5 g/mL)、大剂量(含生药2.5 g/mL)灌胃给药,每日1次,每次0.4 mL,共27 d。在最后1次激发后24 h(第28 d)处死小鼠,采用双抗夹心酶联免疫吸附试验检测小鼠血清IL-10的含量,并镜检BALF中EOS%。结果哮喘模型组小鼠BALF中EOS[(2.9±1.4)%]较对照组[(1.3±0.9)%]明显升高(P<0.01);血清IL-10的含量[(7.6±3.0)ng/mL]较对照组[(44.9±33.0)ng/mL]降低(P<0.05)。"防哮饮"小、中、大剂量组均能显著提高哮喘小鼠血清IL-10水平,与哮喘模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P>0.05)。"防哮饮"大、中、小剂量组和布地奈德组均能明显降低BALF中EOS%(P<0.01),各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论中药"防哮饮"及布地奈德早期干预治疗均能够明显改善哮喘小鼠病理状态,上调哮喘小鼠血清IL-10表达和降低BALF中EOS%水平可能是其作用机制。

雷公藤甲素对变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡机制研究

目的:探讨雷公藤甲素在变应性接触性皮炎(ACD)小鼠淋巴细胞凋亡中的作用机制。方法:以二硝基氯苯制作ACD小鼠模型,体外培养淋巴细胞,分别以0.1、1.0、10μmol/L(低、中、高浓度组)雷公藤甲素作用后,采用流式细胞仪检测细胞Fas表达,Caspase-8浓度,RT-PCR方法检测Bax mRNA表达。结果:不同3个甲素浓度组体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas表达均高于对照组,且随浓度增加Fas表达水平逐渐升高。高浓度组及中浓度组雷公藤甲素对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达均高于对照组及低浓度组。雷公藤甲素组ACD小鼠体外培养的淋巴细胞Bax表达显著高于对照组,药物各浓度组间差异缺乏规律性。结论:雷公藤甲素可以通过提高Fas表达、升高胞浆内蛋白水解酶的活化Caspase-8水平的浓度、诱导Bax mRNA基因的表达,诱导细胞的凋亡。

应变技术定量评价肥胖小鼠左心室心肌收缩功能与早期炎症的关系

目的验证应变技术对肥胖小鼠左心室收缩功能监测的有效性,通过与病理结合进一步说明肥胖所致心肌损伤改变与炎症因子的关系。材料与方法选取C57BL/6J雄性小鼠,经12周SPF级饲养建立肥胖动物模型,纳入肥胖组小鼠24只、对照组小鼠20只,采用Visualsonics Vevo 2100 Imaging System超声生物显微镜测量常规指标[室间隔舒张末期厚度(IVS-D)、室间隔收缩末期厚度(IVS-S)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPW-D)、左心室后壁收缩末期厚度(LVPW-S)、左心室舒张末期内径(LVID-D)、左心室收缩末期内径(LVID-S)、左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)]以及应用应变技术定量获取左心室心肌应变参数(纵向、径向和圆周应变参数)评价两组小鼠左心室收缩功能;通过病理大体形态、HE染色、天狼星红染色、小麦胚芽凝集素+异硫氰酸荧光素染色评价两组小鼠心肌组织改变。结果超声生物显微镜结果显示,与对照组相比,肥胖组小鼠LVEF[(75.04±2.81)%比(63.63±2.03)%]及LVFS[(43.17±2.63)%比(33.71±1.50)%]水平显著降低,LVID-S[(1.84±0.20)mm比(2.20±0.24)mm]、IVS-D[(0.78±0.09)mm比(1.01±0.06)mm]、IVS-S[(1.10±0.11)mm比(1.40±0.10)mm]、LVPW-D[(0.78±0.09)mm比(0.93±0.14)mm]及LVPW-S[(1.09±0.07)mm比(1.21±0.11)mm]显著增大(t=14.82、14.04、5.07、9.33、9.51、3.97、4.18,P均<0.001),纵向应变(24.81±2.97比9.43±2.49)、径向应变(26.56±5.46比19.17±8.03)及圆周应变值(26.49±5.40比14.25±6.03)均减低(t=11.91、2.40、4.65,P均<0.05)。病理结果显示,与对照组相比,肥胖组小鼠室间隔与左心室后壁明显增厚,心肌细胞肥大且排列紊乱,胶原纤维分布增多,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白-3炎症小体和半胱氨酸蛋白酶-1炎症因子明显呈高表达。结论超声生物显微镜可无创检测肥胖小鼠的心脏收缩功能,其应变技术可早期发现肥胖所致心肌损伤改变,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白-3炎症小体和半胱氨酸蛋白酶-1炎症因子参与肥胖小鼠心肌损伤过程。

高压氧对小鼠离体血红细胞免疫功能的影响

小鼠抗凝血暴露在压力为０．２ＭＰａ的纯氧舱内８０ｍｉｎ后，检测红细胞Ｃ３ｂ受体花环和红细胞免疫复合物花环。结果显示该条件下高压氧（ＨＢＯ）有提高红细胞Ｃ３ｂ受体花环率的作用，与对照组相比差异有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。

标记滞留细胞技术检测异位子宫内膜干细胞的研究

目的:通过标记滞留细胞(LRCs)技术检测证实异位子宫内膜干细胞的存在及其在病灶内的分布情况;初步探讨抗雌激素治疗对异位子宫内膜干细胞的影响,寻找内异症高复发率的原因。方法:将64只裸鼠分成3组:对照组16只,建立内异症裸鼠模型前24h开始腹腔注射NS 50μl/(只.次),2次/d,共5d;未去势组及去势组各24只,建模前24h开始腹腔注射25μg/μl 5-溴脱氧尿苷(BrdU),2μl/g,2次/d,共5d,去势组于末次注射后1w去势。造模后裸鼠均雌激素刺激5d。3组裸鼠均于于末次注射后4h,1w,3w,5w,6w,7w,8w,9w进行探查,对照组每次处死2只裸鼠,其余2组每次处死3只裸鼠。免疫组化法检测每个时间点的BrdU标记率。结果:BrdU标记未对造模结果产生不良影响。对照组各时间点均未见BrdU标记阳性细胞。未去势组的腺上皮和间质的BrdU初始最大标记率分别为(69.89±0.78)%和(73.27±1.06)%,第6w和8w时分别约有(2.07±0.19)%和(4.63±0.72)%仍保留标记,分别为腺上皮和间质LRCs,分别于第7w和9w时衰减至0。腺上皮和间质LRCs多位于异位内膜与所种植的裸鼠组织的交界处,约50%的间质LRCs临近血管和腺体。去势治疗可显著减小异位病灶的体积,但对LRCs的数量无明显影响。去势组与未去势组的腺上皮、间质标记率在各个时间点均无统计学差异(P>0.05)。结论:LRCs技术可以成功标记异位子宫内膜干细胞,异位病灶中存在腺上皮和间质两种LRCs,抗雌激素治疗并不能清除LRCs。干细胞的持续存在可能在内异症的复发机制中扮演了重要角色。

CD137/CD137L信号通路在体外T细胞增殖反应和体内SGVHD诱导中的作用

目的:探讨抗CD137L单克隆抗体在体外、体内阻断CD137/CD137L信号通路对T细胞体外增殖的影响以及对小鼠同基因型移植物抗宿主病(syngeneic graft versus host disease,SGVHD)的作用。方法:体外混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的抗CD137L单克隆抗体,观察抗体对T细胞增殖的影响。同基因骨髓细胞移植给致死剂量X射线照射的受体小鼠后,腹腔注射环孢素A(cyclosporine A,CsA)诱导SGVHD,并于诱导治疗的第10天起给治疗组小鼠腹腔注射抗CD137L单克隆抗体进行干预治疗。观察各组小鼠的临床症状(体重下降,腹泻),组织病理学和细胞因子改变。结果:体外用抗CD137L单抗阻断CD137/CD137L通路后,可抑制淋巴细胞的增殖和IL-2的产生。体内注射抗CD137L单抗,小鼠SGVHD的发生率为25%,显著低于诱导组小鼠SGVHD 67%的发生率,两者差异具有统计学意义(P<0.01)。SGVHD小鼠肝脏和结肠组织病理学呈严重炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平升高。而抗体治疗组小鼠组织病理学呈轻度炎症细胞浸润,组织中细胞因子IL-12I、FN-γ、TNF-αmRNA水平较低或检测不到,而IL-4mRNA水平升高。结论:单独用抗CD137L单克隆抗体阻断CD137/CD137L信号通路在体外可明显抑制混合淋巴细胞反应,在体内可明显抑制小鼠SGVHD的发生。

狼毒浸出液抗肝癌作用的实验研究

1目的 探讨狼毒浸出液 (YF- 1)对腹水型肝癌 (H2 2 )及淋巴道转移型肝癌 (H2 2 / F2 3 )的抗癌作用及作用机制。 2方法 用 H2 2 ,H2 2 / F2 3 细胞攻击 CFW小鼠 ,并进行 YF- 1治疗 ,观察生存时间、瘤体质量及淋巴结转移程度 ;用狼毒浸出液与 H2 2 ,H2 2 / F2 3 细胞混和培养 ,观察抑瘤率 ;用混合细胞培养液接种至小鼠腹腔 ,观察动物存活情况。 3结果 用 H2 2 ,H2 2 / F2 3攻击后 ,治疗组小鼠平均生存时间长于对照组 (t=3.16 ,3.0 4,P<0 .0 5 )。YF- 1的抑瘤率分别为 6 7.9% ,6 4.6 % .治疗组荷瘤鼠的淋巴结转移率明显低于对照组 (t=3.182 ,P<0 .0 5 )。中和实验中 ,治疗组和对照组的平均存活时间分别为 38.0 ,14.8d,两组比较差异有显著性 (t=3.16 3,P<0 .0 5 )。

脱氢洛伐他汀对佐剂性关节炎的作用研究

目的研究脱氢洛伐他汀(DLVT)对小鼠佐剂性关节炎的作用。方法建立小鼠后右足佐剂性关节炎(AA)模型。足容积法测定原发侧及继发侧足肿胀度,并进行多发性关节炎评分(关节炎指数);观察各组小鼠站立和爬梯活动;苏木素-伊红(HE)染色检测非致炎侧踝关节的病理改变;MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测血清中炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1、NO的表达。结果 8.4、16.8mg·kg-1·d-1 DLVT灌胃给药可明显抑制AA小鼠原发性和继发性关节炎,降低多发性关节炎指数,增强AA小鼠站立和爬梯能力;抑制脂多糖(LPS)诱导的AA小鼠脾淋巴细胞的增殖反应;抑制AA小鼠关节纤维增生和滑膜增生,减少炎症细胞的浸润。降低血清中IL-6、IL-1、NO及TNF-α水平。结论 8.4、16.8mg·kg-1·d-1 DLVT灌胃给药可明显抑制促炎症细胞因子病理性升高,从而控制了实验性佐剂性关节炎的病情发展。