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汉黄芩素上调小鼠骨髓Lin-细胞Pecam1基因表达 被引量:1
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作者 李慧影 马亚珂 +1 位作者 杨岳 王虹 《天津中医药大学学报》 CAS 2015年第2期86-90,共5页
[目的]探讨汉黄芩素对小鼠骨髓Lin-细胞增殖、分化、迁移、黏附关键功能基因表达的影响。[方法]采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓Lin-细胞,采用CD117作为标志进行细胞鉴定。应用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)芯片技术研究汉黄芩素对小鼠骨... [目的]探讨汉黄芩素对小鼠骨髓Lin-细胞增殖、分化、迁移、黏附关键功能基因表达的影响。[方法]采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓Lin-细胞,采用CD117作为标志进行细胞鉴定。应用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)芯片技术研究汉黄芩素对小鼠骨髓Lin-细胞功能基因表达的影响。采用黏附能力测定实验观察Lin-细胞的黏附能力。[结果]流式细胞技术结果显示,小鼠骨髓源性单个核细胞免疫磁珠分选后CD117的阳性率为93.7%;芯片结果发现汉黄芩素明显上调Lin-细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(Pecam1)基因表达;黏附能力测定实验结果可见汉黄芩素增强Lin-细胞的黏附能力。[结论]免疫磁珠法分离小鼠骨髓Lin-细胞是一种较为理想的分离方法;汉黄芩素可能通过上调小鼠骨髓Lin-细胞Pecam1基因表达,从而增加Lin-细胞的黏附能力。 展开更多
关键词 小鼠骨髓lin-细胞 汉黄芩素 关键功能基因 黏附能力
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消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞移植对实验性非酒精性脂肪性肝炎肝硬化小鼠的干预作用及机制
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作者 杨芳丽 王钰涵 +6 位作者 姚凝 王昕 夏艳青 韩金孝 左小宁 秦英 王馨 《河北中医》 2024年第11期1843-1848,1853,共7页
目的观察消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝硬化小鼠的干预作用及其可能机制。方法将40只健康SPF级C57BL/6小鼠随机分出8只作为空白组,其余32只小鼠采用蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食联合10%... 目的观察消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝硬化小鼠的干预作用及其可能机制。方法将40只健康SPF级C57BL/6小鼠随机分出8只作为空白组,其余32只小鼠采用蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食联合10%四氯化碳(CCl4)腹腔注射诱导NASH肝硬化模型。造模成功后随机分为模型组、中药组、干细胞组、联合组,每组8只。其中中药组予消脂化纤汤灌胃,干细胞组行尾静脉注射BM-MSCs移植1次,联合组予消脂化纤汤灌胃的同时,行尾静脉注射BM-MSCs移植1次,空白组和模型组则不予任何干预。干预4周后取材,检测肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)],酶联免疫吸附法测定肝组织维A酸相关孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素23(IL-23)、IL-21、IL-17含量,酶联免疫吸附法测定血清及肝组织肝细胞生长因子(HGF)含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定肝脏淋巴细胞RORγt、IL-23、IL-21、IL-17 mRNA表达水平。结果(1)与空白组比较,模型组血清ALT、AST含量均升高,ALB含量降低(P<0.01),与模型组比较,不同干预组各指标均有不同程度改善,以联合组变化最显著(P<0.01)。(2)肝组织IL-23、IL-21、RORγt、IL-17水平比较:与模型组比较,各干预组小鼠肝组织各指标均降低,联合组优于各单纯干预组(P<0.01)。(3)RT-PCR结果显示:与模型组比较,各干预组小鼠肝脏淋巴细胞RORγt、IL-23、IL-21、IL-17 mRNA表达降低,联合组优于各单纯干预组(P<0.05)。(4)各组小鼠血清和肝组织HGF表达水平比较:联合组优于中药组与干细胞组(P<0.01)。结论消脂化纤汤联合BM-MSCs移植可抑制肝脏过度炎症反应,从而促进肝脏细胞再生,其作用机制可能与调节辅助性T细胞17(Th17)免疫学功能相关。 展开更多
关键词 肝硬化 非酒精性脂肪性肝炎 动物模型 小鼠 骨髓间充质干细胞 Th17细胞 动物实验 中药药理实验
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当归-白芍联合BM-MSCs移植对NASH相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响
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作者 姚凝 王钰涵 +7 位作者 王昕 杨芳丽 王馨 左小宁 秦英 夏艳青 韩金孝 田利民 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第11期129-135,共7页
目的观察当归-白芍药对联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响,探讨其可能机制。方法采用西式饮食联合四氯化碳复合诱导法制备NASH相关肝硬化小鼠模型,将小鼠随机分为... 目的观察当归-白芍药对联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响,探讨其可能机制。方法采用西式饮食联合四氯化碳复合诱导法制备NASH相关肝硬化小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、当归-白芍组、BM-MSCs组和当归-白芍+BM-MSCs组,每组12只。造模成功后,按分组予相应干预,连续4周。HE染色观察肝组织形态;检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、三酰甘油(TG)、白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)含量及肝组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、肝细胞生长因子(HGF)含量;RT-qPCR检测肝细胞Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(MyD88)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA表达;分离肝脏原代细胞,行体外CpG ODN 2216诱导刺激,提取细胞上清液,检测IL-1β和TNF-α含量。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织炎性细胞浸润,伴肝细胞坏死和胶原沉积,形成假小叶;血清ALT、AST、TBil、TG含量升高,ALB含量下降,肝组织HGF含量下降,IL-1β、TNF-α含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肝细胞TLR9、MyD88、TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达升高(P<0.05),CpG ODN 2216诱导后肝细胞上清液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05)。与模型组比较,当归-白芍+BM-MSCs组小鼠肝组织炎性细胞浸润及肝细胞坏死减少,肝纤维化程度减轻,当归-白芍组和BM-MSCs组小鼠肝组织损伤轻度好转;除BM-MSCs组血清TG含量外,各干预组检测指标均明显改善(P<0.05)。与当归-白芍组及BM-MSCs组比较,当归-白芍+BM-MSCs组相关检测指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论当归-白芍联合BM-MSCs移植可有效改善NASH相关肝硬化小鼠肝功能,促进肝细胞再生,其机制与下调TLR9/NF-κB信号通路表达及功能,抑制炎症因子分泌,改善肝脏炎症微环境有关。 展开更多
关键词 当归-白芍 骨髓间充质干细胞 非酒精性脂肪性肝炎 肝硬化 TLR9信号通路 小鼠
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小鼠c-Kit^+lin-骨髓细胞移植生成肝细胞的实验研究 被引量:23
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作者 唐浩 廖彩仙 +5 位作者 周杰 金浩生 谭远飞 苏俊 张春兴 张守华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期567-569,共3页
目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小... 目的评价小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞的肝干细胞潜能,为骨髓源性肝干细胞的临床运用提供可行性实验依据。方法供体为纯系BALB/C雄性小鼠,c-Kit+Lin-骨髓细胞采用免疫磁珠分选法分离细胞。受体为行35Gy全肝照射处理后的同龄同系BALB/C雌性小鼠,立即移植供体c-Kit+lin-骨髓细胞。接受c-Kit+lin-骨髓细胞移植1月后,活杀取肝做常规病理学检查、Y染色体的原位杂交检查、甲胎蛋白与白蛋白的免疫组化检测。结果移植1月后小鼠肝脏的组织结构已恢复正常,肝组织细胞中存在原位杂交和免疫组化均呈阳性反应的双阳性细胞。结论小鼠c-Kit+Lin-骨髓细胞具有肝干细胞潜能,移植后可以在肝内定居并分化形成肝细胞。可做为肝病细胞移植疗法的种子细胞。 展开更多
关键词 小鼠骨髓细胞 c-Kit^+lin-骨髓细胞 骨髓衍生肝干细胞
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小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中Caveolin-1的表达 被引量:4
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作者 杨阳 张纲 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1132-1136,共5页
目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中小窝蛋白-1(Caveolin-1)的表达变化。方法:体外培养BMSCs细胞株,分为诱导成骨组和未诱导组,在培养的不同时期(3d、7d、10d、14d),采用碱... 目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向成骨细胞分化过程中小窝蛋白-1(Caveolin-1)的表达变化。方法:体外培养BMSCs细胞株,分为诱导成骨组和未诱导组,在培养的不同时期(3d、7d、10d、14d),采用碱性磷酸酶(AKP)活性测定、茜素红染色对BMSCs成骨分化进行鉴定,实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞Caveolin-1mRNA、蛋白的表达情况。结果:RT-PCR结果显示同一时间点诱导组Caveolin-1mRNA表达量高于未诱导组,诱导组Caveolin-1mRNA表达以时间依赖性的方式不断增高;Western Blot结果显示同一时间点诱导组Caveolin-1蛋白水平高于未诱导组,诱导组Caveolin-1蛋白水平以时间依赖性的方式增高。结论:本实验从mRNA、蛋白水平证实BMSCs表达Caveolin-1的量随着成骨分化的进行不断增加。Caveolin-1可能参与调控BMSCs成骨分化过程。 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 成骨分化 小窝蛋白-1
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小鼠骨髓间充质干细胞分离方法的比较与探讨 被引量:1
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作者 廖新爱 蔡丹妮 +1 位作者 游若兰 黄慧芳 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-9,共9页
目的探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。方法分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7~9周龄雄性C57BL/6小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs形态;运用流... 目的探讨可高效分离小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)的技术方法。方法分别采用骨片消化爬片法、全骨髓贴壁法、骨片消化液上清法和骨片消化研钵法等四种方法分离7~9周龄雄性C57BL/6小鼠的mBMSCs;于倒置显微镜下观察原代mBMSCs形态;运用流式细胞术检测mBMSCs特征性免疫表型;采用多向分化诱导检测mBMSCs成骨分化能力与成脂分化能力。结果分离获得的原代细胞首次换液后于倒置显微镜下观察:骨片消化爬片法分离的细胞,仅见大量骨碎片和杂细胞,该法所分离细胞不再进行后续检测评估;全骨髓贴壁法分离的细胞,仅可见少量多角形贴壁细胞,夹杂大量杂细胞;骨片消化液上清法分离的细胞也可见较多长梭形、三角形贴壁细胞,但杂细胞较多;骨片消化研钵法分离的细胞,可见较多长梭形、多角形贴壁细胞,杂细胞少。分离细胞经培养传代到第3代(P3代)时,一方面采用流式细胞术分析mBMSCs特征性免疫表型,结果表明骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离的mBMSCs纯度均较高,全骨髓贴壁法不理想;另一方面,进行成骨分化诱导与成脂分化诱导,结果表明与全骨髓贴壁法分离的细胞相比,骨片消化液上清法和骨片消化研钵法所分离出的细胞具有较强的多向分化潜能。结论骨片消化液上清法和骨片消化研钵法分离获得的mBMSCs纯度较高、质量较好。 展开更多
关键词 小鼠骨髓间充质干细胞 骨片消化爬片法 骨髓贴壁法 骨片消化液上清法 骨片消化研钵法
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嵌套EP管法更快速获取更多小鼠骨髓细胞
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作者 徐启英 王卓亚 +1 位作者 冶怡 乌仁塔娜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2624-2626,2630,共4页
目的:探讨更快速获取更多小鼠骨髓细胞的方法。方法:取同一只小鼠双下肢,两侧分别随机使用首创的嵌套EP管法或传统常用的注射器冲洗法获得骨髓细胞;记录获取骨髓细胞的时间、数量;采用流式细胞技术分析两种方法所得的活细胞比例;采用CC... 目的:探讨更快速获取更多小鼠骨髓细胞的方法。方法:取同一只小鼠双下肢,两侧分别随机使用首创的嵌套EP管法或传统常用的注射器冲洗法获得骨髓细胞;记录获取骨髓细胞的时间、数量;采用流式细胞技术分析两种方法所得的活细胞比例;采用CCK-8方法检测两种方法获得的小鼠骨髓细胞的增殖能力。结果:与传统常用的注射器冲洗法相比,嵌套EP管法获取小鼠骨髓细胞的时间更短(P<0.0001)。与传统常用的注射器冲洗法相比,嵌套EP管法获得的小鼠骨髓细胞数量更多(P<0.05)。两种方法获得的骨髓活细胞比例一致,增殖能力一致。结论:嵌套EP管法能更快速获得更多的骨髓细胞。 展开更多
关键词 嵌套EP管法 骨髓细胞 小鼠
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小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点及分化潜能鉴定 被引量:19
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作者 周进明 邹仲敏 +6 位作者 郭朝华 何颖 张勇 王劲 王蒙 罗成基 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-61,共4页
目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5~ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度... 目的 建立一种体外分离、培养和鉴定小鼠骨髓间质干细胞的方法 ,探讨体外培养中间质干细胞的一些生物学特点 ,为利用MSCs促进创伤修复提供实验基础。方法 分离 5~ 6周龄的小鼠胫骨、股骨 ,用预冷的IMDM培养基冲洗出骨髓 ,经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞 ,接种后 1 2~ 1 6d形成单层贴壁的成纤维状细胞。体外多向诱导分化鉴定分离的细胞 ,用传代的细胞进行生长曲线的测定、观察其接种贴壁率、检测细胞周期和超微结构。结果 体外传代培养的MSCs具有分化形成成骨和成脂细胞的能力 ;MSCs倍增时间约为 3 8h ,传代后 1 2h贴壁达 90 %以上 ,细胞周期显示有 80 %细胞处于G0 G1 期 ,并用电镜照片显示其超微结构。结论 在本实验条件下 ,体外培养的MSCs具有多向分化潜能 ,体外生长稳定 ,传代后的细胞适应性强 ,增殖较快 ,超微结构和细胞周期表现出较早期细胞特点。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 细胞培养 骨髓分化潜能 小鼠 造血干细胞
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BMP-2和FGF-2对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响 被引量:25
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作者 张为西 陈松林 +4 位作者 姚晓黎 卢锡林 周琛 冷雁 Xingming Shi 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1062-1065,共4页
目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响。方法:取3-18月雄性C57BL/6J小鼠(共50只)的骨髓细胞,分离贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,并鉴定为MSCs后,再进行... 目的:观察骨形成蛋白(BMP-2)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)对小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞分化的影响。方法:取3-18月雄性C57BL/6J小鼠(共50只)的骨髓细胞,分离贴壁培养后,用免疫磁珠法纯化,并鉴定为MSCs后,再进行贴壁培养24h后,分别在成骨细胞诱导培养液中加入100μg/LBMP-2和0.5nmol/LFGF-2持续诱导7、14、21d后,进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性检测,Vonkossa染色以及茜素红染色,并用递转录荧光定量PCR法检测向成骨细胞分化的标志性基因(Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin)的表达情况。结果:BMP-2刺激组的ALP活性以及钙化结节明显高于对照组,Runx2/cbfa1,ALP,collage-1,osteocalcin的mRNA呈高表达;FGF-2刺激组的ALP活性以及钙化结节也高于对照组,Runx2/cbfa1、Alp、collagen-1、osteocalcin的mRNA表达量也高于对照组,但不如BMP-2明显。结论:BMP-2和FGF-2在不同程度上促进体外培养的小鼠MSCs向成骨细胞方向分化。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓间质干细胞 BMP-2 FGF-2
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小鼠骨髓间充质干细胞的分离与纯化培养的实验研究 被引量:10
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作者 仝识非 宋治远 +2 位作者 姚青 万瑛 邹丽云 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期907-910,共4页
目的探索小鼠骨髓间充质干细胞的体外纯化培养方法。方法先采用直接贴壁法培养的小鼠股、胫骨髓细胞,再用免疫磁珠法分选第3代中的CD11b-细胞。取分选纯化细胞进行形态学观察,并检测细胞在不同诱导条件下向成骨细胞及脂肪细胞的分化能... 目的探索小鼠骨髓间充质干细胞的体外纯化培养方法。方法先采用直接贴壁法培养的小鼠股、胫骨髓细胞,再用免疫磁珠法分选第3代中的CD11b-细胞。取分选纯化细胞进行形态学观察,并检测细胞在不同诱导条件下向成骨细胞及脂肪细胞的分化能力。结果①原代及传代培养的小鼠骨髓贴壁细胞多呈梭形,部分呈不规则型,其中含有较多的CD11b+细胞;磁珠分离后的纯化细胞呈现纺锤型、星型及不规则型等多种形态,细胞质丰富,核仁明显,细胞平行排列或漩涡状生长;②成骨诱导3周后mMSCs分化为成骨细胞,茜素红S染色有橘红色磷酸盐胞外基质沉积;③随着成脂化诱导时间的延长,细胞逐渐增大,油红O染色可见胞质内大量橙红色脂肪空泡。结论单纯的贴壁及传代培养不能纯化小鼠骨髓间充质干细胞,贴壁与免疫磁珠分离相结合才是一种有效的mMSCs体外分离和纯化方法。 展开更多
关键词 间充质干细胞 小鼠 免疫磁珠 骨髓
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逆向解剖法游离股骨/胫骨快捷制备小鼠骨髓细胞 被引量:12
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作者 付必莽 苏莹珍 +3 位作者 何小文 胡安斌 何晓顺 黄洁夫 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期2601-2604,共4页
背景:如何快速洁净地游离小鼠股骨和胫骨直接影响骨髓细胞缺血时间,虽文献报道可用手术刀片刮除、纱布和纸巾等器物协助去除肌肉组织。但对其具体操作技巧并无详细报道,也无统一简捷的方法。目的:寻找制备小鼠骨髓细胞快捷实用的方法,... 背景:如何快速洁净地游离小鼠股骨和胫骨直接影响骨髓细胞缺血时间,虽文献报道可用手术刀片刮除、纱布和纸巾等器物协助去除肌肉组织。但对其具体操作技巧并无详细报道,也无统一简捷的方法。目的:寻找制备小鼠骨髓细胞快捷实用的方法,最大限度减少骨髓细胞缺血时间。方法:采用逆向肌肉剥离法由踝关节向髋关节逆行解剖,以镊子配合剪刀行"剪合-滑动-折转"3个动作,彻底去除附着于小鼠后肢股骨的肌肉组织,快捷制备骨髓细胞悬液。记录解剖骨骼和制备骨髓细胞的时间,所得骨髓细胞培养72h后光学显微镜观察,评价该制备方法的效果。结果与结论:骨骼解剖时间为(1.9±0.4)min,骨髓细胞悬液制备时间为(14.7±1.8)min;游离过程骨折断或髓腔破损率为0%;制备的骨髓细胞培养72h,细胞数量[(8.1±2.0)×107个]较培养前[(4.7±0.7)×107]明显增加(P<0.01),而活细胞比率在培养前(97.5±1.1)%和培养后(95.4±1.0)%无明显差异(P>0.05);镜下微生物污染率为0%,未见肌肉细胞等污染。结果显示该方法快捷实用、不易污染、操作容易程序化,具有很好的参考价值。 展开更多
关键词 逆向解剖 胫骨/股骨 快捷 小鼠 骨髓细胞
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紫黑糯米皮层对促进小鼠骨髓祖细胞分化和脾淋巴细胞增殖的影响 被引量:9
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作者 顾德法 李军 +2 位作者 易扬华 郑钦岳 沈有安 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期250-252,共3页
紫黑糯米皮层对促进小鼠骨髓祖细胞分化和脾淋巴细胞增殖的影响顾德法,李军,易扬华,郑钦岳,沈有安(上海市农业科学院作物育种栽培研究所,上海201106)(中国人民解放军第二军医大学药学院,上海200433)关键词:紫黑... 紫黑糯米皮层对促进小鼠骨髓祖细胞分化和脾淋巴细胞增殖的影响顾德法,李军,易扬华,郑钦岳,沈有安(上海市农业科学院作物育种栽培研究所,上海201106)(中国人民解放军第二军医大学药学院,上海200433)关键词:紫黑糯米,骨髓祖细胞分化,脾淋巴细胞增... 展开更多
关键词 紫黑糯米 骨髓细胞 脾淋巴细胞 小鼠
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小鼠骨髓树突状细胞的扩增及其超微结构观察 被引量:7
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作者 谢志芳 曹雪涛 +3 位作者 章卫平 颜永碧 于秉学 郑尊 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期513-515,共3页
目的:建立体外大量扩增树突状细胞( D C)的方法,并对 D C进行形态学和免疫学性质鉴定。方法:制备小鼠骨髓细胞,用免疫磁珠方法去除其中的淋巴细胞、单核巨噬细胞及粒细胞,将阴性选择到的细胞用小鼠重组 G M C S F培... 目的:建立体外大量扩增树突状细胞( D C)的方法,并对 D C进行形态学和免疫学性质鉴定。方法:制备小鼠骨髓细胞,用免疫磁珠方法去除其中的淋巴细胞、单核巨噬细胞及粒细胞,将阴性选择到的细胞用小鼠重组 G M C S F培养,8 d 后收集悬浮细胞。将收集到的细胞进行免疫表型鉴定和超微结构观察,以及 D C特异性抗原 D E C205 的免疫胶体金标记。结果:可从每只小鼠的股骨骨髓中扩增到(2~5)×106 个 D C, 细胞纯度达80% 以上。细胞表达 D C的特异性抗原 D E C205,具有 D C的典型形态及表型。结论:成功地建立了体外大量扩增骨髓 D C的方法,为深入研究其免疫学功能打下基础。 展开更多
关键词 树突状细胞 超微结构 骨髓 小鼠
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小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达 被引量:8
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作者 包杰 郑磊 +3 位作者 王前 顾春瑜 裘宇容 李娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期703-705,共3页
目的:探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avianreticuloendotheliosisviral(v-rel)oncogenerelatedB)基因的表达。方法:无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导骨髓前... 目的:探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avianreticuloendotheliosisviral(v-rel)oncogenerelatedB)基因的表达。方法:无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导骨髓前体细胞产生未成熟的DC,未成熟的DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的DC,用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟与未成熟DC中,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果:流式细胞术分析显示未成熟的DC中MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子(CD86和CD40)呈低水平表达;而成熟的DC则呈高水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的DC中呈低水平表达;而在成熟的DC中呈高水平表达,两者比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:RelB基因的表达与小鼠骨髓来源的DC的成熟状态密切相关。抑制DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。 展开更多
关键词 RelB基因 小鼠 骨髓树突状细胞 表达
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鸡血藤煎剂对小鼠骨髓细胞增殖的影响 被引量:8
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作者 陈东辉 罗霞 +3 位作者 余梦瑶 赵弋清 程耀锋 杨志荣 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期352-355,共4页
目的 :探讨鸡血藤调控小鼠骨髓细胞增殖及其“补血”作用的生物学机理。方法 :采用正常小鼠和贫血小鼠模型 ,以造血生长因子生物活性检测技术测定鸡血藤对骨髓细胞增殖的影响。结果 :鸡血藤对正常小鼠和贫血小鼠骨髓细胞增殖有显著促进... 目的 :探讨鸡血藤调控小鼠骨髓细胞增殖及其“补血”作用的生物学机理。方法 :采用正常小鼠和贫血小鼠模型 ,以造血生长因子生物活性检测技术测定鸡血藤对骨髓细胞增殖的影响。结果 :鸡血藤对正常小鼠和贫血小鼠骨髓细胞增殖有显著促进作用 ;经体内鸡血藤诱导制备的巨噬细胞、脾细胞、肺和骨骼肌体外条件培养液能明显促进正常小鼠和贫血小鼠骨髓细胞增殖。结论 :鸡血藤促进造血的机理可能与直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌较高活性的造血生长因子有关。 展开更多
关键词 鸡血藤煎剂 小鼠 骨髓细胞 细胞增殖 造血生长因子 生物活性检测技术
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不同氧浓度培养对小鼠骨髓造血干细胞生物活性的影响 被引量:6
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作者 马怡然 任思婳 +3 位作者 和予馨 王林林 金丽 郝一文 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1176-1182,共7页
本研究模拟人外周血造血干细胞(HSC)移植中HSC所经历的氧环境,研究不同氧浓度对小鼠骨髓HSC生物功能的影响及可能机制。采用体外扩增实验、定向分化实验、细胞周期分析、活性氧测定及亚致死量射线照射小鼠骨髓原始Lin-c-kit+Sca-1+HSC... 本研究模拟人外周血造血干细胞(HSC)移植中HSC所经历的氧环境,研究不同氧浓度对小鼠骨髓HSC生物功能的影响及可能机制。采用体外扩增实验、定向分化实验、细胞周期分析、活性氧测定及亚致死量射线照射小鼠骨髓原始Lin-c-kit+Sca-1+HSC移植等方法,分别检测了Lin-c-kit+Sca-1+HSC的扩增能力,细胞周期,活性氧水平及造血重建能力。结果表明:低于常氧浓度,特别是乏氧的氧环境能降低活性氧的产生,增强原始骨髓HSC体外扩增能力,增加红系集落(BFU-E)、粒单集落(CFU-GM)、红系粒单系巨核系集落(CFU-GEMM)的数量,维持较多的HSC处于G0/G1期,进而明显促进移植后小鼠的脾集落(CFU-S)生长及提高移植小鼠存活数量。而暴露于常氧、不恒定且氧浓度变化剧烈的氧环境中的骨髓HSC能产生较高水平的活性氧,上述功能指标都较低。结论:骨髓HSC的活性氧水平与周围氧环境中氧浓度水平及稳定性密切相关,高水平的活性氧损害骨髓HSC的功能。在恒定的较低浓度的氧环境下培养及应用抗氧化剂对于骨髓HSC移植可能更有益。 展开更多
关键词 骨髓 造血干细胞 氧浓度 活性氧 小鼠
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小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养 被引量:14
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作者 张怡 赵连三 唐红 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2004年第5期746-748,765,共4页
探索在体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞 (Bone m arrow m esenchym al stem cells,BMSCs)的最适条件。以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合 ,在体外分离 BAL B/C小鼠的 BMSCs,通过 MTT法测定了不同离心力、不同换液时间、不同血清... 探索在体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞 (Bone m arrow m esenchym al stem cells,BMSCs)的最适条件。以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合 ,在体外分离 BAL B/C小鼠的 BMSCs,通过 MTT法测定了不同离心力、不同换液时间、不同血清浓度、不同种植密度等因素对 BMSCs分离和培养的影响。在 5 0 0 g× 30 min的离心力下分离细胞 ,加入 10 %的胎牛血清 ,原代按 (12~ 2 0 )× 10 5/m l的细胞密度接种 ,接种 2 4 h后换液 ,继代种植密度为 6 .4~ 2 5 .6× 10 4 /ml时最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,细胞快速增殖 ,传代后 8h贴壁达 90 %以上 ,2 4 h便进入对数生长期 ,直至第 5 d,细胞约增殖 3倍。本研究建立了在体外分离培养骨髓间充质干细胞的细胞生物学方法和技术参数。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 小鼠 体外分离 BMSC 增殖 骨髓问充质干细胞 培养 密度梯度离心 细胞生物学 继代
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小鼠骨髓源性内皮祖细胞的培养和表面标志物鉴定 被引量:4
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作者 杨栋 辛世杰 +6 位作者 李凤贺 王磊 汪颖厚 李悦 李晰 马文锋 张健 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1063-1066,共4页
目的建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞(EPC)的方法,并对EPC多种表面标志物进行鉴定。方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞,应用专门培养基EGM-2培养。观察不同时期细胞增殖情况;在培养7 d后行DIL-AC-LDL和FITC-UEA-... 目的建立一种从小鼠骨髓中分离、培养内皮祖细胞(EPC)的方法,并对EPC多种表面标志物进行鉴定。方法密度梯度离心法获取小鼠骨髓源性单个核细胞,应用专门培养基EGM-2培养。观察不同时期细胞增殖情况;在培养7 d后行DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定及流式细胞检测;应用RT-PCR分析0,4,7 d时CD31、CD34、CD45、CD117、CD133、FLK-1、VE-Cad等表面标志物的表达情况。结果诱导培养的骨髓单个核细胞72 h后基本完成贴壁,8~9 d时贴壁70%~80%可进行传代,2~3周后呈典型的鹅卵石样外观。细胞培养7 d后DIL-AC-LDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞比例为(90.16±6.77)%,流式细胞检测PE-Flk-1、APC-CD133、FITC-CD34均阳性概率为(1.73±0.27)%。RT-PCR结果显示随时间推移CD34、CD117、CD133的表达量逐渐下降,而CD31、FLK-1、VE-Cad等内皮系标志物的表达逐渐增加。结论密度梯度离心法结合定向诱导培养可获得较多数量的EPC,以流式细胞检测技术为主,结合细胞形态学和功能学对EPC进行鉴定是一种较为理想的方法。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 小鼠 骨髓 细胞培养
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黄芪体外作用对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌SCF的影响 被引量:24
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作者 祝晓玲 祝彼得 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期396-398,共3页
目的 研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子 (SCF)的影响。方法 在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中 ,分别加入 0 .1mL不同浓度的AMI(终浓度分别为 4 0mg/L、4 0 0mg/L)作为药物 1组、药物 2组 ,对照组加入等量的... 目的 研究黄芪注射液 (AMI)对贫血小鼠骨髓基质细胞分泌干细胞因子 (SCF)的影响。方法 在贫血小鼠骨髓基质细胞培养体系中 ,分别加入 0 .1mL不同浓度的AMI(终浓度分别为 4 0mg/L、4 0 0mg/L)作为药物 1组、药物 2组 ,对照组加入等量的IMDM培养液 ,检测各实验组培养体系中骨髓成纤维细胞集落 (CFU F)数。同时 ,分别收集培养上清液 ,透析浓缩成冻干粉 ,经IMDM液稀释后作为条件培养液 ,分别加入到高增殖潜能的集落形成细胞 (HPP CFC)培养体系中 ,检测各实验组培养上清液中所含SCF的水平。结果 与对照组相比较 ,药物组的CFU F数及骨髓基质细胞条件培养液 (BMSCM )中SCF的水平均明显升高。结论一定浓度的AMI可促进贫血小鼠骨髓CFU F增殖 。 展开更多
关键词 细胞因子 骨髓 基质细胞 黄芪 贫血 小鼠
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SO_2吸入对小鼠骨髓细胞微核的诱发效应 被引量:12
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作者 孟紫强 阮爱东 +2 位作者 张波 桑楠 张建彪 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期298-299,共2页
目的 探讨空气中SO2污染物遗传毒理效应。方法 采用SO2吸入染毒法,对SO2吸入诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)形成微核(MN)的效应进行研究。结果(1)SO2吸入可引起小鼠骨髓PCE微核率和微核细胞率显著升高;(2)随着吸入的SO2浓度的增... 目的 探讨空气中SO2污染物遗传毒理效应。方法 采用SO2吸入染毒法,对SO2吸入诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)形成微核(MN)的效应进行研究。结果(1)SO2吸入可引起小鼠骨髓PCE微核率和微核细胞率显著升高;(2)随着吸入的SO2浓度的增高,单微核细胞率、双微核细胞率均显著升高。结论 随SO2浓度增加,细胞遗传物质损伤加重,且有明确的剂量-效应关系,表明SO2空气污染物是染色体断裂剂和基因毒性因子。 展开更多
关键词 诱发效应 二氧化硫 微核 小鼠 骨髓细胞 遗传毒理 环境毒理学
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