十种苯丙氨酸衍生物对小鼠黑色素瘤细胞系B16的作用研究

该文研究了十种苯丙氨酸(Phe)的对位衍生物Fp、Clp、Bp、Ip、Ap、Np、Sp、Mp、Pp、Cp对小鼠黑色素瘤细胞系B16的细胞毒性、诱导细胞凋亡作用和抑制细胞成集落作用。结果表明,它们的细胞毒性大小依次为Pp、Fp、Mp、Ip、Sp、Ap、Bp。其中Mp和Ip的毒性相近,Sp和Ap的毒性相近。它们诱导细胞凋亡的作用强弱依次为Fp、Mp、Ip。其中Mp和Ip的作用相近。它们抑制细胞成集落的作用大小依次为Pp、Fp、Ip、Mp、Sp、Bp、Np、Ap。其中Pp、Fp、Ip、Mp的作用相近,Sp、Bp、Np的作用相近。初步的细胞毒理分析表明,Fp、Mp、Ip能够诱导B16细胞凋亡和抑制B16细胞形成集落。

榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。

原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活力及黑色素生成的抑制效应

酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶,其抑制剂有着广泛的应用前景.从天然药物的有效成分中筛选安全的酶抑制剂具有重要意义.以小鼠黑色素瘤B16细胞为模型,研究了天然药物有效成分原儿茶酸对黑色素生成和酪氨酸酶活力的影响.实验结果显示:原儿茶酸可显著降低细胞的黑色素含量,浓度为10μmol/L时使黑色素含量降低60%.进一步研究发现,原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞粗提取和共培养体系中的酪氨酸酶均有较强的抑制作用.对粗提酪氨酸酶的活力半抑制浓度(IC50)约为160μmol/L,与共培养体系中酪氨酸酶活力的抑制、抑制剂浓度和作用时间有关,10μmol/L作用54h可使酪氨酸酶活力下降88%.本研究为原儿茶酸作为酪氨酸酶抑制剂的开发应用奠定了基础.

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16F1细胞基因表达谱的影响

背景与目的:本实验室已证明蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)具有抗肿瘤侵袭转移作用,为了进一步阐明其分子机制,本研究利用高通量的基因芯片技术探讨sv-cystatin基因转染对小鼠黑色素瘤细胞(B16F1)基因表达谱的影响。方法:分别将pcDNA3.1/sv-cystatin及空载体pcDNA3.1转染B16F1细胞,建立稳定转染的B16F1/sv-cystatin及B16F1/pcDNA3.1细胞株,提取总mRNA,应用高通量的基因芯片技术检测差异表达基因,半定量RT-PCR法分别验证5个上调和5个下调的差异表达基因。结果:B16F1细胞经转染sv-cystatin后,共检测了1218个基因,其中有45个差异表达基因,21个基因表达上调(Ratio>3),24个基因表达下调(Ratio<0.5),这些基因的功能涉及细胞粘附迁移、细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等方面。10个差异表达基因的RT-PCR验证结果与基因芯片分析结果相符。结论:Sv-cystatin不仅具有抑制细胞外基质的作用,而且还具有细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等多种生物学功能。

马尾松树皮提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素生成抑制效果及其机制的初步研究

目的探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果及其分子机制。方法 10～50μg/ml的PMBE与小鼠B16黑色素瘤细胞共培养后进行各项细胞学研究:MTT法检测PMBE对细胞的毒性;以左旋多巴为底物测定PMBE对酪氨酸酶(TYR)活性的抑制作用;DCM法检测PMBE对细胞ROS的清除能力;比色法测定PMBE对细胞内黑色素生成的抑制效果以及对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH/GSSG的影响;RT-PCR检测酪氨酸酶及其相关蛋白1(TRP-1)和2(TRP-2)在mRNA水平表达量的影响。结果 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞的增殖无明显影响,并可显著减少细胞内的黑色素含量。另外,PMBE对活性氧具有很强的清除能力,同时可上调细胞内GSH/GSSG比率,从而增强细胞的还原力。PMBE还对酪氨酸酶活性表现出了一定的抑制效果,但这种抑制却并不发生在mRNA水平。结论 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素生成具有显著抑制效果并主要通过降低酪氨酸酶活性和清除活性氧来实现。

IL-24对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用

[目的]研究携带IL-24基因的真核表达质粒对小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡和体外增殖的影响.[方法]采用重组DNA技术构建含有IL-24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞,用荧光显微镜观察其表达,在生物显微镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)法检测细胞凋亡,用MTT比色法检测B16细胞的体外增殖能力.[结果]荧光显微镜下观察到pEGFP-N1-IL-24可在B16细胞中表达;生物显微镜下显示转染IL-24基因的B16细胞皱缩、成团;AO/EB法检测显示转染IL-24的B16细胞核染色质着橘黄色或橙红色,并呈固缩状;MTT比色法显示IL-24明显抑制B16细胞的生长,与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05).[结论]外源性IL-24基因在体外对小鼠黑色素瘤B16细胞有显著的诱导凋亡和抑制增殖的作用.

蛋白激酶C抑制剂CJ9111对小鼠B_(16)黑色素瘤细胞肺转移的影响

肿瘤转移是个多步骤的连续过程。瘤细胞从原发部位扩散，浸润细胞外基质，穿透血管壁，在血管内聚积，附着于血管内皮等一系列过程形成转移灶。所有这些过程都与肿瘤细胞的粘附特性有关。自从发现佛波酯有促进肿瘤转移的作用后，表明了蛋白激酶C(PKC)在调控肿瘤转移的过程中发挥重要作用．PKC的活性与肿瘤转移呈正相关，且某些PKC抑制剂能抑制肿瘤的转移。

氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16体内转移的作用及相关机制研究

目的:研究不同剂量氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16转移的作用,并探讨其作用机制。方法:选取64只C57BL/6J小鼠,将黑色素瘤髙转移细胞株B16接种在小鼠腹股沟皮下(2×106个/只)。将接种后的小鼠以随机数字表法分为对照组和氨氯地平高、中、低剂量治疗组,对照组小鼠仅给予0.9%氯化钠注射液;治疗组小鼠给予不同剂量的氨氯地平治疗,分别为1 mg/kg(低剂量组)、3 mg/kg(中剂量组)和10 mg/kg(高剂量组)。观察各组小鼠肿瘤生长情况及身体情况;观察各组小鼠肿瘤肺转移情况,计算肺转移的结节及肿瘤抑瘤率;采用免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中白细胞介素8(IL-8)蛋白表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠肿瘤组织中IL-8的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16的自发性肺转移有显著的抑制作用;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8蛋白表达均明显减弱,且随氨氯地平剂量的增加而减弱;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8的mRNA的表达明显低于对照组,且IL-8的mRNA的表达随氨氯地平剂量的增加而减弱。结论:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16有一定的抑瘤和抑制肺转移作用,其作用可能与影响IL-8的表达有关。

肿瘤疫苗Ad-hDCT抑制黑色素瘤B16细胞在C57BL／6小鼠脑内增殖

目的观察肿瘤疫苗Ad-hDCT预防接种对移植到C57BL/6小鼠脑实质内的黑色素瘤B16细胞增殖的抑制作用。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为2组:Ad-BHG对照组(20只)和Ad-hDCT免疫接种组(20只)。借助小鼠脑立体定位仪行B16细胞脑内注射;采用大体观察、流式细胞术、石蜡切片HE染色及冷冻切片CD8及F4/80抗体免疫组织化学染色等方法观察肿瘤细胞的增殖情况。结果 Ad-hDCT肌肉注射后7d,小鼠外周血内hDCT特异性CD8+INF-γ+T细胞数量显著增多(P<0.01,与Ad-BHG对照组相比)。脑内移植B16细胞后16d,Ad-BHG对照组小鼠全部死亡,而Ad-hDCT免疫组小鼠长期存活率达60%,且未见行为学异常。光镜观察,Ad-BHG组小鼠脑内B16细胞生长旺盛,移植后3d可见明显肿瘤细胞团,移植后7d脑实质内可见较大的瘤块;Ad-hDCT组小鼠脑内B16细胞的增殖被显著抑制,未见瘤块形成。免疫组织化学染色结果提示,Ad-hDCT组小鼠脑内移植B16细胞后可诱导大量CD8+T细胞进入肿瘤区。同时,Ad-hDCT组小鼠脑组织内活跃的小胶质细胞显著增多。结论肿瘤疫苗Ad-hDCT能有效刺激抗原特异性细胞毒T细胞免疫反应,此类T细胞能够到达肿瘤区,发挥识别、杀伤作用,抑制黑色素瘤B16细胞在C57BL/6小鼠脑内增殖。

青蒿素类药联合紫杉醇对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

目的观察青蒿琥酯(ATS)、双氢青蒿素(DHA)和紫杉醇(Taxol)及ATS联合Taxol对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用,评价各组药物对小鼠黑色素瘤B16细胞的杀伤作用,初步探讨ATS与Taxol联合给药对小鼠黑色素瘤B16细胞是否有协同增效作用。方法采用CCK-8法检测ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞作用24 h和48 h的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC_(50))值;检测ATS联合Taxol不同配比AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h的抑制作用。运用质量作用中效定理和药物合并指数定理分析两药联合是否具有协同增效作用。结果 ATS、DHA和Taxol单药作用于小鼠黑色素瘤B16细胞的IC_(50)值,在24 h时,分别为126.56,86.09,3.27μmol·L^(-1);在48 h时,分别为1.36,15.11,0.97μmol·L^(-1)。ATS联合Taxol 3个浓度组AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h,联合用药合并指数(CI)均小于1。结论 ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用随着药物浓度和时间的增加而明显增加,呈剂量和时间依赖性。青蒿琥酯联合紫杉醇抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖,有良好的协同增效作用。

腺病毒介导的LacZ基因在B16小鼠黑色素瘤细胞中的表达

目的 观察腺病毒介导的LacZ基因转移在B1 6细胞的转导效率。方法 腺病毒介导的LacZ基因转导B1 6细胞。结果 当MOI为 50～ 1 0 0 ,即可获得较高的转导效率 ,达 90 %± 1 %。结论 腺病毒介导的基因转移在B1 6细胞能获得较高的转导效率和目的基因的有效表达。提示腺病毒载体作为一种高效的基因转移载体 。

老瓜头生物总碱抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及促凋亡作用的研究

目的研究老瓜头生物总碱对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制与促进凋亡的作用。方法采用小鼠黑色素瘤B16细胞,MTT法检测老瓜头生物总碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、Caspase-3和Caspase-8活性检测,观察老瓜头生物总碱诱导细胞凋亡的作用和机制。结果 MTT检测显示老瓜头生物总碱抑制B16细胞的增殖,呈现时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72h的IC50分别为0.97、0.98、0.16mg·L^(-1);选用浓度0.25、0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h,经DNA Ladder检测出现阶梯状DNA Ladder,片段100~200bp,呈现细胞凋亡裂解;0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h后Rhodamine 123染色与空白对照组相比显示荧光降低,且随浓度增加,荧光降低增加;凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8活性增强,0.5、1mg·L^(-1)老瓜头生物总碱药物组与对照组相比有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。结论老瓜头生物总碱可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡,可通过增强凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8活性诱导凋亡。

鸡爪皮胶原多肽对蘑菇酪氨酸酶及B16黑色素瘤细胞的作用

研究分子质量低于3 kDa鸡爪皮胶原多肽对蘑菇蘑菇酪氨酸酶的抑制及对小鼠B16黑色素瘤细胞黑色素合成的影响。以L-多巴为底物,研究胶原肽对蘑菇酪氨酸酶抑制作用及抑制动力学。然后采用B16黑色素瘤细胞验证提取鸡爪皮胶原多肽的安全性及对黑色素合成影响的效果。结果表明,分子质量低于3 kDa的鸡爪皮胶原多肽抑制蘑菇酪氨酸酶的IC50值为0.570 mg/mL,抑制属于非竞争性抑制,米氏常数Km和抑制常数Ki分别为24.68μmol/mL和10.76 mg/mL。鸡爪皮胶原多肽在0~200μg/mL的质量浓度范围内对细胞的增殖活性没有影响,而且能够有效地抑制细胞黑色素的生成。

rhIL-24对黑色素瘤B16细胞的体内外抑瘤作用

目的研究重组人白细胞介素24(rhIL-24)及真核表达基因重组质粒pcDNA3·0-hIL-24对黑色素瘤B16细胞(B16细胞)及其荷瘤小鼠体内外抑肿瘤作用。方法用rhIL-24蛋白作用于小鼠B16细胞,检测其对B16细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用,并用rhIL-24蛋白及pcD-NA3·0-hIL-24治疗荷瘤小鼠。结果rhIL-24蛋白对体外培养的B16细胞具有显著的抑制生长和诱导凋亡作用,rhIL-24蛋白及pcDNA3·0-hIL-24对C57/BL6小鼠体内形成的恶性黑色素瘤具有明显的抑瘤作用。结论rhIL-24蛋白具有生物活性,他及真核表达重组质粒对B16细胞及其小鼠种植瘤生长有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞凋亡及促进其分化。

组胺对C57BL/6小鼠B16黑色素瘤转移行为的影响

背景与目的:肿瘤生物治疗中微血管壁通透性是大分子抗体偶联药物进入瘤体的主要屏障。组胺可通过增加微血管壁通透性和组织液的生成促进抗体偶联物在肿瘤局部的富集。本研究观察组胺所致微血管壁通透性的增加和组织液的生成增多是否会增加肿瘤血行及/或淋巴的转移。方法:采用瘤细胞悬液接种法将小鼠黑色素瘤细胞B16注入小鼠左上肢腋部皮下,建立C57BL/6小鼠荷瘤模型。实验组接种第6天起,背部皮下注射300mg/kg组胺,隔日一次,共5次,对照组注射等体积生理盐水。组织化学方法检测肿瘤细胞在各脏器的转移情况。分别用Studentt-test和四格表资料确切概率法分析组胺对肿瘤细胞增殖和转移的作用。结果:接种成瘤率100%。300mg/kg组胺隔日一次皮下注射能明显抑制肿瘤的生长,实验组与对照组瘤重分别为(5.26±1.55)g和(6.96±1.31)g,二者间差异有统计学意义(P<0.01)。实验组与对照组淋巴结转移率分别为33.3%和75.0%,血行转移率分别为25.0%和75.0%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:组胺能够抑制C57BL/6小鼠B16黑色素瘤的血行和淋巴转移,该抑制作用部分与其抑制瘤细胞的增殖有关。

全身放射线照射对B16F10黑色素瘤小鼠的影响

目的观察全身放射线照射(TBI)对B16F10黑色素瘤小鼠移植肿瘤生长及小鼠存活的影响。方法建立C57BL/6小鼠B16F10黑色素瘤移植肿瘤模型,采用不同剂量分别对小鼠进行TBI,观察小鼠移植肿瘤的生长和小鼠的存活情况;检测放疗后小鼠外周血白细胞水平。结果不同剂量TBI对各组小鼠肿瘤面积及存活率无影响(P均>0.05)。给予7 Gy TBI 10 d后,B16F10荷瘤小鼠外周血白细胞水平下降(P<0.05)。结论 TBI不影响B16F10黑色素瘤小鼠移植肿瘤生长及荷瘤小鼠的生存;7 Gy TBI可改变荷瘤小鼠外周血白细胞水平,有利于肿瘤免疫治疗。

髓清丸对裸小鼠黑色素瘤B_(16)自发性肺转移影响的研究

目的研究中药活血化瘀复方瘀毒清对肿瘤生长和转移的影响。方法采用BALB/C无胸腺裸小鼠右侧腋窝皮下接种造成黑色素瘤B16自发转移模型,观察小鼠实体瘤瘤重抑瘤率、肿瘤平均直径倍增时间、肺部转移率、淋巴结转移等指标的变化。结果瘀毒清高、低剂量组的瘤重均较对照组小,尤以低剂量组明显,抑瘤率达到41.95％;瘀毒清高、低剂量组的肿瘤平均直径倍增时间均较对照组延长,瘀毒清高、低剂量组的肺部转移结节均较对照组少,转移率也较对照组低;同侧和对侧腋窝淋巴结重量瘀毒清高、低剂量组均较对照组小。结论瘀毒清对黑色素瘤B16有一定的抑瘤作用和一定的抗转移的作用。

肝脂素对小鼠S37肉瘤与B16黑色素瘤的抗肿瘤作用

目的 :探讨肝脂素 (Heplipin)对S37和B16两肿瘤细胞株移植瘤的生长抑制作用。方法 :小鼠S37肉瘤和B16黑色素瘤移植瘤在高、中、低剂量 (每天分别为 30 0 0、180 0、110 0mg kg)肝脂素胃饲为治疗组 ,环磷酰胺 (CTX)2 0mg(kg 天 )和生理盐水作为两对照组。比较抑瘤率、癌周边部血管数 ,总肿瘤面积中坏死区所占比例。结果 :肝脂素对S37肉瘤和B16黑色素瘤的抑瘤率分别为大剂量 :75 .1%和 47.0 %、中剂量 :6 9.7%和 32 .1%、小剂量 :6 1.7%和 13.0 % ,显示出明显的剂量效应关系 ,与生理盐水对照组相比有显著性差异。在S37肉瘤荷瘤小鼠的实验中 ,组织学观察发现 ,肝脂素用药组肿瘤周边部单位面积内血管数明显少于阴性对照组和CTX组 ;肝脂素治疗组的肿瘤坏死面积明显大于对照组。结论 :肝脂素可明显抑制小鼠S37肉瘤和B16黑色素瘤的生长 ,其抗肿瘤机制可能与抑制肿瘤新生血管的形成 。