甘草查尔酮A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖机制研究

目的研究甘草查尔酮A抑制B16F10细胞增殖机制。方法 SRB法检测甘草查尔酮A对B16F10细胞增殖影响,Giemsa染色法观察细胞形态变化,比色法检测B16F10细胞内、外黑色素含量,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率,流式细胞术测定细胞周期分布,Q-PCR法检测细胞凋亡相关基因B淋巴细胞-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白(Cyclin E2)和细胞周期蛋白依赖性激酶-2(CDK2)的mRNA表达。结果甘草查尔酮A能有效抑制B16F10细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性;随药物浓度增加,细胞增殖速度降低,细胞形态由树突状变为固缩圆球状,并伴有黑色素颗粒物出现,且细胞内、外黑色素含量呈浓度依赖性增加趋势,甘草查尔酮A能使细胞阻滞在G1期,在低浓度时,诱导细胞分化,高浓度时,诱导细胞凋亡;同时,甘草查尔酮A下调凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比率,抑制周期相关蛋白Cyclin E2、CDK2的mRNA表达。结论甘草查尔酮A抑制B16F10细胞增殖机制可能是通过使B16F10细胞G1期阻滞,进而诱导细胞分化和凋亡。

光甘草定诱导小鼠黑色素瘤B16F10细胞凋亡的机制研究

通过体外和体内模型研究光甘草定对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖的抑制作用及其分子机制。B16F10细胞经光甘草定处理后可抑制其增殖,且具有浓度依赖性;诱导B16F10细胞凋亡,观察到明显的细胞凋亡状态,细胞内凋亡相关基因及蛋白Bax表达显著上升,Bcl-2则表达下调。进一步的研究发现,经光甘草定处理后的B16F10细胞中,培养基中葡萄糖含量升高,而ATP含量、乳酸生成均降低;细胞内糖酵解相关基因及蛋白HK2、Ldha表达下调。同时,经光甘草定处理后,移植瘤小鼠的肿瘤组织生长受到明显抑制,肿瘤组织内细胞凋亡率显著升高,Bax表达明显上升,而Bcl-2、HK2和Ldha则表达均下调。说明,光甘草定在一定浓度范围内抑制了小鼠黑色素瘤B16F10细胞的增殖,诱导细胞凋亡,而其诱导细胞凋亡的机制可能与调控糖酵解相关基因的表达相关。

大蒜素对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖和迁移能力的影响

旨在研究不同浓度的大蒜素对色素形成关键基因小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)表达的影响,以及对B16F10细胞增殖和迁移的作用,为家养宠物及畜牧行业中的动物黑色素瘤治疗提供一个新思路。将添加不同浓度大蒜素的黑色素瘤B16F10细胞分为对照组(0μg·mL^(-1))和试验组(5、10、15、20μg·mL^(-1))。采用qRT-PCR检测B16F10细胞中MITF mRNA的表达水平;Western blot检测MITF蛋白质的表达水平。通过吸光度值计算细胞的增殖率,进而确定不同浓度大蒜素对细胞增殖的抑制情况。不同浓度大蒜素处理B16F10细胞42 h后,采用细胞划痕评价细胞迁移能力。结果显示,随大蒜素浓度升高,B16F10细胞中色素形成关键基因MITF mRNA的表达量逐渐降低;Western blot结果显示,MITF蛋白表达量呈浓度依赖性降低。在细胞增殖检测中,发现5、10、15、20μg·mL^(-1)大蒜素对B16F10细胞的增殖能力具有显著的抑制效果(P<0.001),且抑制率随浓度升高而加强。细胞划痕结果显示,大蒜素浓度在10、15、20μg·mL^(-1)时对细胞的迁移抑制较大。综上表明,大蒜素能够影响黑色素瘤B16F10细胞特异性标记基因MITF的表达,并抑制了黑色素瘤B16F10细胞的增殖和迁移。

甘草查尔酮A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和诱导凋亡

为探讨甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解表型和凋亡的影响。采用磺酰罗丹明B法检测甘草查尔酮A对B16F10细胞增殖影响的方法,比色法检测B16F10细胞外葡萄糖和乳酸含量,生物发光法检测细胞内ATP含量,Giemsa和Hoechst33258染色法观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果显示,甘草查尔酮A能有效抑制B16F10细胞增殖,呈现浓度依赖性和时间依赖性。随药物浓度的增加,B16F10细胞摄取葡萄糖能力减弱,细胞外乳酸含量和细胞内ATP含量明显降低。同时,细胞出现典型凋亡形态,细胞体积逐渐缩小,胞核皱缩,碎裂,呈现致密颗粒状荧光,且细胞凋亡率明显增加。由此可知,甘草查尔酮A能抑制B16F10细胞糖酵解表型和诱导细胞凋亡。

白芨水提物对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖与迁移的影响

目的探讨白芨水提物对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖与迁移的影响。方法使用水提醇沉法提取白芨粗多糖,同时保留有机小分子物质部分;采用CCK8试剂检测不同浓度的两部分提取物对B16F10细胞存活率及增殖的影响;细胞划痕检测提取物对B16F10细胞迁移的影响,以及ELISA法检测迁移相关蛋白的表达情况。结果与对照组相比,白芨水提物均能降低B16F10细胞的存活率和增殖能力,并与浓度呈正相关,其中多糖和有机小分子物质的半数抑制浓度(IC_(50))分别为51.14μg/mL和40.61μg/mL;此外,白芨水提物对细胞迁移也具有抑制作用,并能下调MMP-2和MMP-9的表达,与对照组相比,中、高浓度的下调作用具有显著性差异。结论白芨水提物能够抑制B16F10细胞的增殖与迁移能力,其作用可能通过下调迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达有关。

小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株的建立与生物学特性分析

目的:构建表达香菇珊瑚红色荧光蛋白(discosomasp red fluorescent protein,DsRed)的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株,并检测其生物学特性。方法:用Gen EscortTMⅡ转染试剂将p DsRed质粒导入小鼠黑色素瘤B16F10细胞,G418加压培养联合极限稀释法建立稳定、高水平表达DsRed的单克隆细胞系。FCM检测B16F10和B16F10-Red细胞的细胞周期。比较B16F10-Red和B16F10细胞的克隆球形成能力和小鼠体内致瘤能力。结果:稳定表达DsRed的小鼠黑色素瘤B16F10-Red细胞株基本保持了其亲代细胞的特征,能在C57BL/6小鼠腹部皮下形成肿瘤并继续生长和转移。结论:B16F10-Red细胞株构建成功,其移植瘤模型成瘤率和转移情况同B16F10肿瘤相比无明显差别。

全反式维甲酸对小鼠黑色素瘤B16F10细胞生物学行为的影响

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外增殖、迁移、凋亡、致瘤性的影响及其初步作用机制。方法采用MTT法检测ATRA对小鼠黑色素瘤细胞B16F10和小鼠成纤维细胞L929增殖能力的影响。显微镜下观察给药后两种细胞的形态变化,应用划痕实验和Transwell实验检测ATRA对B16F10细胞迁移能力的影响,分别采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI染色观察B16F10细胞凋亡情况,JC-1染色实验检测B16F10细胞线粒体膜电位,荧光分光光度计检测B16F10细胞中Caspase-9、Caspase-3的活化情况,利用体内成瘤实验观察ATRA对B16F10细胞致瘤性的影响。结果 MTT结果显示ATRA呈浓度依赖性地抑制B16F10细胞和L929细胞增殖,但B16F10细胞的存活率明显低于L929细胞的存活率(P<0.05);分别以低、中、高3个浓度(6.25、16、40μmol/L)的ATRA处理细胞24 h后,显微镜下可见B16F10细胞在中浓度时呈凋亡样改变,高浓度时细胞基本死亡,丧失正常形态;而L929细胞形态仅在高浓度时发生显著变化;划痕实验和Transwell实验提示B16F10细胞的体外迁移能力在中浓度即受到明显抑制(P<0.05);继续以中浓度(16μmol/L)的ATRA作用B16F10细胞24 h,DAPI染色可见细胞核裂解,甚至可见凋亡小体;Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪测得细胞凋亡率为(37.27±4.42)%;JC-1染色实验提示线粒体膜电位明显降低;荧光分光光度计测得给药后Caspase-9、Caspase-3显著被活化,活性分别增加了(1.54±0.00)、(3.09±0.01)倍(P<0.05);成瘤实验结果显示ATRA处理后的B16F10细胞致瘤性显著降低(P<0.01),甚至消失。结论 ATRA能显著抑制B16F10细胞体外增殖、迁移能力,并能通过降低线粒体膜电位,活化Caspase-9、Caspase-3蛋白诱导细胞凋亡,进而抑制B16F10致瘤性。

新狼毒素A抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖酵解和迁移

目的研究新狼毒素A(Neochamae jasmin A,NCA)在体外对小鼠黑色素瘤B16F10细胞糖代谢及迁移的影响。方法采用黄酰罗丹明B(SRB)法检测NCA对细胞增殖的影响;采用划痕实验检测NCA对细胞迁移的影响;利用试剂盒检测NCA对B16F10细胞中乳酸(LD)水平、葡萄糖摄取量和ATP含量的改变及对己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响;利用RT-PCR法检测糖酵解及迁移相关基因的表达。结果NCA显著抑制小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和细胞划痕愈合,下调MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,上调TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达;下调GLUT1、PKM2、LDHA mRNA的表达,浓度依赖性的抑制ATP的产生和乳酸的释放,减少葡萄糖的摄取,降低糖酵解关键酶HK、PK、LDH的活性。结论推测NCA抑制B16F10细胞增殖和迁移可能与调节肿瘤细胞糖酵解有一定相关性。

甘草查尔酮A对小鼠黑色素瘤B16F10细胞体外迁移能力的影响

目的：探讨甘草中黄酮类化合物甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对小鼠黑色素瘤B16F10细胞株体外迁移能力的影响。方法：取对数生长期B16F10细胞按8 000个/孔接种于96孔板中,磺酰罗丹明B（SRB）法测定LCA（0,5,10,15,20μmol·L-^1）作用24 h对细胞活力影响;取对数生长期B16F10细胞按1×10^5个/孔接种于24孔板中,划痕实验检测LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h细胞体外迁移能力;取对数生长期B16F10细胞按5×10^5个/瓶接种于细胞培养瓶中,LCA（0,5,10,15μmol·L^-1）作用24 h后,明胶酶谱法检测细胞培养上清基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）活性;ELISA检测MMP-2和MMP-9蛋白含量;实时荧光定量PCR（Q-PCR）和半定量PCR（RT-PCR）法检测MMP-2和MMP-9基因表达水平。结果：5-15μmol·L-1的LCA对小鼠黑色素瘤B16F10细胞作用24 h,对细胞活力没有显著的影响;划痕试验结果说明,LCA可剂量依赖性地降低B16F10细胞的体外迁移能力;明胶酶谱结果显示,LCA可明显抑制B16F10细胞分泌MMP-2和MMP-9的活性;ELISA试验表明,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9蛋白表达;Q-PCR和RT-PCR结果显示,LCA可明显降低MMP-2和MMP-9的mRNA基因表达量。结论：甘草查尔酮A能抑制B16F10小鼠黑色素瘤细胞体外转移侵袭作用,其机制可能与抑制MMP-2和MMP-9表达有关。

鞘氨醇-1-磷酸受体激动剂芬戈莫德对黑色素瘤B16-F10增殖和迁移的影响及机制

目的观察芬戈莫德对黑色素瘤B16-F10细胞的增殖和自噬相关蛋白的影响。方法将含有不同浓度芬戈莫德(0、5、10、15μM)的DMEM培养基培养B16-F10细胞24 h,利用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测各组细胞活力;划痕实验检测用药后B16-F10细胞的迁移能力;台盼蓝染色检测细胞的死活;利用免疫荧光实验和免疫印迹实验检测用药后细胞内自噬相关通路蛋白的表达情况。结果芬戈莫德可显著抑制B16-F10细胞的活力和增殖能力,并呈现剂量依赖性;芬戈莫德减弱B16-F10细胞的迁移能力并引起细胞死亡;免疫荧光和免疫印迹实验显示,与Control组相比,FTY-720组的细胞自噬通路相关蛋白LC3、Beclin1和P62的表达均出现改变(P<0.05)。结论芬戈莫德可抑制黑色素瘤B16-F10细胞的增殖并引起细胞损伤,其机制可能与芬戈莫德引起黑色素瘤B16-F10细胞的自噬有关。

胡桃醌对小鼠黑色素瘤细胞B16F10体内迁移的影响

目的:研究胡桃醌对小鼠黑色素瘤细胞B16F10体内迁移的影响。方法:采用小鼠B16/F10黑色素瘤人工肺转移模型研究胡桃醌对肿瘤细胞血道转移的作用。结果:与溶剂对照组相比,4.5、3、1.5和0.75mg/kg胡桃醌组显著减少小鼠黑色素瘤B16F10血道转移(P<0.05),其抑制率分别为27.30%、55.35%、31.52%和25.34%;3mg/kg胡桃醌与阳性对照组相比,抑瘤率无统计学差异(P>0.05)。结论:胡桃醌可抑制小鼠黑色素瘤B16F10血道转移。

三肽化合物酪丝缬肽对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10侵袭和转移的抑制作用

背景与目的:三肽化合物酪丝缬肽(tyroservaltide,YSV)对实验性肝癌具有明显抑制作用,本研究观察YSV对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10侵袭和转移的抑制作用。方法:MTT法检测YSV对B16-F10的细胞毒作用;利用基质胶Matrigel研究YSV对细胞粘附能力的影响;用Transwell小室侵袭模型研究YSV对肿瘤细胞侵袭能力的改变;经C57/BL6小鼠尾静脉注射B16-F10细胞,建立人工肺转移模型,观察YSV对B16-F10肺转移的影响;免疫组化方法观察YSV对细胞间粘附分子(intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1)在肺组织中表达水平的影响。结果:100μg/mlYSV作用48h对B16-F10细胞的增殖抑制率为24.36%;作用24h对B16-F10细胞在Matrigel胶上的粘附抑制率为36.51%;10μg/mlYSV作用48h对B16-F10细胞的侵袭抑制率为36.53%;640μg·(kg·d)-1YSV抑制B16-F10的肺转移,抑制率为62.21%;YSV组ICAM-1的组织量明显少于生理盐水组。结论:YSV具有抑制B16-F10生长和侵袭转移的作用。

全身放射线照射对B16F10黑色素瘤小鼠的影响

目的观察全身放射线照射(TBI)对B16F10黑色素瘤小鼠移植肿瘤生长及小鼠存活的影响。方法建立C57BL/6小鼠B16F10黑色素瘤移植肿瘤模型,采用不同剂量分别对小鼠进行TBI,观察小鼠移植肿瘤的生长和小鼠的存活情况;检测放疗后小鼠外周血白细胞水平。结果不同剂量TBI对各组小鼠肿瘤面积及存活率无影响(P均>0.05)。给予7 Gy TBI 10 d后,B16F10荷瘤小鼠外周血白细胞水平下降(P<0.05)。结论 TBI不影响B16F10黑色素瘤小鼠移植肿瘤生长及荷瘤小鼠的生存;7 Gy TBI可改变荷瘤小鼠外周血白细胞水平,有利于肿瘤免疫治疗。

GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10侵袭和转移的抑制作用

目的:观察GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞侵袭和转移的抑制作用,为开发具有我国独立的知识产权、针对性强的抗癌小肽类药物奠定临床前的实验基础。方法:MTT法检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的细胞毒作用;应用C57BL/6J小鼠,尾静脉注射小鼠黑色素瘤B16-F10细胞建立人工肺转移模型,通过免疫组化分析检测GHGKHKNK八肽对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞肺转移瘤形成的影响。结果:1×10-4mol.L-1GHGKHKNK八肽作用48h对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的增殖抑制率为17.4%;高剂量组(500μg.kg-1.d-1)GHGKHKNK八肽明显抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞的肺转移。结论:GHGKHKNK八肽具有抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和侵袭转移的作用。

GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10转移及其机制的实验研究

目的：探讨GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞转移及其机制。结果：1．不同剂量的GHGKHKNK八肽对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO的克隆形成均有抑制作用，与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）2．不同剂量的GHGKHKNK八肽在体外作用24h后可以显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞的侵袭，穿膜细胞数与对照组比较具有显著性差异（P〈0．05）。3．GHGKHKNK八肽在24h时5．5×10^-4mol／L、5．5×10^-5mol／L、5．5×10^-6mol／L对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10黏附抑制率与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）。4．经GHGKHKNK八肽作用后，小鼠恶性黑色素瘤细胞ICAM-1、LN—R表达降低表达降低，E-cadhesion表达增强。与对照组比较明显差异P〈0．05．5．GHGKHKNK八肽对B16一F10人工肺转移的抑制作用的实验结果显示：GHGKHKNK八肽各剂量组和环磷酰胺组肺转移灶的平均数目与生理盐水组照组相比较有明显差异（P〈0．05）：GHGKHKNK八肽500ug／kg／d、50ug／kg／d剂量组与环磷酰胺组对比有显著性差异（P〈0．05）。结论：i．GHGKHKNK八肽在体外能抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的体外克隆形成能力，能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10细胞的侵袭。提示HGKHKNK八肽可能通过抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的侵袭和增殖而抗肿瘤细胞的转移。2．GHGKHKNK八肽抑制小鼠小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO与人工基底膜的黏附，提示GFIGKHKNK八肽可能通过抑制细胞与基底膜的黏附来抑制肿瘤细胞的转移。3．GHGKHKNK八肽能够下调细胞间黏附因子1（ICAM-1）和层黏连蛋白受体（LN—R）在细胞内的表达，提示GHGKHKNK八肽可能通过抑制细胞间黏附因子的表达而抑制肿瘤细胞的转移。4．GHGKHKNK八肽能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10在小鼠体内的肺转移。

茶多酚对小鼠黑色素瘤细胞B16F10体外增殖和迁移的影响

【目的】研究茶多酚对小鼠黑色素瘤细胞B16F10增殖和迁移的影响,以期为将茶多酚用于肿瘤的治疗提供依据。【方法】用不同浓度茶多酚(0.05、0.10和0.15 g/L)处理B16F10细胞,不处理(0 g/L)的作为对照组,采用CCK-8法检测各组细胞生长情况,计算生长抑制率;不同浓度茶多酚处理细胞24 h后,采用划痕试验评价细胞的迁移能力;通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测B16F10细胞中小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)和黑色素形成限速酶(tyrosinase,TYR)mRNA和蛋白的表达水平。【结果】与对照组相比,0.05 g/L茶多酚对B16F10细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05),0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的增殖能力有极显著的抑制作用(P<0.01),且浓度越高,抑制作用越强;0.05、0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的迁移均有极显著的抑制作用(P<0.01);实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,随着茶多酚浓度的升高,MITF和TYR mRNA和蛋白的表达量均呈浓度依赖性降低,与对照组相比,0.05 g/L茶多酚显著降低MITF mRNA和蛋白的表达(P<0.05),0.10和0.15 g/L茶多酚均极显著降低MITF mRNA和蛋白的表达(P<0.01),0.10和0.15 g/L茶多酚均极显著降低TYR mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。【结论】0.10和0.15 g/L茶多酚对B16F10细胞的增殖和迁移均有明显的抑制作用,并且能降低黑色素生成基因MITF和TYR的表达,表明茶多酚能抑制黑色素瘤的进展。

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16F1细胞基因表达谱的影响

背景与目的:本实验室已证明蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(snake venom cystatin,sv-cystatin)具有抗肿瘤侵袭转移作用,为了进一步阐明其分子机制,本研究利用高通量的基因芯片技术探讨sv-cystatin基因转染对小鼠黑色素瘤细胞(B16F1)基因表达谱的影响。方法:分别将pcDNA3.1/sv-cystatin及空载体pcDNA3.1转染B16F1细胞,建立稳定转染的B16F1/sv-cystatin及B16F1/pcDNA3.1细胞株,提取总mRNA,应用高通量的基因芯片技术检测差异表达基因,半定量RT-PCR法分别验证5个上调和5个下调的差异表达基因。结果:B16F1细胞经转染sv-cystatin后,共检测了1218个基因,其中有45个差异表达基因,21个基因表达上调(Ratio>3),24个基因表达下调(Ratio<0.5),这些基因的功能涉及细胞粘附迁移、细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等方面。10个差异表达基因的RT-PCR验证结果与基因芯片分析结果相符。结论:Sv-cystatin不仅具有抑制细胞外基质的作用,而且还具有细胞免疫调节、增殖分化与凋亡、基因转录和细胞内信号转导等多种生物学功能。

双脱甲氧基姜黄素对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin)对黑色素瘤B16-F10细胞增殖与凋亡的影响。方法:双脱甲氧基姜黄素作用于B16-F10细胞24 h,MTT法检测双脱甲氧基姜黄素对B16-F10细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测双脱甲氧基姜黄素对细胞周期、细胞凋亡的影响。在C57BL/6小鼠上面建立黑色素瘤模型,采用静脉给药,观察其对黑色素瘤模型的增殖影响。用蛋白免疫印迹法检测双脱甲氧基姜黄素在细胞和组织层面对抗细胞凋亡蛋白BCL-1的表达影响。结果:双脱甲氧基姜黄素可以明显抑制B16-F10细胞的增殖。双脱甲氧基姜黄素诱导B16-F10细胞凋亡,抑制细胞周期于S期。采用静脉注射给药,双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤的生长。在细胞和组织层面,可以抑制抗凋亡蛋白BCL-1的表达。结论:双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤B16-F10细胞的增殖,可能与其促进细胞凋亡有关;双脱甲氧基姜黄素诱导黑色素瘤B16-F10细胞凋亡可能与抑制抗凋亡单位BCL-1有关。

lncRNA CDKN2B-AS1对黑色素瘤B16-F10细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨长链非编码RNA CDKN2B反义RNA1(long non-coding RNA CDKN2B-antisense RNA 1,lncRNA CDKN2B-AS1)通过靶向miR-7-5p影响黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为的影响。方法:选用黑色素瘤B16-F10细胞,构建shRNA CDKN2B-AS1载体并转染到B16-F10细胞,实验分为对照组、sh-CDKN2B-AS1组、miR-7-5p mimics组、miR-7-5p inhibitor组。用RT-PCR检测转染后B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平,用克隆形成实验和MTT法检测克隆形成数及细胞的增殖能力,用划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用荧光素酶报告基因实验检证CDKN2B-AS1和miR-7-5p相互间靶向关系。用RT-PCR和Western blotting检测转染miR-7-5p mimics、inhibitor后B16-F10细胞中miR-7-5p和Ki67、cleaved caspase-3、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Twist1蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,sh-CDKN2B-AS1组B16-F10细胞中CDKN2B-AS1表达水平显著下调(P<0.01),细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降(均P<0.01)。荧光素酶报告基因实验证明CDKN2B-AS1与miR-7-5p存在靶向作用关系。sh-CDKN2B-AS1组与miR-7-5p mimics组细胞中miR-7-5p和cleaved caspase-3、E-cadherin水平均明显上调(均P<0.05),Ki67、N-cadherin、Twist1水平明显下调(均P<0.05)。结论:CDKN2BAS1通过靶向miR-7-5p促进黑色素瘤发展,干扰CDKN2B-AS1可抑制黑色素瘤B16-F10细胞的恶性生物学行为。

GnRH/M2融合蛋白致敏DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的抑制

目的:制备促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)与M2的融合蛋白(GnRH/M2),研究由该融合蛋白致敏而成的DC疫苗对黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:构建表达载体p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2质粒,该质粒转化的工程菌在乳糖的诱导下,融合蛋白ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵体形式表达,经超声破碎、洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2释放出来,并通过DEAE-52阴离子交换层析进行分离。将此融合多肽致敏DC获得DC疫苗。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤模型,按接种疫苗不同,分为:环磷酰胺组(CTX)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC组(GDC)、肿瘤细胞裂解物致敏DC组(BDC)、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+环磷酰胺组(GDCTX)、肿瘤细胞裂解物致敏DC+环磷酰胺组(BDCTX)和生理盐水组(NS),观察GnRH/M2疫苗对模型小鼠的移植瘤生长、CTL杀伤能力和T细胞增殖的作用。结果:成功构建p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2质粒并高效表达融合蛋白。GDC组移植瘤生长明显慢于NS组(P<0.05),且与BDC组相似(P>0.05);GDCTX组抑瘤效果虽进一步提高,但与CTX组相比差异无统计学意义(P>0.05)。各实验组对B16F10细胞的杀伤作用和对T细胞增殖作用均优于阴性对照组(P<0.05或P<0.01),且GDC组与BDC组间差异不显著(P>0.05)。结论:初步证明融合多肽GnRH/M2致敏的DC疫苗能有效抑制黑色素瘤B16F10细胞小鼠移植瘤的生长。