墨旱莲乙醇提取物动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)有激活作用的墨旱莲(旱莲草),研究其动物致色素作用和对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成及相关基因犤TYR、TYR相关蛋白(TRP-1/2)mRNA犦表达的影响。方法以棕色豚鼠为动物模型,用Schmorl法染色,计数含黑素的细胞;用多巴(DOPA)-氧化酶染色,计算每100个基底细胞中DOPA阳性细胞数。培养的小鼠B16黑素瘤细胞以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、氢氧化钠(NaOH)法和体外氧化DOPA反应方法分别测定细胞的增殖活性、黑素生成量及TYR活性;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TYR及其TRP-1/2基因的表达。结果墨旱莲乙醇提取物可使豚鼠表皮基底层中含黑素颗粒细胞增多,使豚鼠表皮内DOPA阳性细胞增多(P<0.05);具有促进小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及TYR活性作用(P<0.05),对细胞TYR基因有上调作用,而对TRP-1/2mRNA的表达无明显作用。结论墨旱莲乙醇提取物具有促进黑素合成及上调酪氨酸酶基因表达的作用,对白癜风色素恢复有较好应用和开发的前景。

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定不同浓度的复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析。结果复色1号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P>0.05),0.05～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P<0.05),呈现一定的抑制作用;复色1号方在0.001～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A值均有显著性差异(P<0.05),呈剂量依赖性激活作用。在0.001～0.01g/l浓度范围内,复色1号方的最佳激活浓度为0.01g/l。结论复色1号方没有促进小鼠B16黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用。

曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响

目的探讨曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。方法以小鼠B16黑素瘤细胞为受试对象,分别用曲酸寡肽和曲酸对其进行干预,测定细胞增殖率,细胞的酪氨酸酶活性及细胞的黑色素含量。结果曲酸寡肽对细胞形态及数量无显著影响;曲酸寡肽能够有效抑制酪氨酸酶活性,抑制率高于曲酸,但二者之间差异无统计学意义(P>0.05)。曲酸寡肽能够有效抑制黑色素合成,低浓度时抑制率高于曲酸,高浓度时抑制率低于曲酸,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论曲酸寡肽对小鼠B16黑素瘤细胞的形态及数量无明显影响,与曲酸相比,细胞毒性低。低浓度(≤0.01g/L)曲酸寡肽既能有效抑制酪氨酸酶活性,又能有效抑制黑色素的合成,优于曲酸,具有潜在的应用价值。

复方倍他米松注射液对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响

白癜风是一种常见的色素脱失性皮肤病,发病率约为4%,致病因素可能与下列因素有关：黑素细胞自毁、氧化应激、自由基、免疫发病学说、细胞因子、微量元素等。研究表明,8-MOP对B16细胞有一定的增殖作用,糖皮质激素是治疗白癜风的有效药物之一，酪氨酸酶是黑素合成限速酶，其活性与黑素合成呈正相关。

纳米氧化锌对小鼠B16黑素瘤细胞生长和分化的影响

为评价纳米氧化锌(Zn O NPs)在皮肤病治疗和化妆品应用方面的生理毒性,以小鼠B16黑素瘤细胞为细胞模型,研究15、30、90 nm下Zn O NPs对B16细胞的体外生长和分化的影响及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理分别作阴性、阳性对照。结果表明,15、30 nm,体相Zn O NPs处理与B16细胞共培养作用3 d,当Zn O NPs为4μg/m L以下时,Zn O NPs并未明显抑制细胞生长,引起细胞死亡;当Zn O NPs浓度大于8μg/m L时,明显抑制细胞生长。随着Zn O NPs浓度增加,细胞体积变小,细胞间隙变大,黏附性降低,细胞变圆,从培养瓶底脱落死亡。Zn O NPs诱导细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白1(TYRP-1)、酪氨酸相关酶相关蛋白2(TYRP-2)的mRNA表达量升高,导致细胞内酪氨酸酶活性和黑色素生成水平增高,促进了B16黑素瘤细胞的分化。相同Zn O NPs浓度下,15 nm Zn O NPs比30、90 nm Zn O NPs作用明显。

四种含药血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的研究传统民族医学文献中用于治疗白癜风的诃子、牛柑子(即余甘子)、柴胡及药群组合(含木香、胡椒、干姜等)的药物血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用"通法"制备上述药物高、低不同剂量的大鼠含药血清及不含药物的对照血清,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定受试血清对B16B16黑素瘤细胞增殖活性的影响,NaOH细胞裂解法测定黑素合成量,L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响。结果与正常对照组(含10%小牛血清)相比,无药血清对照组对B16黑素瘤细胞的增殖活性无影响(P>0.05);与无药血清对照组相比,除药群组合低剂量组外,其他受试血清均对小鼠B16黑素瘤细胞增殖活性无影响(P均>0.05)。与无药血清对照组相比,柴胡和药群组的高、低剂量组含药血清均对B16黑素瘤细胞黑素合成有促进作用,诃子低剂量、牛柑子高剂量组含药血清具有促进黑素合成的作用(P均<0.05)。与无药血清对照组相比,四种受试药物的高低剂量组含药血清对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性均有激活作用(P均<0.05)。结论四种含药血清除组合低剂量组外,均可不同程度地促进黑素合成,此作用与提高酪氨酸酶活性有一定关系。

补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响

目的探讨中药补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响及意义。方法体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)测定补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT表达的影响,用Transwell小室法检测补骨脂素和女贞子对小鼠B16黑素瘤细胞迁移功能的影响。结果补骨脂素与女贞子用药组迁移到膜下层的每视野细胞个数分别较对照组多(P<0.05),并呈剂量依赖关系;用药组c-KIT m RNA、c-KIT蛋白表达分别比对照组增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论补骨脂素和女贞子可能是通过促进小鼠B16黑素瘤细胞c-KIT的表达而促进其迁移功能,从而对白癜风产生治疗作用。

强脉冲光及5-氨基酮戊酸对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

目的研究强脉冲光(IPL)及5-氨基酮戊酸(5-ALA)对小鼠B16黑素瘤细胞的影响。方法以小鼠B16黑素瘤细胞为实验对象,分为阴性对照组(不加5-ALA,未辐射)、UVA阳性对照组(3、4、5 J/cm2UVA辐射)、5-ALA组(含5 mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育)、IPL组(20、30、40 J/cm2IPL辐射)及5-ALA+IPL组(含5mmol/L 5-ALA的细胞培养液孵育细胞4 h后予20、30、40 J/cm2IPL辐射)。辐射后1 d、2 d、3 d、4 d、5 d以噻唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖情况、NaOH溶解法测定黑素含量、氧化多巴反应法测定酪氨酸酶活性的变化。结果5 mmol/L 5-ALA不影响B16黑素瘤细胞增殖、细胞黑素含量及酪氨酸酶活性。3～4 J/cm2UVA可促进B16黑素瘤细胞增殖,5 J/cm2时细胞增殖受到抑制。3～5 J/cm2UVA可提高酪氨酸酶活性、促进黑素合成,其作用呈剂量依赖性。IPL及5-ALA+IPL可降低黑素含量,5-ALA+IPL的作用较IPL更明显。IPL及5-ALA+IPL对细胞增殖及酪氨酸酶活性无明显影响。结论UVA可提高酪氨酸酶活性,促进B16黑素瘤细胞的黑素合成。IPL及5-ALA+IPL可使B16黑素瘤细胞黑素合成减少,对细胞增殖、酪氨酸酶活性无影响。

鳕鱼皮胶原蛋白多肽的制备及其对小鼠B16黑素瘤细胞的作用

优化鳕鱼皮胶原蛋白的酶解条件以及制备活性多肽酶解液;经超滤得到不同分子量范围的鳕鱼皮胶原蛋白多肽;研究各组分对小鼠B16黑素瘤细胞的生长及黑色素生成的影响。结果表明,鳕鱼皮胶原蛋白多肽制备的最佳酶解条件为:碱性蛋白酶、酶解时间3 h、酶解温度45℃、酶与底物比1∶50(w/w)、pH=9.0;不同分子量范围的鳕鱼皮胶原蛋白多肽对小鼠B16黑素瘤细胞均无毒性作用,并能抑制其黑色素的生成。其中,分子量小于2 000的组分抑制效果最好。

四种含药血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响

目的研究传统医学文献中专治白癜风的常用药物诃子、余甘子、柴胡及药群组合(含木香、胡椒、干姜等)的药物血清对小鼠B16黑素瘤细胞黑素合成及酪氨酸酶活性的影响。方法采用“通法”制备上述药物高、低不同剂量的大鼠含药血清及不含药物的空白血清,以体外培养的小鼠B16黑素瘤细胞为模型,采用MTT法测定各组受试血清对B16细胞增殖活性的影响;NaOH细胞裂解法测定黑素合成量,L-DOPA氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响。结果与正常对照组(含10%小牛血清)相比,除组合低剂量组外,其他受试血清均不影响小鼠B16细胞的增殖活性(P>0.05);与空白血清组相比,柴胡和药群组的高、低剂量组含药血清均对B16黑素瘤细胞黑素合成有促进作用(P<0.05,P<0.01),而诃子低剂量、牛柑子高剂量组含药血清具有促进黑素合成的作用(P<0.05,P<0.01);与空白血清组相比,四种受试药物的高低剂量组含药血清对小鼠B16细胞酪氨酸酶活性均有激活作用(P<0.05,P<0.01)。结论四种受试药物含药血清除组合低剂量组外,均在不影响小鼠B16细胞增殖活性的基础上,表现出不同程度的促进其黑素合成的作用,此作用与提高酪氨酸酶活性有一定关系。

木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤B16细胞的分化及其机制

目的:探讨从中药木鳖子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxylcinnamaldehyde,PHD)对小鼠黑素瘤B16细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法:以10、20、40μmol/L PHD作用B16细胞,设空白对照及福司克林(Forskelin)阳性对照组。磺酰罗丹明(suphrhodamineB,SRB)法检测PHD对B16细胞生长的抑制率,平板克隆集落形成实验检测细胞的克隆形成能力,Giemsa染色观察细胞形态,比色法检测细胞中黑色素含量和酪氨酸酶(tyrosinase,Tyr)活性,划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Western blotting检测Tyr、酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase protein,Trp1)及MAPK信号转导通路中p-P38、pJNK和p-ERK1/2的表达。结果:PHD对黑素瘤B16细胞具有明显的增殖抑制作用,10、20、40μmol/L PHD作用B16细胞48h后,其增殖抑制率与对照组相比明显增加[(12.78±0.87)%、(37.70±2.28)%、(42.17±4.18)%vs 0,P<0.05],20、40μmol/L PHD组增殖抑制率与Forskelin组相比明显增加[(37.70±2.28)%、(42.17±4.18)%vs(22.00±1.13)%,P<0.05]。40μmol/L PHD处理B16细胞24、48、72 h后,B16细胞呈典型分化形态,黑色素含量及Tyr活性与对照组相比均明显增加[(0.097±0.02)、(0.13±0.04)、(0.15±0.05)vs(0.085±0.003);(1.11±0.31)、(1.43±0.05)、(1.67±0.49)vs(0.64±0.10),P<0.05];细胞集落形成能力和迁移能力都明显降低(均P<0.05)。与空白对照组相比,PHD处理组细胞Tyr和Trp1的表达明显增加(P<0.05),MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的表达水平也明显增加(P<0.05),而p-ERK活性差异则无统计学意义(P>0.05)。结论:PHD通过上调MAPK信号通路中p-P38和p-JNK的活性而对小鼠黑素瘤B16细胞产生明显的增殖抑制,并在形态和功能上诱导黑素瘤细胞的分化。

茶叶提取物EGCG对B16小鼠黑素瘤细胞的影响

采用倒置显微镜观察茶叶中提取物EGCG对B16小鼠黑素瘤细胞形态的影响,亚甲基蓝染色法测定EGCG对B16细胞增殖率的影响,L-多巴氧化法测定EGCG对B16细胞酪氨酸酶活力的影响,氢氧化钠裂解法测定EGCG对B16细胞黑色素生成量的影响.结果表明:EGCG作用24h,高浓度组(>60μmol)细胞胞膜融合现象明显;作用72h,高浓度组大部分细胞死亡.EGCG对B16细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑色素生成量均有显著抑制,呈明显的剂量效应关系,且EGCG抑制B16细胞增殖,IC50为33.99μmol.

重组腺病毒介导金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在小鼠B16黑素瘤细胞中的表达

目的研究金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因通过重组腺病毒介导转染入B16黑素瘤细胞中的表达情况。方法用RT-PCR和流式细胞仪检测SEA基因在B16黑素瘤细胞中的表达。结果在转染SEA基因的B16黑素瘤细胞中检测到SEA基因的转录,并于转染后24h开始有SEA蛋白的表达,到72h表达量达最高值87.22,之后减弱,直到168h仍有少许表达。结论SEA基因可以在B16黑素瘤细胞中表达,为下一步黑素瘤的基因治疗奠定基础。

他克莫司对HaCaT细胞干细胞因子mRNA及小鼠B16黑素瘤细胞c-kitmRNA表达的影响

目的探讨他克莫司对角质形成细胞干细胞因子（SCF）mRNA及黑素细胞c-kitmRNA表达水平的影响。方法分别培养人永生化角质形成细胞（HacaT）和小鼠B16黑素瘤细胞，经他克莫司作用48h后，采用实时荧光定量PCR法检测SCFmRNA及c-kitmRNA的表达。结果他克莫司作用后，HaCaT细胞SCFmRNA、B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的相对表达量均升高，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论他克莫司可以上调HaCaT细胞SCFmRNA及B16黑素瘤细胞c-kitmRNA的表达量。

卡泊三醇对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度卡泊三醇(CPT)对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响。方法不同浓度CPT作用于体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞24h,在倒置显微镜下观察细胞密度及形态,采用MTT比色法和AnnexinV/PI染色法分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率。结果与对照组相比,CPT浓度为1,10μg/mL组中B16细胞密度及形态无明显变化,也无增殖抑制作用(P>0.05)。而当CPT为102,103μg/mL时,细胞密度减少,形态由多角形变为略圆钝,甚至皱缩,对细胞增殖呈剂量依赖性的抑制作用(P<0.05)。CPT为1,10,102μg/mL时对B16细胞无凋亡诱导作用(P>0.05),而103μg/mL时则明显促进细胞凋亡(19.17±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CPT≤10μg/mL对B16细胞密度形态、增殖抑制率和凋亡率无明显影响;CPT≥102μg/mL能改变B16细胞形态,并呈浓度依赖性地抑制其增殖;而当CPT≥103μg/mL时能诱导B16细胞凋亡。

灵芝多糖对小鼠黑素瘤B16F10细胞分泌VEGF的抑制作用

目的:探讨灵芝多糖对B16F10黑素瘤细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:用不同浓度的灵芝多糖处理B16F10黑素瘤细胞,以正常培养基代替灵芝多糖培养B16F10黑素瘤细胞为对照。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测灵芝多糖作用48h后B16F10黑素瘤细胞VEGF蛋白和m RNA表达的变化。结果:浓度为0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml的灵芝多糖处理B16F10细胞后,B16F10细胞VEGF蛋白和m RNA的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:灵芝多糖可能通过抑制B16F10黑素瘤细胞分泌VEGF起到抑制肿瘤的作用。

鱿鱼皮胶原蛋白多肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的研究不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽SP1(Mr>10000u)、SP2(6000u<Mr<10000u)、SP3(2000u<Mr<6000u)对小鼠B16黑素瘤细胞黑素含量、酪氨酸酶活性及酪氨酸酶基因表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖活性,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶mRNA表达。结果不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽均能明显降低B16黑素瘤细胞黑素含量(P<0.05,P<0.01),抑制酪氨酸酶活性(P<0.01),并下调酪氨酸酶mRNA表达(P<0.05,P<0.01),且剂量效应关系明显。结论不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽均具有明显抑制B16黑素瘤细胞黑素合成的作用,其中SP2的抑制效果较SP1、SP3明显(P<0.05)。

日本刺参胶原肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的:研究不同分子量日本刺参胶原肽A1(6000U<Mr<10000U)、A2(Mr<6000U)对小鼠B16黑素瘤细胞黑素生成、酪氨酸酶活性及酪氨酸酶基因表达的影响。方法:采用MTT法测定细胞增殖活性,NaOH裂解法测定黑素生成量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定酪氨酸酶mRNA表达。结果:不同分子量日本刺参胶原肽均能显著促进B16细胞增殖,抑制B16细胞黑素合成和酪氨酸酶活性,下调酪氨酸酶mRNA表达,且剂量效应关系明显。结论:不同分子量日本刺参胶原肽均具有显著抑制B16黑素瘤细胞黑色合成的作用。其中,A1的抑制效果较A2显著。

木鳖子醇提物对黑素瘤B16细胞增殖的抑制及其可能机制

目的:观察木鳖子醇提物(ethanol extract from cochinchina momordica seed,CMSEE)对黑素瘤B16细胞增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法:MTT法和克隆集落形成实验检测CMSEE对小鼠黑素瘤B16细胞生长的影响,倒置相差显微镜和瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞技术(FCM)检测B16细胞周期分布和凋亡率的变化,比色法检测CMSEE对B16细胞黑素生成和酪氨酸酶活性的影响,RT-PCR法检测CMSEE对B16细胞中C-myc、P38和Tyr基因表达的影响。结果:CMSEE(10～100mg/L)明显抑制B16细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),呈质量浓度和时间依赖性。10～40mg/LCMSEE处理后,B16细胞呈现典型的细胞分化形态,细胞周期阻滞于G0/G1期,黑素产生和酪氨酸酶活性增加(P<0.01),C-myc基因表达下调,P38和Tyr基因表达上调;100mg/LCMSEE处理后的B16细胞呈现凋亡形态变化[凋亡率达(37.2±3.29)%],黑素生成减少(P<0.05),酪氨酸酶活性降低(P<0.01)。结论:CMSEE体外对B16细胞增殖有明显的抑制作用,其机制与其低剂量诱导分化和高剂量诱导凋亡有关。

阿维A抑制鼠黑素瘤B16细胞的增殖作用

目的:探讨阿维A(acitretin)、顺铂及两者联合应用对鼠黑素瘤B16细胞株(简称B16细胞)的作用。方法:分别采用阿维A(浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)、顺铂((浓度为2、4、8 mg/L)及两药联合处理B16细胞,对照组B16细胞培养不加上述药物。在显微镜下观察细胞形态变化,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,应用两药相互作用指数(CDI)分析阿维A与顺铂的作用。结果:不同浓度阿维A对B16细胞增殖均具有抑制作用,与对照组相比,吸光度(A)值均有不同程度下降(P<0.01);对照组细胞贴壁生长良好,用药组细胞皱缩、破裂;两药CDI均>0.85,即阿维A和顺铂联合应用对B16细胞的增殖抑制具有相互协同作用。结论:阿维A对B16细胞的增殖有抑制作用,与顺铂联合应用相互间可增强诱导B16细胞的凋亡作用。