小G蛋白Rho家族与药物成瘾突触重塑

神经元突触重塑是神经系统结构与功能的适应性改变的能力,分为结构性突触重塑和功能性突触重塑,在脑功能生理状态和病理状态中起着重要作用。神经精神疾病的核心致病机制之一就是神经元突触重塑。小G蛋白Rho家族对神经元突触重塑具有重要的调控作用,其中Rac1、Cdc42和RhoA最为人熟知。本文总结了小G蛋白Rho家族在药物成瘾中对突触重塑的调控作用,以期加深对药物成瘾分子机制的理解。

小G蛋白Rab5对表达在HEK293细胞上的大电导钙激活钾通道的影响

目的探讨小G蛋白Rab5对HEK293细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)的影响。方法将对数生长期HEK293细胞,随机分为Control组、Rab5WT组、Rab5CA组和Rab5DN组。采用脂质体转染法进行转染,Control组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和对照质粒pc DNA3.1,Rab5WT组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5WT质粒,Rab5CA组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5CA质粒,Rab5DN组转染Flag-h Slo1-GFP质粒和Rab5DN质粒,每组两种质粒总量为4μg,按质量比1∶1共转染至3.5 mm培养皿中。转染72 h、荧光显微镜下观察转染效率在70%以上时,采用膜片钳、Western blotting法和流式细胞术观察Rab5对HEK293细胞BKCa的作用。结果与Control组比较,Rab5WT组、Rab5CA组BKCa全细胞电流密度明显增加,而Rab5DN组明显降低;Rab5WT组、Rab5CA组BKCa膜蛋白的相对表达量明显升高,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05);Rab5WT组、Rab5CA组Flag+/GFP+明显增加,而Rab5DN组明显降低(P均<0.05)。结论 Rab5能够明显增加表达在HEK293细胞上的BKCa电流及细胞膜上的表达,并可促进BKCa向质膜的转运过程。

超微脑得健对脑缺血大鼠脑内Rho表达的影响

目的探讨超微脑得健对脑缺血大鼠脑内Rho的影响,揭示其可能作用机制。方法采用脑中动脉阻塞法复制大鼠局灶性脑缺血模型,将动物随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、脑得健原方组、超微脑得健全量组,超微脑得健1/3剂量组。采用RT-PCR法检测大鼠脑组织Rho mRNA表达。结果假手术组脑内有一定水平Rho mRNA表达,模型组Rho mRNA表达至7 d达到高峰。给药3d后各治疗组动物脑组织Rho mRNA含量较同时段模型组比较明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论超微脑得健能抑制脑缺血后Rho表达,可能为其促进脑缺血后神经功能恢复作用机制之一。

MicroRNA-135a通过靶向Rap2a对肾细胞癌细胞迁移侵袭的影响

目的:探讨MicroRNA(miR)-135a对Ras家族小G蛋白2a(Rap2a)下游p-Akt表达及肾细胞癌(RCC)细胞迁移侵袭的影响,深入了解RCC恶化的潜在机制。方法:采用蛋白质印迹法检测正常肾组织细胞HK-2与RCC细胞Ketr-3、786-O、ACHN中Rap2a的表达水平; Target Scan软件预测靶向调控Rap2a的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验检测miR-135a与Rap2a基因的靶向关系;蛋白质印迹法检测Ketr-3细胞中Rap2a及其下游信号蛋白磷酸化蛋白激酶B(phosphate protein kinase B,p-Akt)表达;侵袭小室实验检测Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结果:Rap2a在正常肾组织细胞HK-2中低表达,在RCC细胞系中显著高表达;Target Scan软件预测发现miR-135a可与Rap2a的3'UTR互补结合;双荧光素酶报告基因检测与蛋白质印迹法实验均证实了miR-135a与Rap2a间的相互作用;过表达miR-135a可通过降低Rap2a及其下游蛋白p-Akt的表达抑制Ketr-3细胞的迁移侵袭能力。结论:本研究揭示了miR-135a通过靶向Rap2a/Akt信号途径抑制RCC细胞的迁移侵袭能力,miR-135a和Rap2a可能是治疗RCC的潜在分子靶点。