G蛋白偶联受体激酶2在心血管疾病发生发展中的作用研究进展

心血管疾病是我国致死率及致残率较高的疾病之一,对患者造成严重的身心影响。G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)也称为β肾上腺素受体蛋白激酶1,主要作用是使G蛋白受体磷酸化,从而不能结合G蛋白,进一步调节多条由G蛋白参与的信号通路。多项研究显示,GRK2的异常活化及表达改变参与调控多种心血管疾病的发生发展过程,包括心肌梗死、心肌肥厚、心力衰竭及其他心血管疾病等。对GRK2在心血管疾病发生发展中的作用进行总结可为心血管疾病的治疗提供新思路。

G蛋白耦联受体激酶2在MPTP诱导的PD模型小鼠纹状体中的作用机制

目的 探究G蛋白耦联受体激酶(GRK)2在帕金森病(PD)小鼠纹状体中的作用机制。方法 选用C57BL/J雄性8周龄小鼠,随机分为对照组和模型组;对照组腹腔注射0.2 ml生理盐水,模型组腹腔注射30 mg/kg的1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP),2次/w,共5 w。35 d后对两组进行爬杆实验和旷场实验检测。行为学检测后,小鼠麻醉后眼球取血、取脑,运用酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组化检测血清和中脑酪氨酸羟化酶(TH)表达,Western印迹和免疫组化检测纹状体GRK2和多巴胺2受体(D2R)表达。结果 在旷场实验中,MPTP干预后模型组自发活动总距离、穿越中心格次数和距离比对照组明显减少(均P<0.001)。在爬杆实验中,模型组爬杆时间比对照组明显延长(P<0.001)。ELISA及免疫组化显示,模型组血清和中脑TH值较对照组明显减少(P<0.001)。Western印迹和免疫组化提示,与对照组相比,纹状体D2R表达显著减少,而CRK2表达显著升高(P<0.05)。结论 GRK2可能通过D2R参与调控PD的症状,针对GRK2是潜在的PD治疗靶点。

脑钠肽通过环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路对高血压降压效果及左心室肥厚逆转作用的机制研究

目的:探讨脑钠肽对高血压的降压效果以及左心室肥厚的改善作用,探究其可能的作用机制。方法:清洁级雄性SD大鼠被分为对照组、模型组、脑钠肽组、脑钠肽+PKG抑制剂(KT5823)组。其中对照组大鼠分离腹主动脉,但并不进行缩窄腹主动脉;其余组大鼠均采用腹主动脉缩窄法构建高血压左心室肥厚大鼠模型;脑钠肽组每天通过微型泵以0.05μg/(kg·min)的速率连续静脉输注脑钠肽;脑钠肽+KT5823组通过微型泵输注相同剂量脑钠肽的同时以0.01μg/(kg·min)的速率连续静脉输注PKG抑制剂KT5823。各组大鼠造模前,以及造模(给药)后2、4周时,使用血压计测量大鼠的收缩压,并在造模(给药)后4周处死大鼠,分离心肌组织,称取左心室质量(LVW),测量左胫骨长度(TL),计算LVW/TL比值。使用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心肌组织cGMP依赖性蛋白激酶Ⅰ(PKG-Ⅰ)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况;使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Smad家族成员3(Smad3)、Ⅲ型胶原、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;使用马松实验(MASSON)检测各组大鼠心肌组织形态学变化。结果:与对照组比较,模型组大鼠收缩压、LVW/TL比值、心肌组织中TGF-β1、AngⅡ、Smad3、Ⅲ型胶原、ROS、MDA水平显著增加(均P<0.05),而PKG-Ⅰ、SOD水平显著降低(均P<0.05);与模型组比较,脑钠肽组大鼠收缩压、LVW/TL比值、心肌组织中TGF-β1、AngⅡ、Smad3、Ⅲ型胶原、ROS、MDA水平显著减少(均P<0.05),而PKG-Ⅰ、SOD水平显著上升(均P<0.05);与脑钠肽组比较,脑钠肽+KT5823组大鼠收缩压、LVW/TL比值、心肌组织中TGF-β1、AngⅡ、Smad3、Ⅲ型胶原、ROS、MDA水平显著增加(均P<0.05),而PKG-Ⅰ、SOD水平显著降低(均P<0.05)。同时KT5823可逆转脑钠肽对模型组大鼠心肌纤维化的改善作用。结论:脑钠肽可通过调控环磷酸鸟苷(cGMP)/环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶(PKG)信号通路降低高血压左心室肥厚大鼠血压,减轻其氧化应激水平,同时改善其左心室肥厚程度。

G蛋白、蛋白激酶C和Na^+-H^+交换在内皮素-1诱导培养心肌细胞肥大反应中的作用

内皮系-1（ET-1）是一种强的生长因子，并诱导心肌细胞肥大反应。在本实验中，我们探讨了G蛋白、蛋白激酶C（PKC）和Na＋－H＋交换在ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用。ET-1（10－10～10－7mol／L）促进3H－亮氨酸掺入，增加细胞蛋白质的含量和心肌细胞的表面积，且呈剂量依赖性，它们的EC50分别为5．2×10-10，5．2×10－10和7．3×10－10mol／L。用蛋白激酶C（PKC）抑制剂，Staurosporin（2nmol／L）预处理心肌细胞，可完全阻断ET-1诱导的心肌细胞的这些肥大反应，而蛋白激酶C激动剂，佛波酸酯（PMA）（10－8～10－6mol／L）呈剂量依赖性促进心肌细胞的肥大反应。用Na＋－H＋交换抑制剂，氨氯毗咪（10-4mol／L）预处理心肌细胞，可抑制ET－1诱导的心肌细胞肥大反应，但不影响PMA诱导的心肌细胞肥大反应。百日咳毒素（150ng／ml）预处理心肌细胞，可明显抑制ET－1诱导的心肌细胞肥大反应。这些结果提示，ET-1诱导的培养新生大鼠心肌细胞肥大反应是与百日咳毒素敏感的G蛋白相耦联，蛋白激酶C和Na＋．H＋交换可能在ET-1诱导的心肌细胞肥大反应中是重要的细胞内信使转导途径。

小G蛋白RhoA与细胞发育

细胞发育是细胞内各种复杂反应在时间和空间上有序协调的过程,包括细胞增殖、胞质分裂、细胞运动、细胞分化和组织生成等.作为G蛋白家族重要成员的RhoA起了重要的调控作用:在G蛋白调控因子(如GEF XPLN、p115RhoGEF、p190RhoGAP等)的作用下,活化的RhoA依次与效应蛋白分子(如ROCK1/2、mDia、PRK1/2、citron激酶等)结合,从而开启了下游的信号通路,最终使细胞能够迅速地对外界刺激做出反应.干细胞是一类既能自我更新又能特异分化形成终末分化细胞的细胞,而RhoA对干细胞的自我更新和定向分化也起着"开关"作用,对RhoA信号通路的调节调控了胚胎发生、神经发生、造血生成及成骨和肌肉生成等干细胞分化发育过程.肿瘤是正常细胞在各种因素长期作用下增殖异常的产物,而RhoA异常表达与肿瘤的发生、侵润与转移密切相关,RhoA信号通路与p53等基因的交互作用在肿瘤的发育过程中也发挥了重要的作用.

胶原性关节炎大鼠滑膜组织G蛋白偶联受体激酶的表达及白芍总苷对其的影响

目的研究胶原性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织中G蛋白偶联受体激酶(GRKs)表达以及白芍总苷(TGP)对其的影响。方法SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TGP(25、50、100mg.kg-1)组、雷公藤(GTW40mg.kg-1)组。用鸡Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,Western blot检测滑膜组织GRKs表达水平,并观察TGP灌胃给药对其的影响。结果正常SD大鼠滑膜组织GRK2、GRK5、GRK6均有表达,CIA大鼠关节滑膜组织GRK2、GRK5、GRK6的表达明显升高,TGP给药后GRK2,GRK5,GRK6的表达水平降低,差异有显著性。结论CIA滑膜组织GRKs表达增加,TGP抑制这种异常的变化可能是其治疗CIA的机制之一。

环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路的激活与再灌注损伤挽救激酶信号通路的关系

目的:观察脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)激活环磷酸鸟苷/蛋白激酶G(cyclic guanosine monophosphate/protein kinase G,cGMP/PKG)信号通路的心肌保护作用是否与细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase1/2,ERK1/2)、磷酸酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)蛋白激酶的激活有关。方法:将84只新西兰兔随机分为7组(n=12):假手术组;对照组;BNP组;BNP+LY294002组(LY294002为PI3K抑制剂);LY294002组;BNP+PD98059组(PD98059为ERK1/2抑制剂);PD98059组。除了假手术组只开胸不结扎冠状动脉外,其余6组均于结扎左回旋支45 min后恢复左回旋支血流,进行再灌注180 min。全程观察血流动力学及心电变化;实验终末,各组随机抽取6只兔子心脏做左室梗死面积测定,采用伊文思蓝和氯化三苯基四氮唑双染色法测定心肌梗死面积;每组另外6只兔子心脏取梗死边缘区组织,Western blot方法测定PAkt/Akt、P-ERK1/2/ERK1/2的表达。结果:心率(heart rate,HR)和平均动脉压(mean arterial blood pressure,MABP)在基线水平上无明显差异(P>0.05)。与基线水平相比,HR和MABP在缺血以及再灌注时期有明显下降(P<0.05),而在再灌注时期维持较稳定的水平。各组之间HR、MABP差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,BNP组心律失常发生率明显减少(P<0.003 125)。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组心律失常明显增加(P<0.003 125),BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义(P>0.003 125);假手术组无心肌梗死。与对照组比较,BNP组心肌梗死范围明显减少(P<0.05)。与BNP组比较,BNP+LY294002组、LY294002组、BNP+PD98059组及PD98059组梗死面积明显增加(P<0.05)。BNP+LY294002组和LY294002组,BNP+PD98059组和PD98059组差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,BNP组Akt、ERK1/2的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。与BNP组相比,BNP+LY294002组Akt的磷酸化水平及BNP+PD98059组ERK1/2的磷酸化水平分别明显降低(P<0.05)。BNP+LY294002组和LY294002组Akt的磷酸化水平,BNP+PD98059组和PD98059组ERK1/2的磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BNP激活cGMP/PKG信号通路,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用,且该通路的激活与再灌注损伤挽救激酶通路的激活有关。

G蛋白偶联受体激酶在细胞迁移和细胞信号转导中的作用

G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptors,GPCRs）是与G蛋白相连接的最大膜受体家族,能够被不同的配体所激活,如激素、多肽等。GPCRs与配体结合后能激活细胞内的G蛋白,通过不同的信号转导通路产生不同的生物学效应。人类基因组中含有1 000多个GPCRs基因,占整个人类基因组的3%左右。GPCRs是药物研发中最广泛应用的药靶,作用于GPCRs的药物对疼痛、高血压和哮喘等各类疾病具有良好的治疗作用。

G蛋白偶联受体激酶6参与天芪平颤颗粒预防帕金森病异动症的发生

目的:研究天芪平颤颗粒对左旋多巴诱发的异动症大鼠行为学及G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)表达的影响。方法:通过6-羟基多巴(6-hydroxydopa,6-OHDA)立体定向注射至大鼠前脑内侧束的方法成功建立帕金森病(Parkinson disease,PD)模型。25只模型大鼠随机分为5组,每组各5只。PD组:腹腔注射0.2%维生素C溶液;左旋多巴组:腹腔注射左旋多巴甲酯和苄丝肼;小、中、大剂量天芪平颤颗粒组:在给予左旋多巴甲酯和苄丝肼基础上分别加用相应剂量的天芪平颤颗粒。另设假手术组(n=5)为对照。连续给药29d后,评估不同剂量天芪平颤颗粒对PD模型大鼠行为学的影响,并用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测大鼠纹状体区GRK6蛋白的表达情况。结果:左旋多巴等长期使用后,PD模型大鼠出现异常不自主运动(abnormal involuntary movement,AIM),且AIM评分随治疗时间的延长逐渐增加;损伤侧纹状体区GRK6蛋白表达减少。天芪平颤颗粒能改善PD模型大鼠的AIM评分,增加GRK6蛋白的表达。免疫组织化学法结果显示,高、中剂量天芪平颤颗粒组的GRK6蛋白的表达较左旋多巴组增加(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,中剂量天芪平颤颗粒组的GRK6蛋白的表达较左旋多巴组增加(P<0.01)。结论:天芪平颤颗粒可能通过增加纹状体区GRK6的表达,改善PD模型大鼠的AIM评分,减少PD大鼠异动症的发生。

白藜芦醇经蛋白激酶G影响豚鼠心室肌细胞L-型钙通道

目的:研究白藜芦醇经蛋白激酶G对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流(ICa-L)的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术,记录给予白藜芦醇前后ICa-L的变化,并分别记录给予蛋白激酶G(PKG)特异性激动剂8B r-cGMP(100μmol.L-1)、PKG特异性拮抗剂H8(5μmol.L-1)后白藜芦醇对ICa-L的影响。结果:(1)白藜芦醇呈浓度依赖性抑制ICa-L,1、50、100μmol.L-1可使ICa-L峰值分别低18.31%±0.68%,56.20%±2.19%,84.51%±2.52%(n=5,P<0.05),但对ICa-L激活电位、峰电位、反转电位均没有影响;(2)100μmol.L-18B r-cGMP轻度抑制ICa-L,电流密度低10.50%±1.11%,100μmol.L-18B r-cGMP+50μmol.L-1白藜芦醇使ICa-L电流密度降低87.58%±3.49%(n=6,P<0.05);(3)5μmol.L-1H8对ICa-L无影响,5μmol.L-1H8+50μmol.L-1白藜芦醇对ICa-L无抑制作用。结论:白藜芦醇浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞ICa-L,此作用机制可能与PKG激活有关。

G蛋白偶联受体激酶活性调控与细胞炎性损伤

G蛋白偶联受体激酶 (Gprotein coupledreceptorki nases,GRKs)不仅调节G蛋白偶联受体 (GPCR)磷酸化、介导受体脱敏 ,使信号效应降低或消失 ,而且也调节G蛋白和靶细胞骨架 ,同时它还受到蛋白激酶A(PKA)、蛋白激酶C(PKC)、肌动蛋白和细胞内第二信使钙离子等调节。组织细胞表面存在多种GPCR如血小板活化因子 (PAF)受体、组胺受体、凝血酶受体等 ,介导炎性介质所致细胞损伤的信号转导作用。GRKs磷酸化GPCR 。

G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1发夹结构通过影响Paxillin的功能抑制成骨细胞迁移

目的探索G蛋白偶联受体激酶结合蛋白1(Gproteincoupledreceptorkinaseinteractingprotein1,GIT1)的RNA发夹结构(hairpin)(GIT1-RNAh)对成骨细胞迁移的影响,并分析其机制。方法取培养至第6代的鼠成骨细胞,随机分成两组,分别用包含GIT1-RNAh(实验组)和绿色荧光蛋白(greenfluoresenceprotein,GFP)的RNA发夹结构(GFP-RNAh)的腺病毒(对照组)感染12h后,再将每组分成有、无血小板源性生长因子(plateletdrivedgrowthfactor,PDGF)刺激的两组。免疫荧光染色方法检测成骨细胞内源性GIT1蛋白表达和Paxillin的位置。WesternBlot检测Paxillin的磷酸化。构建包含蓝色荧光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)实验组和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(对照组),免疫荧光双染的方法检测CFP-GIT1-RNAh和CFP-GFP-RNAh对Paxillin位置的特异性作用。用划痕愈合法检测GIT1-RNAh(实验组)和GFP-RNAh(对照组)腺病毒对成骨细胞在PDGF刺激下的迁移能力的影响。结果免疫组织化学观察,实验组和对照组比较,明显抑制成骨细胞内源性的GIT1蛋白表达和扰乱Paxillin的分布。WesternBlot观察,和对照组相比,实验组明显抑制了Paxiliin的磷酸化(P<0.05)。划痕愈合法检测观察,和对照组相比,实验组明显抑制成骨细胞的迁移。结论GIT1-RNAh通过扰乱Paxillin的分布和其磷酸化从而抑制成骨细胞的迁移。

G蛋白偶联受体激酶2与血清可溶性ST2对老年心肌梗死后心力衰竭预警的意义

目的分析75岁以上老年急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者外周血淋巴细胞G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)与血清可溶性ST2(sST2)水平在心力衰竭(心衰)预警中的意义。方法选取75岁以上老年男性急性NSTEMI患者80例作为急性心肌梗死(AMI)组,平均年龄(85.4±3.2)岁;选取同期体检的健康老年男性30例作为对照组,平均年龄(84.8±2.9)岁。测定2组患者GRK2、血清sST2水平,并行超声心动图检测LVEF、左心室收缩末期容积(LVESV)、左心室舒张末期容积(LVEDV)。AMI组患者在发病后3、6、12、24个月时进行随访。结果AMI组患者GRK2的表达、血清sST2水平均高于对照组[3.60 vs 0.72,(30.63±1.36)μg/L vs (26.87±0.55)μg/L,P<0.01],LVEF低于对照组[(50.87±4.58)%vs (55.15±5.87)%,P<0.01]。AMI组GRK2在发病后3、6、12、24个月随访时逐渐增高(P<0.05,P<0.01),sST2水平在发病后6、12、24个月随访时显著增高(P<0.05),LVEF在发病后6、12、24个月随访时显著降低(P<0.01)。结论 75岁以上老年男性急性NSTEMI患者GRK2对AMI后心衰的预警作用优于sST2。

G蛋白偶联受体激活丝裂原活化蛋白激酶的机理

多种Ｇ蛋白偶联受体均能激活丝裂原活化蛋白激酶。Ｇｉ蛋白偶联受体主要通过其βγ亚基，依赖Ｒａｓ蛋白途径；在大多数哺乳类细胞中Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径抑制Ｒａｓ依赖的ＭＡＰＫ活化，但在ＣＯＳ７细胞，Ｇｓ蛋白偶联受体通过ＰＫＡ途径使表达的ＭＡＰＫ活化；Ｇｑ蛋白偶联受体主要通过ＰＫＣ途径依赖或非依赖于Ｒａｓ使ＭＡＰＫ活化。ＭＡＰＫ信号途径中ＥＧＦ受体，酪氨酸激酶及调节蛋白Ｓｈｃ等联级反应蛋白可能是Ｇ蛋白偶联受体激活丝裂原活化蛋白激酶的中介蛋白。

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G_1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。 方法 通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )检测细胞的生长曲线 ,细胞周期以及细胞对G1 期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响。 结果 构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,过表达PKCα可促进L 0 2细胞增殖 ,促进细胞由G1 期向S期的过渡 ;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升 ,反之表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )增殖被抑制 ,阻抑细胞由G1 期向S期的过渡 ,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。 结论 从正反两个方面表明 ,PKCα可通过作用于G1 期相关周期蛋白的水平影响G1 S期的进程。

G蛋白偶联受体激酶4对内皮素B型受体的异常调节在原发性高血压发生中的作用

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4）对内皮素B型受体（endothelin receptor B,ETB）的异常调节在原发性高血压中的作用及机制。方法选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHRs）及其对照鼠（Wistar-Kyoto,WKY）各10只,通过无创鼠尾测压仪测定血压,采用右肾上腺静脉插管灌注ETB受体特异性激动剂BQ3020后观察尿流速及尿钠排泄率,荧光定量PCR检测大鼠肾脏GRK4 mRNA水平,Western blot测定大鼠肾脏GRK4及ETB受体的蛋白表达差异,免疫共沉淀法检测ETB受体磷酸化情况,在动物水平观察高血压状态下ETB受体的功能情况。结果 ETB受体激动剂BQ3020对WKY大鼠有明显利尿排钠作用,且这种利尿排钠作用可以被ETB受体抑制剂BQ788阻断,但在SHR大鼠BQ3020的利尿排钠作用受损[尿流速：（11.23±2.16）vs（3.49±1.32）,P〈0.05];尿钠排泄率：[（1 551.43±393.47）vs（601.16±128.15）,P〈0.05];在SHR大鼠肾皮质GRK4的蛋白水平及mRNA水平均较WKY大鼠高[蛋白：（1.38±0.10）vs（0.85±0.07）,P〈0.05];mRNA：[（2.23±0.15）vs（0.78±0.16）,P〈0.05],SHR大鼠ETB受体总蛋白水平与WKY大鼠相比差异无统计学意义（P〉0.05）,但ETB受体磷酸化水平增高。结论 GRK4可能通过对内皮素B型受体的异常调节,参与了原发性高血压发生与发病。

血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路的交互调节

目的探讨血管平滑肌细胞增殖过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用。方法植块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞。Western blot测定钙调磷酸酶和蛋白激酶G Iα蛋白的表达。定磷法测定钙调磷酸酶活性,MTT法测定血管平滑肌细胞的增殖。结果苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞钙调磷酸酶的表达和活性可被一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMP增强。应用环孢素A干预增殖细胞后蛋白激酶G Iα蛋白表达量较对照组明显提高(P<0.01),而加入苯肾上腺素刺激后蛋白激酶G Iα蛋白的表达较对照组也有明显提高(P<0.05),但较5 mg/L环孢素A干预组减少了36.7%,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。经0.5 mg/L环孢素A预处理后,苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞吸光度降低36.67%,S-亚硝基-N-乙酰青霉胺、Sp-8-pCPT-cGMP或Rp-8-pCPT-cGMP并不能进一步抑制或升高已升高的吸光度。结论蛋白激酶G介导钙调磷酸酶信号抑制血管平滑肌细胞增殖,并且蛋白激酶G与钙调磷酸酶能够交互调节影响血管平滑肌细胞增殖进程。

G蛋白偶联受体激酶6对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用的机制。方法:收集多发性骨髓瘤患者标本及健康对照组标本作为体内试验研究对象。分离获得的原代多发性骨髓瘤浆细胞和骨髓瘤细胞系U266、NCI H929为体外试验细胞组。分别用Western blot和quantitative real-time PCR检测GRK6的蛋白表达和mRNA表达。用Brd U试剂盒测定骨髓瘤细胞在GRK6抑制剂CX-4945的处理条件下的增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测其凋亡水平。结果:多发性骨髓瘤组中GRK6的表达明显高于对照组(P<0.05),在Ⅰ期的表达高于对照组,Ⅱ期高于Ⅰ期,Ⅲ期高于Ⅱ期(P<0.05)。GRK6在多发性骨髓瘤患者标本中蛋白和mRNA的表达均显著高于健康对照组。U266和MM细胞对抑制剂CX-4945呈现高敏性,而NCI H929对其敏感性低。GRK6 siRNA处理细胞后,GRK6在3组骨髓瘤细胞中的表达均显著下调。在细胞增殖检测实验中,CX-4945处理组U266、NCI H929和MM细胞增殖率分别为(58.25±18.24)%、(64.32±20.03)%和(45.42±25.01)%;凋亡检测中,U266、NCI H929和MM细胞凋亡率为(62.82±53.21)%、(43.25±47.05)%和(85.67±40.32)%。结论:多发性骨髓瘤GRK6的表达增强。GRK6抑制剂CX-4945能调节Rac1分子并抑制骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡。GRK6参与骨髓瘤细胞的增殖和凋亡通路。

G蛋白偶联受体激酶活性调控及其在恶性肿瘤中的作用

G蛋白偶联受体(GPCR),是一类重要的细胞表面受体。G蛋白偶联受体激酶(GRK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,其亚型广泛存在与各种组织,能够特异性地使活化的GPCR发生磷酸化及脱敏,从而终止GPCR介导的信号转导通路。新的研究还发现,GRK不仅作用于GPCR,也可以通过使非GPCR磷酸化或通过非磷酸化作用参与信号转导。GRK不仅能够调节GPCR和非GPCR,其自身活性也可受到多种因素的调节。本文结合GRK的多种功能作用和GRK活性调控,对GRK在脑、内分泌、生殖系统、消化系统及黑色素肿瘤中的作用做简要综述。

RhoA和蛋白激酶A对胃癌细胞迁移的影响

目的:研究RhoA对胃癌细胞迁移的作用和蛋白激酶A对这一作用的影响。方法:采用Boyden槽迁移率分析法和刮除-迁移分析法,观察RhoA激动剂LPA及PKA激动剂cAMP对人胃癌细胞SGC-7901迁移活动的影响。结果:加入RhoA激动剂LPA后,癌细胞迁移活动明显增强。加入PKA激动剂cAMP后再加入RhoA激动剂LPA,癌细胞迁移活动不再出现明显变化。结论:RhoA活化可促进SGC-7901细胞迁移,PKA可通过抑制RhoA活性而阻止该细胞迁移。