RAC1通过调节紧密连接蛋白1分布影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨小GTP酶Rac1(Rac family small GTPase 1,RAC1)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:构建pLKO.1-puro RAC 1 shRNA载体,包装慢病毒,感染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV3,并采用嘌呤霉素筛选;通过蛋白质印迹、细胞划痕和基质胶侵袭实验分别检测细胞中RAC 1敲减效率,细胞迁移和侵袭能力的改变;采用蛋白质印迹和免疫荧光染色观察细胞中紧密连接蛋白1(tight junction protein 1,TJP1)的表达和分布变化。结果:酶切电泳和测序结果均显示pLKO.1-puro RAC 1 shRNA慢病毒载体构建成功,蛋白质印迹结果证实感染RAC 1 shRNA慢病毒的OVCAR3和SKOV3细胞中RAC1蛋白水平较对照组明显下降(P<0.05)。细胞划痕和基质胶侵袭实验证实,RAC 1敲减后卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著下降(P均<0.01);蛋白质印迹结果显示RAC 1敲减后卵巢癌细胞中TJP1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但免疫荧光染色表明TJP1由胞质内散在分布转变为细胞间连接处聚集分布,细胞间连接更加紧密。结论:RAC 1基因可能通过改变TJP1蛋白分布从而影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2在小鼠肝缺血再灌注损伤模型中的作用及机制

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15)。取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率。各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine amino-transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性。采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化。结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光。与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05)。光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻。与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05)。与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05)。T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05)。结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关。