氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠成年后少突胶质细胞转录因子Olig2在脑白质区的表达

目的探讨氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine,LI-PILO)点燃幼鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE),成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内转录因子Olig2的表达。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导幼鼠SE模型,应用多道生理信号采集处理系统检测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)痫样活动波和Nissl染色方法观察神经元鉴定,证实SRS模型大鼠诱导成功;应用免疫组织化学染色技术观察少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)转录因子Olig2变化。结果 SRS模型组脑电图与正常对照组相比,可见频发尖波、棘-慢、尖-慢综合波;海马CA1、CA3和齿状回区Nissl染色显示神经元数目减少,部分细胞变性和坏死。SRS模型组在胼胝体与扣带回区域内Olig2的免疫组织化学染色细胞数量明显减少,与正常对照组相比有显著差异。结论氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠,成年后仍伴有慢性自发反复性癫痫发作的脑内少突胶质细胞转录因子Olig2的表达明显降低。

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.

大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

背景:碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的:构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法:从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。结果与结论:克隆了少突胶质细胞转录因子2的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。

少突胶质细胞转染因子2在胶质瘤中作用的研究进展

胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,具有发病率、复发率、病死率均较高等特点,临床亟待寻找参与胶质瘤恶性生物学行为的分子标记物,为胶质瘤的诊断、治疗和预后判断提供参考。少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)是胶质细胞特异性转录因子。Olig2几乎在所有胶质瘤中都有表达,参与胶质瘤的发生发展。Olig2维持GSC干性,促进胶质瘤的形成;调节GSC上皮间质转化,促进胶质瘤侵袭;调节GSC表型,促进不同亚型胶质瘤的发生。本文就Olig2在少突胶质瘤诊断及预后判断中的价值,胶质瘤发生发展中的作用机制以及治疗胶质瘤药物的设计和筛选中的应用作一综述。

大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响

目的构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响。方法设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体。将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响。结果成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达。与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs(n=5,P<0.01)。结论成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化。

血清-糖皮质激素诱导激酶1基因对少突胶质细胞分化的影响

目的:探讨血清-糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)对少突胶质细胞分化的影响.方法:利用免疫荧光染色检测糖皮质激素对体外培养少突胶质前体细胞(OPCs)分化的影响;原位杂交检测SGK1在少突胶质细胞中的表达情况;通过构建SGK1真核表达载体和鸡胚神经管电穿孔转化,研究SGK1过表达对少突胶质细胞发生发展的影响.结果:在体外,SGK1的激活物氢化可的松能促进OPCs分化;抑制物GSK650394则会阻断OPCs分化,鸡胚神经管过表达SGK1会促进少突胶质细胞转录因子2和Sox10的提前表达.结论:SGK1能促进少突胶质前体细胞的发生及分化.

少突胶质前体细胞分离培养方法的改进及其谱系限定细胞体外分化模型的建立

目的对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质谱系限制细胞的体外分化模型,以模拟体内OPCs的发育过程。方法通过非特异性差异黏附法与A2B5-IgM抗体免疫筛选法结合,从胚胎大鼠脊髓来源的细胞悬液中分离、纯化OPCs,用含成纤维细胞生长因子-2和血小板源性生长因子的培养液作扩增培养;再以三碘甲状腺氨酸和神经营养因子-3诱导OPCs分化,最终分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)。OPCs及其分化细胞的特性通过形态学观察和免疫化学染色法鉴定。结果 95%以上的细胞具有双极或三极突起的典型OPCs形态,并表达A2B5;在一定的培养条件下,OPCs可持续扩增和反复传代,且扩增的OPCs仍能维持其特有的形态和自我增殖的特性;进入分化进程的细胞将依次表达O4、O1、受体反应蛋白及髓鞘碱性蛋白等特异性分化抗原。结论分离的OPCs在形态、增殖以及分化格局等方面均与存在于胚胎脑区的O2A前体细胞(体内OPCs)相类似。

Olig-2在人脑胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的研究少突胶质细胞转录因子-2(Olig-2)在人脑胶质细胞瘤组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法和蛋白印迹技术(Western blot),检测96例脑胶质细胞瘤患者的手术标本,WHO分类:I级26例,Ⅱ级28例,Ⅲ级20例,Ⅳ级22例;组织学分类:巨细胞星形胶质细胞瘤26例,少突胶质细胞瘤28例,间变性星形胶质细胞瘤20例,多形胶质母细胞瘤10例,髓母细胞瘤12例和10例颅脑损伤内减压脑组织标本中Olig-2蛋白的表达水平。结果免疫组化结果表明:巨细胞星形胶质细胞瘤阳性表达率为23.08%(6/26),少突胶质细胞瘤阳性表达率为82.14%(23/28),间变性星形胶质细胞瘤阳性表达率为40.00%(8/20),多形胶质母细胞瘤阳性表达率为30.00%(3/10),髓母细胞瘤阳性表达率为75.00%(9/12)和正常脑组织阳性表达率为60.00%(6/10);Olig-2阳性率在良性(Ⅰ+Ⅱ)和恶性(Ⅲ+Ⅳ)中分别为53.70%(29/54)和47.62%(20/42),统计学处理无明显差异(P>0.05);少突胶质细胞瘤Olig-2阳性率82.14%(23/28)和其它病理类型肿瘤阳性率38.24%(26/68)比较有明显差异(P<0.05);Western blot结果显示少突胶质细胞瘤中Olig-2蛋白的表达明显高于其它类型胶质细胞瘤及正常脑组织(P<0.05)。结论Olig-2在少突胶质细胞瘤中明显高表达,但表达水平与脑胶质细胞瘤恶性程度无明显相关,Olig-2可以作为人脑少突胶质细胞瘤与其它类型胶质细胞瘤鉴别诊断的重要标记物。

胶质母细胞瘤Olig2表达的意义

目的探讨少突胶质细胞转录因子2 (oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的表达意义。方法采用组织微阵列免疫组化法检测277例GBM组织标本(每例标本选择5个取材区域)及12例正常脑组织中Olig2表达情况。比较每例标本不同取材区域的Olig2表达差异,分析Olig2表达情况与临床病理参数间的相关性。结果 Olig2在正常脑组织与GBM的阳性信号均位于细胞核。GBM Olig2阳性细胞比例为60.0%(Q25-Q75:10.0%~80.0%)。Olig2表达与病人年龄、GBM病理类型、IDH1R132H突变及PDGFRα表达显著相关(均P <0.05)。在Olig2阳性表达的GBM中,34.7%肿瘤组织内显示明显异质性。Olig2表达与预后明显正相关(P=0.030)。联合TERT启动子区突变及IDH1R132H突变可更好对GBM进行分子分型。结论 Olig2在GBM表达差异性较大,高表达者预后较好。检测Olig2有助于判断GBM异质性及肿瘤细胞起源,可能具有指导临床诊疗的价值。

Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响

目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。

f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc的表达观察

目的观察f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统少突胶质细胞转录因子2(olig-2)、神经系统特异表达RNA结合蛋白(Huc)的表达情况。方法将单细胞阶段的斑马鱼胚胎随机分为两组(胚胎数量分别为90枚和85枚),分别注射针对f3b起始密码区域序列的吗啡啉反义核苷酸(ATG-MO)和作为标准对照的随机序列吗啡啉反义核苷酸(CON-MO)。在CON-MO注射后的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为对照组,在ATG-MO注射后出现特异表型的斑马鱼胚胎中随机挑选20枚受精后24 h的胚胎作为实验组,通过原位杂交的方法检测两组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2、Huc。结果实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达评分分别为(1.9±0.4)、(5.6±0.5)分,两组比较,P<0.01。实验组、对照组斑马鱼胚胎中枢神经系统Huc表达评分分别为(6.3±0.6)、(6.5±0.3)分,两组比较差异无统计学意义。结论 f3b基因表达下调斑马鱼胚胎中枢神经系统olig-2表达减弱、Huc表达无明显变化。

特异性shRNA对小鼠海马神经干细胞中Olig2基因表达的影响

目的:构建RNA干扰(RNAi)少突胶质细胞转录因子2(Olig2)基因的小鼠海马神经干细胞(NSCs)体系,用于离体水平研究Olig2对精神分裂症模型海马神经发生的调控作用。方法:海马NSCs原代培养及鉴定;通过荧光显微镜分别观察24、48、72 h后NSCs感染情况,确定慢病毒感染的最佳时间;通过Western Blot筛选有效干扰Olig2的shRNA序列;在NSCs体系中加入浓度为200μmol/L的MK-801 24 h后,加入有效干扰Olig2的shRNA,通过Western Blot检测慢病毒感染后的Olig2蛋白表达。结果:慢病毒感染72 h后,海马神经干细胞球荧光表达最强,可达90%;Western Blot结果显示:与对照组比较,Olig2 shRNA3干扰组Olig2的蛋白表达明显降低(P <0. 05);干扰组可明显降低MK-801处理后的NSCs中Olig2蛋白表达(P <0. 05)。结论:成功构建RNA干扰Olig2基因的海马NSCs体系,为进一步研究Olig2对精神分裂症后海马神经发生的调控机制奠定了基础。

中枢神经细胞瘤临床病理分析

目的：了解中枢神经细胞瘤镜下形态及神经元特异核蛋白（NeuN）、突触素（SYN）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、少突胶质细胞转录因子乏（Olig-2）、上皮膜抗原（EMA）和Ki-67的表达。方法：选择8例中枢神经细胞瘤外科手术标本及1例会诊标本，采用HE染色镜下观察其形态特点；采用免疫组织化学方法检测NeuN、SYN、GFAP、Olig-2、EMA和Ki-67的表达。结果：中枢神经细胞瘤细胞由单一圆形细胞围绕分支状的毛细血管呈蜂窝状排列；免疫组织化学示肿瘤细胞SYN及NeuN均为阳性，Ki-67增殖指数为1％～2％，GFAP灶性阳性，Oligo-2和EMA阴性。结论：中枢神经细胞瘤具有一定的病理形态特征，免疫组化标记有助于诊断。

CCH条件下海马神经胶质重构及MDP干预的研究

目的研究脑慢性低灌注(CCH)条件下海马神经胶质重构及加减薯蓣丸(MDP)干预,阐明CCH对海马神经胶质的影响及MDP作用机制。方法 40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组及药物组。采用改良的双血管阻断(2-VO)法制作CCH模型,药物组以加减薯蓣丸浓缩汤剂(湖北省中医院制剂室提供)进行灌胃45d(10g·kg^(-1)·d^(-1)),模型组和假手术组以生理盐水灌胃,剂量、疗程同药物组。疗程结束后采用水迷宫行为学实验对各组大鼠进行智能测定;取大鼠海马进行病理学观察及免疫组化测定Olig-2及GFAP表达,RT-PCR测定GAP-43mRNA表达。结果与模型组相比,药物组可明显降低定位航行逃避潜伏期(P<0.05),增加跨越平台次数(P<0.01);与假手术组相比,模型组海马组织辐射层、分子层、腔隙层纤维结构疏松,排列紊乱,星型胶质细胞明显增生;药物组海马辐射层,分子层及腔隙层纤维排列致密,星型胶质细胞增生明显减少,少突胶质细胞明显增生;药物组GFAP平均光密度值较模型组低,但较假手术组高,均达到极显著性差异(P<0.01);药物组Olig-2平均光密度值较模型组高,较假手术组低,达到显著性差异(P<0.01,P<0.05)。假手术组、模型组、药物组GAP-43mRAN相互之间比较均达到统计学差异(P<0.01及P<0.05)。结论 CCH条件下海马神经胶质发生重构,表现为轴突丢失及髓鞘化程度低、胶质增生,可能是大鼠学习记忆受损的原因之一;加减薯蓣丸通过促进轴突的生成及髓鞘化,抑制星型胶质细胞增生,从而保持持神经纤维的正常有序联系,可能是其改善CCH状态下学习记忆能力的机制之一。

miR-205-5p/E2F1信号抑制经典Wnt/β蛋白通路调控脑胶质瘤细胞放射敏感性

目的探索miR-205-5p/E2F1信号轴在脑胶质瘤U251、U87细胞放射耐受中的调控机制。方法利用X射线逐步递增递间歇诱导方法照射U251、U87细胞,建立放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞。对两种细胞进行形态学、细胞运动、侵袭及增殖能力分析。通过荧光素酶基因检测系统及点突变技术分析E2F1基因对U251/TR、U87/TR细胞的调控机制。结果放射耐受的U251/TR、U87/TR细胞分别比251、U87细胞的增殖活力增强,运动、侵袭能力增强,X射线照射下细胞凋亡下降。miR-205-5p mimics转染能够下调U251/TR细胞E2F1因子表达,抑制细胞增殖、侵袭及运动,增加放射敏感性。miR-205-5p mimics转染协同E2F1下调是通过抑制细胞Wnt/β-catenin信号通路活性发挥抑制肿瘤作用,并降低细胞耐受。结论逐步递增递间歇诱导方法能较好地建立U251/TR、U87/TR细胞。miR-205-5p/E2F1信号轴通过经典Wnt/β-catenin信号通路发挥抑癌作用,可以作为提高胶质瘤放射敏感性的治疗靶点。

大鼠脊髓损伤后脱髓鞘病变及pEGFR的表达变化

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后有髓神经纤维数量、超微结构与活化型表皮生长因子受体(pEGFR)及其下游蛋白少突胶质细胞系转录因子-2(Olig-2)的表达变化之间的关系。方法制备大鼠SCI模型,BBB(Basso Beattie&Bresnahan)评分观察大鼠后肢神经功能;勒克索尔固蓝(LFB)染色计数有髓神经纤维的数量;电子显微镜观察有髓神经纤维的超微结构;蛋白印迹(Wb)检测各组pEGFR、Olig-2的表达水平。结果SCI后,大鼠损伤平面以下的神经功能几乎完全丧失,随着时间的延长其神经功能有一定程度的恢复,BBB评分随着时间延长而逐渐升高、有髓神经纤维的数量随着时间的延长亦逐渐增加。电子显微镜显示,SCI后出现如下病理改变:轴突、髓鞘水肿及髓鞘结构紊乱、增厚甚至溃变、崩解;随着时间延长,轴突及髓鞘的肿胀程度较前减轻,髓鞘结构亦逐渐致密。pEGFR、Olig-2的表达随时间延长而逐渐增加并于14d达到高峰。腹腔注射选择性pEGFR抑制剂(PD153035)14d后,pEGFR、Olig-2的表达,大鼠BBB评分及有髓神经纤维数量均较模型14d组明显降低;抑制剂组的轴索肿胀程度明显加重,轴浆线粒体数量减少,髓鞘分层而呈重度脱髓鞘改变。结论pEGFR的表达与大鼠SCI后神经纤维的再髓鞘化有关,其机制可能在于pEGFR参与了Olig-2的上调。

逐瘀清心胶囊对精神分裂症大鼠神经组织及髓鞘病变影响及机制

目的 观察逐瘀清心胶囊对MK-801诱导的精神分裂症大鼠神经组织及髓鞘病变的影响,探讨逐瘀清心胶囊治疗精神分裂症的作用机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、逐瘀清心组、利培酮组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠应用MK-801药液腹腔注射构建精神分裂症模型。造模成功后,逐瘀清心组给予逐瘀清心胶囊混悬液0.054 g/(kg·d)灌胃,利培酮组给予利培酮混悬液0.036 mg/(kg·d)灌胃,空白组及模型组给予等剂量蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃28 d。HE染色观察大鼠脑组织病理形态,LFB染色观察脑白质髓鞘病变情况,Western blot法观察脑额叶皮质、海马、扣带组织中分化抑制因子2(Id2)、少突胶质细胞转录因子1(Olig1)、少突胶质细胞转录因子2(Olig2)蛋白表达情况。结果 模型组大鼠脑组织神经元细胞核固缩明显,髓鞘组织结构松散,存在明显的脱髓鞘病变;与模型组比较,逐瘀清心组、利培酮组细胞形态较为规则,核固缩现象减少,脱髓鞘病变减轻,结构较为致密,且逐瘀清心组改善更明显。与空白组比较,模型组大鼠额叶皮质、海马、扣带组织中Id2蛋白表达量均明显升高(P均<0.05),Olig1和Olig2蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,逐瘀清心组和利培酮组大鼠额叶皮质、海马、扣带组织中Id2蛋白表达量均明显降低(P均<0.05),Olig1和Olig2蛋白表达量均明显升高(P均<0.05)。结论 逐瘀清心胶囊可明显减轻精神分裂症大鼠神经组织损伤,其作用机制可能与调控脑额叶皮质、海马、扣带中Id2、Olig1、Olig2蛋白的表达,修复髓鞘病变有关。

丹参注射液对大鼠脊髓损伤后Olig-2和OX-42表达的影响

目的:通过检测丹参注射液对大鼠脊髓损伤(SCI)后少突胶质细胞(Olig-2)和Ⅲ型补体受体(OX-42)系转录因子-2表达的影响,探讨其促进脊髓神经功能恢复的机制。方法:SPF大鼠50只随机分为正常组、模型组、丹参治疗组、丹参加雷帕霉素组和甲泼尼龙琥珀酸钠组(n=10)。采用Allen's法建立SCI模型(正常组除外)后,模型组:腹腔注射生理盐水(1 m L·kg^(-1)),1次/d;丹参治疗组:腹腔注射丹参注射液(1 m L·kg^(-1)),1次/d;丹参加雷帕霉素组:腹腔注射同等剂量丹参注射液(含雷帕霉素3 mg·kg^(-1)),1次/d;甲泼尼龙琥珀酸钠组:尾静脉推注甲泼尼龙琥珀酸钠(30 mg·kg^(-1)),1次/d。伤后1,3,7,14 d时采用联合行为评分法(CBS)评价大鼠脊髓神经功能恢复情况。伤后14 d处死动物,采用免疫荧光和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠脊髓内Olig-2和OX-42的表达。结果:至伤后14 d时,与模型组、丹参加雷帕霉素组比较,丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组大鼠CBS评分显著降低(P<0.05);与正常组比较,模型组大鼠Olig-2表达(免疫阳性细胞数及蛋白相对表达量)降低,而OX-42表达升高(P<0.05);与模型组比较,丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组Olig-2表达升高,而OX-42表达降低(P<0.05);与丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组比较,丹参加雷帕霉素组大鼠Olig-2表达降低,而OX-42表达升高(P<0.05);上述指标在丹参治疗组和甲泼尼龙琥珀酸钠组之间的差异不具有统计学意义。结论:丹参注射液可通过升高磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/m TOR信号转导通路的活性以调节Olig-2和OX-42的表达,从而表明其参与大鼠脊髓神经功能恢复的机制可能与通过参与少突胶质细胞和小胶质细胞增殖有关。

电针风池穴对MCAO/R大鼠运动功能及运动皮层缺血周围灶Olig2蛋白的影响

目的探讨电针风池穴治疗脑缺血再灌注损伤的可能机制。方法将40只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组、空白电针组、模型组、模型电针组,每组10只。空白组不进行任何处理,空白电针组采用电针风池穴治疗,模型组进行线栓法大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型制备,模型电针组进行线栓法MCAO/R模型制备并采用电针风池穴治疗。4组在电针前后均进行体质量测量、Cat Walk步态检测,电针治疗结束后进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色观察脑梗死情况,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、免疫荧光检测少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠脑梗死面积显著增大(P<0.01),体质量显著下降(P<0.01),四肢摆动速度明显减慢(P<0.05),左前脚掌宽度明显减小(P<0.05),WB及免疫荧光检测运动皮层区Olig2表达减少(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,模型电针组大鼠脑梗死面积明显减小(P<0.01),体质量增加(P<0.05),造模后2~3 d大鼠四肢摆动速度增加(P<0.05),造模后3~4 d大鼠左前脚掌宽度增大(P<0.05),WB及免疫荧光检测运动皮层缺血周围灶区域Olig2表达增加(P<0.01)。结论电针风池穴可上调再灌注后大鼠运动皮层区域缺血周围灶Olig2蛋白的表达,减小再灌注后大鼠脑组织梗死面积,促进运动皮层的修复,加速患肢平衡与稳定性的恢复。

地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘保护作用的研究

目的:分析地塞米松对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生的影响,探讨地塞米松治疗多发性硬化的新作用。方法:应用MOG35-55免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型。小鼠随机分为正常对照组、EAE组及地塞米松组,观察各组临床症状;采用HE染色、LFB染色、透射电镜扫描及免疫组化染色方法,检测免疫后第13、20、30 d各组小鼠脊髓组织炎症反应、髓鞘脱失及髓鞘再生情况。结果:地塞米松显著降低EAE小鼠发病率、延缓起病时间、减轻疾病严重程度。各个时间点地塞米松组脊髓组织炎性细胞浸润、髓鞘脱失及轴索变性程度较EAE组明显减轻。免疫后第20、30 d,EAE组Olig2阳性细胞数较正常对照组明显增加;免疫后各时间点,地塞米松组Olig2阳性细胞数较正常对照组均明显增加,第13、20 d较EAE组明显增加。结论:地塞米松可增加脊髓组织Olig2表达、促进髓鞘再生,这可能为地塞米松治疗EAE及多发性硬化的效应途径。