氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠成年后少突胶质细胞转录因子Olig2在脑白质区的表达

目的探讨氯化锂-匹罗卡品(lithium-pilocarpine,LI-PILO)点燃幼鼠癫痫持续状态(status epilepticus,SE),成年后发展为自发反复性癫痫发作(spontaneous recurrent epileptic seizure,SRS)的大鼠脑内转录因子Olig2的表达。方法采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导幼鼠SE模型,应用多道生理信号采集处理系统检测大鼠脑电图(electroencephalogram,EEG)痫样活动波和Nissl染色方法观察神经元鉴定,证实SRS模型大鼠诱导成功;应用免疫组织化学染色技术观察少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)转录因子Olig2变化。结果 SRS模型组脑电图与正常对照组相比,可见频发尖波、棘-慢、尖-慢综合波;海马CA1、CA3和齿状回区Nissl染色显示神经元数目减少,部分细胞变性和坏死。SRS模型组在胼胝体与扣带回区域内Olig2的免疫组织化学染色细胞数量明显减少,与正常对照组相比有显著差异。结论氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠,成年后仍伴有慢性自发反复性癫痫发作的脑内少突胶质细胞转录因子Olig2的表达明显降低。

过表达少突胶质细胞转录因子2加速小鼠胚胎干细胞分化为神经元-胶质细胞抗原2阳性少突胶质祖细胞样细胞

目的：观察少突胶质细胞转录因子2（O1ig2）过表达对小鼠胚胎干细胞（mESCs）向少突胶质祖细胞（OPCs）分化的影响.方法：将体外培养的mESCs分为空载体感染和Olig2-GFP慢病毒感染组,免疫荧光显色检测Olig2的表达.感染后9、14、21 d和28 d神经元-胶质细胞抗原2（NG2）免疫荧光显色观察mESCs向OPCs的分化情况.结果：Olig2-GFP慢病毒感染组mESCs经筛选后均为Olig2＋/GFP＋,而空载体感染组mESCs无Olig2表达.感染后9d,两组细胞均无NG2表达;感染后14d,Olig2-GFP慢病毒感染组NG2高表达,空载体感染组仅有少数细胞为NG2弱阳性;感染后21d与14 d相比,两组均无明显变化;感染后28d,两组细胞均有较强的NG2表达,组间无差异.结论：过表达Olig2能够加速mESCs分化为NG2＋的OPCs样细胞.

大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

背景:碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的:构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法:从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。结果与结论:克隆了少突胶质细胞转录因子2的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。

少突胶质细胞转染因子2在胶质瘤中作用的研究进展

胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤,具有发病率、复发率、病死率均较高等特点,临床亟待寻找参与胶质瘤恶性生物学行为的分子标记物,为胶质瘤的诊断、治疗和预后判断提供参考。少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)是胶质细胞特异性转录因子。Olig2几乎在所有胶质瘤中都有表达,参与胶质瘤的发生发展。Olig2维持GSC干性,促进胶质瘤的形成;调节GSC上皮间质转化,促进胶质瘤侵袭;调节GSC表型,促进不同亚型胶质瘤的发生。本文就Olig2在少突胶质瘤诊断及预后判断中的价值,胶质瘤发生发展中的作用机制以及治疗胶质瘤药物的设计和筛选中的应用作一综述。

Olig2过表达对神经干细胞向少突胶质细胞分化的影响

目的：构建大鼠olig2真核表达载体,观察其过表达对大鼠神经干细胞（NSCs）向少突胶质细胞分化的影响.方法：采用 RT-PCR,以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增olig2基因,定向克隆到pEGFP-N3载体中.用电穿孔方法转染pEGFP-N3-olig2表达载体至NSCs中.用RT-PCR鉴定olig2的表达,用免疫荧光显色鉴定NSCs向少突胶质细胞的分化情况.结果：成功构建了pEGFP-N3-olig2真核表达载体;olig2在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达;重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的受体相互作用蛋白（RIP）阳性细胞.结论：olig2过表达能够促进大鼠NSCs向少突胶质细胞方向分化.

大鼠Olig2基因慢病毒表达载体的构建及其转染后对少突胶质前体细胞分化的影响

目的构建大鼠少突胶质细胞转录因子2(Olig2)的慢病毒表达载体,并转染少突胶质前体细胞(OPCs),观察Olig2过表达对OPCs向少突胶质细胞(OLs)分化的影响。方法设计合成PCR引物,从大鼠pEGFP-N3-Olig2表达质粒中扩增并克隆大鼠Olig2-EGFP片段,将其插入到pLenti6.3慢病毒表达载体中,形成pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体。将其与包装质粒混合后共转染293T细胞,包装产生慢病毒后感染培养的OPCs,观察Olig2在感染细胞中的表达并鉴定其表达对OPCs向OLs分化的影响。结果成功将大鼠Olig2-EGFP片段克隆入pLenti6.3慢病毒表达载体,构建的pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达载体能够高效表达。与空质粒转染的OPCs相比,重组质粒转染的OPCs体外诱导分化后产生更多的OLs(n=5,P<0.01)。结论成功建立大鼠pLenti6.3-Olig2-EGFP慢病毒表达系统,慢病毒介导的Olig2过表达促进大鼠OPCs向OLs分化。

OLIG_2和GFAP在少突胶质细胞肿瘤诊断中的意义

目的:研究OLIG2和GFAP在少突胶质细胞肿瘤组织病理学诊断中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测28例少突胶质细胞肿瘤、9例星形细胞瘤的OLIG2和GFAP表达情况。结果:免疫组织化学示:少突胶质细胞肿瘤细胞100%阳性;星形细胞瘤细胞56%OLIG2阳性;星形细胞瘤100%GFAP阳性,少突胶质细胞肿瘤中的少突胶质细胞瘤成份46%呈散在和灶状GFAP阳性。结论:OLIG2不是少突胶质系细胞的特异抗体。OLIG2与GFAP联合使用对少突胶质细胞肿瘤的诊断有一定价值。

BAF155下调Olig2抑制少突胶质前体细胞分化及髓鞘再生

髓鞘是脑白质的重要组成部分,由少突胶质前体细胞(OPC)分化为成熟少突胶质细胞(OL)后,包绕神经元轴突所形成,对于维持神经元的正常生理功能发挥极其重要的作用。脱髓鞘相关疾病的修复机制复杂,而促进OPC向OL的分化发育,形成髓鞘是主要治疗途径之一。OPC的发育受表观分子等机制的调控,其中,SWI/SNF是一种重要的ATP依赖的染色质重塑复合物,在哺乳动物中被广泛研究,对不同细胞的发育过程均存在影响。

电针风池穴对MCAO/R大鼠运动功能及运动皮层缺血周围灶Olig2蛋白的影响

目的探讨电针风池穴治疗脑缺血再灌注损伤的可能机制。方法将40只雄性SPF级SD大鼠随机分为空白组、空白电针组、模型组、模型电针组,每组10只。空白组不进行任何处理,空白电针组采用电针风池穴治疗,模型组进行线栓法大脑中动脉闭塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型制备,模型电针组进行线栓法MCAO/R模型制备并采用电针风池穴治疗。4组在电针前后均进行体质量测量、Cat Walk步态检测,电针治疗结束后进行2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)染色观察脑梗死情况,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)、免疫荧光检测少突胶质细胞转录因子2(oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠脑梗死面积显著增大(P<0.01),体质量显著下降(P<0.01),四肢摆动速度明显减慢(P<0.05),左前脚掌宽度明显减小(P<0.05),WB及免疫荧光检测运动皮层区Olig2表达减少(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,模型电针组大鼠脑梗死面积明显减小(P<0.01),体质量增加(P<0.05),造模后2~3 d大鼠四肢摆动速度增加(P<0.05),造模后3~4 d大鼠左前脚掌宽度增大(P<0.05),WB及免疫荧光检测运动皮层缺血周围灶区域Olig2表达增加(P<0.01)。结论电针风池穴可上调再灌注后大鼠运动皮层区域缺血周围灶Olig2蛋白的表达,减小再灌注后大鼠脑组织梗死面积,促进运动皮层的修复,加速患肢平衡与稳定性的恢复。

Olig对少突胶质细胞介导脱髓鞘大鼠髓鞘再生的影响

目的探讨Olig在少突胶质细胞介导的脱髓鞘大鼠髓鞘再生中的作用。方法 40只健康Wistar大鼠,随机分成正常组、模型对照组、模型组、实验组,用形态学观察和免疫组织化学检测Olig1和Olig2的表达。结果正常组Olig1位于少突胶质细胞的胞质,模型组胞核表达明显增多,实验组Oligl又重新转移至胞质;正常组Olig2表达位于胞核,模型组中有少量表达于胞质。结论在Olig1和Olig2同时缺失时,导致全脑不能形成少突胶质细胞,严重影响髓鞘的再生。

多种神经营养因子联合诱导培养骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞的定向分化(英文)

背景:轴突再生后髓鞘化是影响脊髓损伤后恢复的一个关键性因素,而少突胶质细胞存活的多少直接影响轴突再生后髓鞘化。目的:探讨骨髓间充质干细胞经神经营养因子诱导培养后,向少突胶质样细胞定向分化的可行性。设计、时间及地点:细胞分子生物学的体外实验,于2006-09/2007-06在同济医院骨科实验室完成。材料:选用2～4周龄SD大鼠5只,雌雄不拘,取其双侧股骨、胫骨骨髓,分离培养骨髓间充质干细胞。培养用诱导因子表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子为美国Invitrogen公司产品。方法:取培养至第4代的骨髓间充质干细胞,加入含有20ng/mL碱性成纤维细胞生长因子、20ng/mL表皮生长因子、N2添加剂的无血清培养基的诱导液诱导48h后,加含500ng/mL胰岛素样生长因子1、N2添加剂的分化培养液培养3d。主要观察指标:相差显微镜观察诱导过程中骨髓间充质干细胞的形态学变化。半定量RT-PCR检测少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达。应用神经元细胞标志物抗微管相关蛋白,星形胶质细胞标志物抗神经纤维酸性蛋白,少突胶质细胞标志物抗半乳糖脑苷脂、抗磷脂碱性蛋白抗体进行免疫细胞化学染色,检测骨髓间充质干细胞定向分化为少突胶质样细胞的阳性率。结果:①骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞诱导分化过程中的形态学变化:经诱导分化后,大部分骨髓间充质干细胞表现出少突胶质细胞的形态学特征,胞质向细胞核回缩,细胞突起向外延伸,折光性增强,随时间延长多个细胞突起相互连接形成典型的网状结构。②少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达:细胞诱导分化后可检测到磷脂碱性蛋白mRNA、半乳糖脑苷脂mRNA的特异性条带。③少突胶质细胞阳性率:在诱导分化条件下,半乳糖脑苷脂阳性率为65%,磷脂碱性蛋白阳性率为45%,微管相关蛋白2阳性率为10%。结论:碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子与胰岛素样生长因子联合应用能够有效促进骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞定向分化。

Olig-2在人脑胶质细胞瘤中的表达及临床意义

目的研究少突胶质细胞转录因子-2(Olig-2)在人脑胶质细胞瘤组织中的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法和蛋白印迹技术(Western blot),检测96例脑胶质细胞瘤患者的手术标本,WHO分类:I级26例,Ⅱ级28例,Ⅲ级20例,Ⅳ级22例;组织学分类:巨细胞星形胶质细胞瘤26例,少突胶质细胞瘤28例,间变性星形胶质细胞瘤20例,多形胶质母细胞瘤10例,髓母细胞瘤12例和10例颅脑损伤内减压脑组织标本中Olig-2蛋白的表达水平。结果免疫组化结果表明:巨细胞星形胶质细胞瘤阳性表达率为23.08%(6/26),少突胶质细胞瘤阳性表达率为82.14%(23/28),间变性星形胶质细胞瘤阳性表达率为40.00%(8/20),多形胶质母细胞瘤阳性表达率为30.00%(3/10),髓母细胞瘤阳性表达率为75.00%(9/12)和正常脑组织阳性表达率为60.00%(6/10);Olig-2阳性率在良性(Ⅰ+Ⅱ)和恶性(Ⅲ+Ⅳ)中分别为53.70%(29/54)和47.62%(20/42),统计学处理无明显差异(P>0.05);少突胶质细胞瘤Olig-2阳性率82.14%(23/28)和其它病理类型肿瘤阳性率38.24%(26/68)比较有明显差异(P<0.05);Western blot结果显示少突胶质细胞瘤中Olig-2蛋白的表达明显高于其它类型胶质细胞瘤及正常脑组织(P<0.05)。结论Olig-2在少突胶质细胞瘤中明显高表达,但表达水平与脑胶质细胞瘤恶性程度无明显相关,Olig-2可以作为人脑少突胶质细胞瘤与其它类型胶质细胞瘤鉴别诊断的重要标记物。

胶质母细胞瘤Olig2表达的意义

目的探讨少突胶质细胞转录因子2 (oligodendrocyte transcription factor 2,Olig2)在胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的表达意义。方法采用组织微阵列免疫组化法检测277例GBM组织标本(每例标本选择5个取材区域)及12例正常脑组织中Olig2表达情况。比较每例标本不同取材区域的Olig2表达差异,分析Olig2表达情况与临床病理参数间的相关性。结果 Olig2在正常脑组织与GBM的阳性信号均位于细胞核。GBM Olig2阳性细胞比例为60.0%(Q25-Q75:10.0%~80.0%)。Olig2表达与病人年龄、GBM病理类型、IDH1R132H突变及PDGFRα表达显著相关(均P <0.05)。在Olig2阳性表达的GBM中,34.7%肿瘤组织内显示明显异质性。Olig2表达与预后明显正相关(P=0.030)。联合TERT启动子区突变及IDH1R132H突变可更好对GBM进行分子分型。结论 Olig2在GBM表达差异性较大,高表达者预后较好。检测Olig2有助于判断GBM异质性及肿瘤细胞起源,可能具有指导临床诊疗的价值。

骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞的定向分化

目的:神经反射通路的重建和再髓鞘化是影响脊髓损伤后恢复的一个关键性因素,而少突胶质细胞存活的多少直接影响轴突再生后髓鞘化。探讨骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞定向分化的可行性。方法:实验于2006-09/2007-06在同济医院骨科实验室完成。①动物:2～4周龄清洁级SD大鼠5只,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法:大鼠颈脱臼法处死,无菌条件下取双侧股骨、胫骨,去除两端骨骺,暴露骨髓腔,用DMEM培养液反复冲洗,收集冲洗液,重悬细胞种植于25cm2培养瓶中,培养体系中含DMEM、体积分数为0.1的胎牛血清、终浓度为2mmol/L谷氨酰胺及100U/mL青霉素和100mg/L链霉素,采用贴壁法+胰蛋白酶消化法进行纯化。取培养至第4代的骨髓间充质干细胞,加入含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、N2添加剂的无血清培养基进行诱导分化。③实验评估:观察诱导过程中骨髓间充质干细胞的形态学变化。半定量RT-PCR检测少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达。应用抗微管相关蛋白、抗神经纤维酸性蛋白、抗半乳糖脑苷脂、抗磷脂碱性蛋白抗体进行免疫细胞化学染色,检测骨髓间充质干细胞定向分化为少突胶质细胞的阳性率。结果:①骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞诱导分化过程中的形态学变化:经诱导分化后,大部分骨髓间充质干细胞表现出少突胶质细胞的形态学特征,胞质向细胞核回缩,细胞突起向外延伸,折光性增强,随时间延长多个细胞突起相互连接形成典型的网状结构。②少突胶质细胞特异性标志物mRNA的表达:细胞诱导分化后可检测到磷脂碱性蛋白mRNA、半乳糖脑苷脂mRNA的特异性条带。③少突胶质细胞阳性率:在诱导分化条件下,半乳糖脑苷脂阳性率为65%,磷脂碱性蛋白阳性率为45%,微管相关蛋白2阳性率为10%。结论:碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子与胰岛素样生长因子联合应用,能够有效促进骨髓间充质干细胞向少突胶质细胞分化。

少突胶质细胞前体细胞在双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型中的变化特点

目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0.2%CPZ的混合鼠粮,连续饲养6周;髓鞘再生组在连续喂养6周CPZ鼠粮后,换用正常鼠粮2周。实验过程中通过卢卡斯快蓝染色及透射电镜技术判断脑组织胼胝体区髓鞘脱失及恢复程度,通过免疫组化及免疫荧光技术检测脑内NG2,Olig2和GFAP的表达来评估少突胶质细胞前体细胞及星形胶质细胞的变化特点。结果与正常组相比,急性脱髓鞘组胼胝体髓鞘脱失明显,Olig2、GFAP表达明显升高(P<0.05),侧脑室旁外侧隔核(LSD)NG2升高水平较胼胝体区(CC)更为明显(P<0.05,P<0.01);髓鞘再生组髓鞘有所修复,Olig2、GFAP表达仍高于正常组,但较急性脱髓鞘组有一定程度降低(P<0.05)。结论髓鞘损伤期少突胶质细胞前体细胞不能有效迁移至受损部位,修复期Olig2表达降低,星形胶质细胞持续高水平表达可能是髓鞘修复障碍的影响因素。

Olig2对胚胎干细胞向神经前体细胞分化过程中Nestin蛋白表达的影响

目的:探讨碱性螺旋-环-螺旋家族的少突胶质细胞转录因子2(Olig2)对小鼠胚胎干细胞(mESCs)向神经前体细胞(NPCs)分化过程中巢蛋白(Nestin)表达的影响。方法:将mESCs分为正常组、空载体组和Olig2转染组,用含有RA、Purmorphamine、bF GF和PDGF-AA的培养基将其诱导分化为NPCs;分别在诱导分化的第11 d和14 d,用免疫细胞化学荧光染色和蛋白免疫印迹法检测其神经前体细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)的表达情况。结果:经Olig2-GV218慢病毒转染后的mE SCs,Olig2蛋白的表达较正常组和空载体组明显增强;诱导分化后11 d,三组细胞Nestin蛋白表达无明显区别;14 d时,正常组和空载体组仍能检测到较高的Nestin蛋白表达,而Olig2转染组Nestin蛋白的表达明显减弱。结论:mESCs向NPCs分化过程,过表达Olig2可降低Nestin蛋白的表达。

少突胶质前体细胞分离培养方法的改进及其谱系限定细胞体外分化模型的建立

目的对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质谱系限制细胞的体外分化模型,以模拟体内OPCs的发育过程。方法通过非特异性差异黏附法与A2B5-IgM抗体免疫筛选法结合,从胚胎大鼠脊髓来源的细胞悬液中分离、纯化OPCs,用含成纤维细胞生长因子-2和血小板源性生长因子的培养液作扩增培养;再以三碘甲状腺氨酸和神经营养因子-3诱导OPCs分化,最终分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)。OPCs及其分化细胞的特性通过形态学观察和免疫化学染色法鉴定。结果 95%以上的细胞具有双极或三极突起的典型OPCs形态,并表达A2B5;在一定的培养条件下,OPCs可持续扩增和反复传代,且扩增的OPCs仍能维持其特有的形态和自我增殖的特性;进入分化进程的细胞将依次表达O4、O1、受体反应蛋白及髓鞘碱性蛋白等特异性分化抗原。结论分离的OPCs在形态、增殖以及分化格局等方面均与存在于胚胎脑区的O2A前体细胞(体内OPCs)相类似。

血清-糖皮质激素诱导激酶1基因对少突胶质细胞分化的影响

目的:探讨血清-糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)对少突胶质细胞分化的影响.方法:利用免疫荧光染色检测糖皮质激素对体外培养少突胶质前体细胞(OPCs)分化的影响;原位杂交检测SGK1在少突胶质细胞中的表达情况;通过构建SGK1真核表达载体和鸡胚神经管电穿孔转化,研究SGK1过表达对少突胶质细胞发生发展的影响.结果:在体外,SGK1的激活物氢化可的松能促进OPCs分化;抑制物GSK650394则会阻断OPCs分化,鸡胚神经管过表达SGK1会促进少突胶质细胞转录因子2和Sox10的提前表达.结论:SGK1能促进少突胶质前体细胞的发生及分化.

少突胶质谱系细胞易损性的研究

目的:研究TNF-α对O-2A祖细胞、原少突胶质细胞、少突胶质细胞(oligodendrocytes,OL)这三个不同发育阶段少突胶质谱系细胞的易损性。方法:采用TNF-α分别刺激这三个不同发育阶段的细胞,MTT法检测存活率,免疫细胞化学检测活化的caspase-3。结果:O-2A祖细胞与OL相比存活率明显降低,原少突胶质细胞与OL相比存活率也降低;50ng/mlTNF-α刺激少突胶质谱系细胞48h以内,O-2A祖细胞的存活率与原少突胶质细胞、OL的存活率相比差异无统计学意义,而原少突胶质细胞的存活率与OL存活率相比较明显降低;caspase-3免疫细胞化学染色显示在这些细胞的胞浆和胞核有大量阳性信号。结论:TNF-α降低少突胶质谱系细胞的存活率具有细胞成熟程度的依赖性;caspase-3参与TNF-α诱导的3个不同发育阶段的OL的凋亡。