少阳生骨方含药血清对促进大鼠体外软骨细胞培养细胞增殖的相关性研究

目的:验证少阳生骨方含药血清是否具有对体外培养软骨细胞有促增殖作用。方法:用MTT比色法,通过测定各药物组活细胞OD值(Optical Density,OD)间接计算出不同浓度药物对细胞生长的抑制率,进而考察细胞毒性大小。结果:其中含药血清浓度在(0.25%～1%)对软骨细胞有一定的促进代谢及增殖的作用。但随着含药血清浓度的增大,促增殖作用逐渐减弱,随着浓度的增大甚至产生生长抑制效应,提示高浓度的含药培养基具有一定的细胞毒性。结论:合适浓度的少阳生骨方含药血清对体外培养大鼠软骨细胞具有促增殖作用。

少阳生骨方对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达影响研究

目的:对比观察少阳生骨方(SYSGF)与盐酸氨基葡萄糖胶囊对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达的影响,探讨少阳生骨方对膝关节软骨保护方面的作用。方法:①去分化软骨细胞体外培养体系的建立以及鉴定;②用CCK-8法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞增殖影响;③用免疫组化法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞Ⅱ型胶原表达影响。结果:①通过酶消化法建立1周龄SD大鼠去分化软骨细胞体外培养体系,通过镜下观察、甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原表达染色鉴定,确认分离培养的软骨细胞符合软骨细胞的生物学特性。②CCK-8法观察去分化细胞结果显示:0.6%、1.2%、2.4%含少阳生骨方药物以及盐酸氨基葡萄糖的药物血清与空白组相比,其均能促进去分化软骨细胞的增殖(P<0.05),但少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组相比其结果差异性没有统计学意义(P>0.05)。③用免疫组化染色法观察去分化软骨细胞结果显示:不同药物以及不同药物浓度干预去分化软骨细胞后其Ⅱ型胶原均有表达,表达部位在胞浆,为红棕色颗粒或成片状,但与空白组相比,少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组表达率明显增加(P<0.05)。同浓度含药血清少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原表达结果差异性没有统计学意义(P>0.05)。结论:少阳生骨方能促进去分化软骨细胞的增殖以及Ⅱ型胶原的表达,提示少阳生骨方能有效保护关节软骨,这或许是其防治骨性关节炎的机制之一。

少阳生骨方调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13的表达

背景:少阳生骨方有很好的治疗骨关节炎的作用,但其作用机制仍不清楚,可能与软骨退变的调节有关。目的:探讨少阳生骨方对C518细胞Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13表达的影响。方法:选用C518大鼠膝关节退变软骨细胞,并用苏木精-伊红染色观察C518细胞形态;然后将C518细胞分为:少阳生骨方组、盐酸氨基葡萄糖组、生理盐水组,每组给予相应的干预后,再用RT-q PCR和Western blot检测Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶13基因和蛋白的表达水平。结果与结论:(1)RT-q PCR和Western blot检测结果显示,相较于生理盐水组,少阳生骨方组和盐酸氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原的m RNA和蛋白表达量均上调(P<0.05),基质金属蛋白酶13的m RNA和蛋白表达量均下调(P<0.05);且相比盐酸氨基葡萄糖组,少阳生骨方组Ⅱ型胶原的m RNA和蛋白表达量显著上调(P<0.05),基质金属蛋白酶13 m RNA和蛋白表达量显著下调(P<0.05);(2)结果说明,少阳生骨方能调节C518大鼠膝关节退变软骨细胞中Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13的m RNA和蛋白的表达水平,从而延缓退变的发展。

少阳生骨方对大鼠在体软骨损伤关节液IL-1β及软骨修复组织Ⅱ型胶原影响的实验研究

目的应用少阳生骨方对大鼠在体软骨损伤进行干预，观察其对大鼠在体软骨损伤关节液中IL-1β水平及和修复组织中Ⅱ型胶原的影响。方法选用在相同条件下喂养的6～8周清洁级SD大鼠，制作成关节软骨损伤动物模型，按照组内均衡一致原则随机编为3组，即少阳生骨方组实验组（S组）、盐酸氨基葡萄糖胶囊组对照组（A组）和生理盐水空白对照组（K组），每组9只。于造模完成后的第二天，开始灌胃药物，S组少阳生骨方灌胃，A组盐酸氨基葡萄糖胶囊灌胃，K组生理盐水灌胃。对比观察少阳生骨方及盐酸氨基葡萄糖胶囊对大鼠关节软骨损伤后不同时期（4周、8周、12周）关节液中IL-1β水平和修复组织中Ⅱ型胶原的影响。结果三组关节液中IL-1β水平检测，S组和A比较：第4、8、12周A组高于S组（P〈0．05）；第4、8、12周K组高于S组（P〈0．05）；第4、8、12周K组高于A组（P〈0．05）。治疗前后自身比较：S组第8周、第12周均低于第4周（P〈0．05）；A组第8周、第12周均低于第4周（P〈O．05）；K组第4周〉第8周〉第12周（P〈0．05）。组织学观察显示S、A组软骨缺损修复组织的数量及质量均优于K组，S组的修复效果强于A组。结论通过和解少阳的方法可显著降低关节液中导致软骨细胞损伤的炎性介质IL-1β水平，提高软骨损伤后修复组织中Ⅱ型胶原的表达，从而有助于软骨损伤的修复。

少阳生骨方修复胫骨骨折模型大鼠转化生长因子β1的表达

背景:少阳生骨方在促进软骨修复方面效果明显,但对促进骨折愈合方面的作用尚不明确。转化生长因子β1可抑制破骨细胞的活性,刺激成骨细胞的活化,加速骨基质的合成与积累,可在一定程度上反映骨折愈合的速度。目的:探讨少阳生骨方对SD大鼠骨折愈合的影响及作用机制。方法:取72只SD大鼠进行左侧胫骨骨折造模,造模后随机等分为少阳生骨方组,骨肽片组和对照组。于造模后7,15,30及56 d每组分别随机选取6只大鼠,对患肢行X射线检查,称取患肢胫骨湿质量,结果与结论:(1)X射线片显示:少阳生骨方组和骨肽片组骨断端连续骨痂形成数量比对照组明显较多,骨痂密度较高,骨折线模糊;骨断端愈合程度明显优于对照组;(2)胫骨湿质量:少阳生骨方组胫骨湿质量随着时间的推移逐渐增加,但与骨肽片组差异无显著性意义(P>0.05)。但少阳生骨方组和骨肽片组胫骨湿质量明显高于对照组(P<0.05);(3)血清转化生长因子β1:造模后第7天,3组血清转化生长因子β1水平无明显差异(P>0.05);造模后15,30及56 d,少阳生骨方组和骨肽片组转化生长因子β1水平明显高于对照组(P<0.05);(4)骨折部分转化生长因子β1:少阳生骨方组和骨肽片组相比差异无显著性意义(P>0.05),少阳生骨方组和骨肽片组均明显优于对照组(P<0.05);(5)结果表明,少阳生骨方能够促进大鼠血清及骨折部分转化生长因子β1的表达,促进SD大鼠胫骨骨折断端骨痂形成,加速骨愈合。

少阳生骨方对SD大鼠胫骨骨折断端18F-NaF分布的影响

目的探讨^18F-NaF在评价骨折早期愈合方面的应用价值,以及少阳生骨方对大鼠骨折愈合的影响。方法将72只SD大鼠进行左侧胫骨骨折造模,造模后随机分为实验组（少阳生骨方汤剂灌胃）、对照组（骨肽片悬浮液灌胃）和空白组（0.9%生理盐水灌胃）,每组24只。在7、15、30、56 d从3组中各随机选取6只大鼠,对胫骨骨折断端进行PET/CT扫描,计算骨折断端对^18F-NaF的摄取。结果实验组和对照组^18F-NaF摄取值于15 d达到峰值（9.00±0.42）%ID/g、（8.10±0.71）%ID/g,而空白组^18F-NaF摄取值于30 d达到峰值（4.25±0.35）%ID/g,且在四个不同时间点,实验组摄取量与对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）;实验组和对照组较空白组摄取量高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论^18F-NaF在评估早期骨折愈合中具有一定的应用价值,少阳生骨方能够促进大鼠胫骨骨折愈合。

少阳生骨方含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:探讨少阳生骨方对BMSCs成骨分化的影响,并初步探究其可能的作用机制。方法:以不同浓度少阳生骨方含药血清(0.035、0.07、0.14、0.28、0.56 g/mL)干预BMSCs,MTT法检测细胞增殖。将BMSCs分为少阳生骨方含药血清组(含药血清组)、对照组(无药血清组)、经典诱导组(阳性对照),碱性磷酸酶染色测定成骨活性,茜素红染色鉴定矿化结节形成,免疫组化检测各组中BMP-2、Runx2蛋白表达水平。结果:0.28、0.56 g/kg灌胃少阳生骨方含药血清对BMSCs有显著的促增殖作用(P<0.05),少阳生骨方含药血清诱导7、14天能显著增加BMSCs碱性磷酸酶活性、矿化结节数及成骨相关蛋白BMP-2、Runx2阳性表达(P<0.05)。结论:少阳生骨方能诱导BMSCs成骨分化,其机制可能与上调BMP-2、Runx2蛋白的表达有关。

少阳生骨方中药泥灸治疗膝关节骨性关节炎的效果观察

目的探讨采用少阳生骨方制作的中药泥灸治疗膝关节骨性关节炎(KOA)的效果。方法 80例KOA患者采用随机数字表法分为治疗组和对照组,各40例,试验过程中对照组脱落1例最终纳入39例。对照组给予常规保守治疗,包括对症治疗、针灸、推拿等。治疗组在常规保守治疗的基础上给予少阳生骨方中药泥灸治疗。比较2组治疗前后骨关节炎指数(WOMAC)量表得分,评价临床疗效。结果治疗组治疗后WOMAC量表各维度得分及总分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组临床疗效总有效率为90.00%(36/40),高于对照组的79.49%(31/39),差异有统计学意义(P<0.05)。结论少阳生骨方中药泥灸治疗能进一步缓解KOA患者临床症状。

基于“少阳主骨”理论循经运用中药泥灸治疗膝骨性关节炎临床效果观察

目的探讨以“少阳主骨”理论为指导,选取足少阳经常用穴位,使用“少阳生骨”方制作而成的中药泥灸治疗膝骨性关节炎的疗效。方法在2019年6—12月某院针灸康复科就诊膝关节炎患者中选取80例,将患者按组间基本特征具有可比性的原则分为观察组与对照组,各40例。对照组在常规治疗基础上运用“少阳生骨”方中药泥灸直接敷于患者患膝处;观察组在对照组基础上选取少阳经穴上常用3个穴位进行少阳生骨方中药泥灸贴敷,包括阳陵泉、绝骨穴、环跳穴,进行1个月时间干预后比较两组骨关节指数WOMAC评分(包括疼痛、僵硬、日常生活)、疗效评价指标。结果治疗后,观察组WOMAC指数各维度得分均低于对照组,观察组有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于“少阳主骨”理论循经运用中药泥灸治疗膝骨性关节炎具有明显疗效。