不同地理种群尖音库蚊复组抗性动态和遗传多样性

通过生物测定、蛋白质电泳和等位酶分析等方法对5个不同地区的尖音库蚊复组蚊虫Culex pipienscomplex的抗性水平、种群中非特异性酯酶基因表型分布和种群遗传多样性进行了研究。不同地理种群的抗性检测结果表明:5个种群分别对敌敌畏、对硫磷、氯菊酯和溴氰菊酯的抗性较高,对残杀威、巴沙和胺菊酯的抗性较低;朝阳种群对敌敌畏抗性最高(55.7倍),武汉种群次之;佛山种群对氯菊酯和溴氰菊酯的抗性比率高达123倍和23.9倍。酯酶电泳结果显示:5个种群间酯酶多态性存在差异,广州和佛山两个库蚊种群酯酶表型多态性最高,有B1,A2-B2,A8-B8,A9-B9,B10和A11-B11等6种酯酶表型,提示高活性酯酶是主要的抗性机制。群体遗传学研究表明:每位点平均等位基因数(A)为2.76,平均多态位点百分率(P)为64.45%,平均预期杂合度(He)为0.1943,种群间遗传分化系数(Fst)值为0.10,平均基因流(Nm)=2.57,说明5个种群有较丰富的遗传多样性,种群内遗传多样性高于种群之间。据此推测,种群间可以通过迁徙等方式进行基因交流,使得遗传结构、抗性水平朝一致性方向变化。本研究对我国尖音库蚊复组蚊虫的综合治理有一定指导意义。

不同地理种群尖音库蚊复组杀虫药剂抗性及抗性酯酶

目的研究海南省三亚及海口市,广西壮族自治区南宁市、环江县,辽宁省葫芦岛市的尖音库蚊复组蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平及与抗性有关的酯酶。方法生物测定和淀粉电泳技术。结果三亚市尖音库蚊复组蚊虫种群对DDVP、对硫磷、毒死蜱、邻仲丁基苯基甲基氨基甲酸酯和残杀威的抗性分别是敏感品系SLAB的20.5、10.0、4.7、1.7、3.9倍;海口市尖音库蚊复组蚊虫种群对以上5种杀虫药剂的抗性分别是敏感品系SLAB的8.3、6.6、2.5、1.7、3.7倍,略低于三亚市蚊虫种群对5种杀虫药剂的抗性水平;广西壮族自治区的2个种群的抗性非常低或未产生抗性;葫芦岛种群已产生中、低抗性;淀粉凝胶电泳显示海南省以抗性酯酶A2B2为主,葫芦岛市以B1为主,广西壮族自治区的2个种群酯酶基因呈现多态现象。结论5个地区蚊虫对所测杀虫剂均产生中、低抗性,对有机磷的抗性大于氨基甲酸酯类,高活性酯酶是主要的抗性机制。

复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型

目的应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法。方法根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型。结果酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp)。结论PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型。

杭州尖音库蚊复组蚊虫对杀虫剂的抗性和酯酶同工酶的研究

用生物测定和淀粉电泳技术对采自杭州市西湖芡的尖音库蚊复组蚊虫的抗性水平及与抗性有关的酯酶进行了研究。结果表明西湖区种群对DDVP、三氯杀虫酯、残杀威、溴氰菊酯、氯菊酯的抗性分别是上海敏感品系的5．35、1．69、4．73、4．8、2．65倍。在1997－1993 3年间，对5种杀虫药剂的抗性分析，其中对氯菊酯的抗性的逐年增高。1999年的LC50比1997年增高14．5％，而对溴氰菊酯的抗性则呈降低趋势，1998和1999年的抗性无变化，其LC50比1997年降低了36％，对残杀威的抗性1998和1999年比1997年均有提高，抗性水平分别提高了38％和36．2％；对DDVP和三氯杀虫酯的抗性则无明显变化。酯酶分析结果显示，该种群存在过量产生的非特异性酯酶Estβ1^1和Estα2/β2，存在着较大的中性多态性，在有机磷的选择下，这些中性多态性可能会成为基因扩增的潜在因素。

中国尖音库蚊复组的研究

尖音库蚊复组(Culex pipiens complex)是库蚊属(Genus Culex)的重要类群之一。其共同特征是:喙全暗;各足股、胫节无淡色纵条,各跗节无淡色环;雄蚊阳茎中叶(背支)简单,肛侧片基侧臂不发达(图一).本复组包括模式种尖音库蚊[Culex(Culex) pipiens Linnaeus,1758],以及一些形态相似的亲缘种(sibling species)、亚种或“型”。其中的淡色库蚊和致倦库蚊广布于我国并已证实是我国班氏丝虫最重要的中间宿主和传播媒介,同时也被认为是乙型脑炎的传播媒介之一。

不同地理株尖音库蚊复组雄蚊尾器的光学镜和扫描电镜观察

本研究对烟台、济南、徐州、镇江、杭州、福州及厦门等不同纬度地区尖音库蚊复组的雄蚊尾器在光学镜下进行了观察。结果表明:在杭州以南地区,致倦库蚊为本复组的唯一成员,属南方组;而徐州及镇江地区的本复组成员中,尚包括淡色库蚊及中间型,与武汉地区的类似,统属中介组。济南以北地区的本复组蚊虫,仅有淡色库蚊,属于北方组。 通过光学显微镜和扫描电镜观察,进一步揭示了本复组雄蚊尾器的形态随纬度发生递交的现象;阳茎侧板中叶的形态特征是我国古北界与东洋界交错过渡地带本复组蚊虫的可靠鉴别依据。在过渡地带,所谓纯的淡色库蚊或致倦库蚊是很难得到的,这一假想在蚊虫抗性试验中具有实际意义。在扫描电镜下,还发现了在光学显微镜下未见过的一些特征,它们在分类学上的地位及其生理意义有待进一步探讨。但是,尾器的感觉毛数量多、分布广,可能在完成交配行为中具有重要意义。

尖音库蚊复组不同地理株蛋白质的比较研究

采用PAGF和薄层IEF技术,对镇江、青岛、济南及烟台等不同纬度地区尖音库蚊复组成蚊的蛋白质进行比较研究。结果表明:不同地理株及其不同亚种或型的蚊蛋白虽有所区别,但基本特征相似。从PAGE结果来看,尖音库蚊复组内不同地理株的蚊蛋白电泳带相似;除青岛外,各地淡色库蚊蛋白电泳带的扫描图形亦基本相似;青岛地区该蚊较特异,与其特殊的生境密切相关。此外,镇江地区致倦库蚊及其中间型的蛋白电泳带扫描曲线亦有所不同,这主要是由不同基因所决定的。从TEF结果来看,济南和烟台地区的淡色库蚊之间蛋白电泳的差异仅为14.29%。经分析,尽管上述蚊虫蛋白电泳扫描图形的基本特征略有差异,但蛋白电泳区带无明显不同,故差异仍未超过亚种阶元。薄层IEF分辨率高,明显优于PAGE,是值得推广的简便电泳分析技术。

尖音库蚊复组构成比变化与气候关系的探讨

作者于1986年10～11月同时采集徐州(34°N)和镇江(32°N)地区尖音库蚊复组(Culex pipiens comlex)雄蚊标本,以阳茎侧板中叶形态特征为依据,在光镜下进行组下分类。同时,还收集有关气象资料,对调查数据进行统计分析。结果表明:在十月份,二地区本复组蚊构成比差异非常显著(X^2=10.46,P<0.01);而在十一月份,其差异无显著性(X^2=0.47,P>0.05)。在十月份,徐州地区本复组蚊构成比与武汉的相似。

尖音库蚊复组蚊类抗性酯酶遗传变异性分析

目的 将建立的不同酯酶类型的库蚊有机磷抗性品系杂交，分析抗性酯酶基因之间遗传关系。方法 通过单卵块传代和杀虫剂筛选建立酯酶类型分别为B1、B2的品系JH1、JH2，并将两种酯品系进行杂交，杂种子代与敏感品系杂交，根据子代酯酶类型分析两种酯酶之间的遗传关系。结果 杂种队工与敏感品系杂交后，128个子代库蚊个体中，有121个（95．3％）表现出与亲代一致的表型，其余7个（4．7％）为重组个体。结论 抗性酯酶原因B1、B2是分别独立进行遗传的。

不同地理种群淡色库蚊抗性动态与遗传多样性的研究

对采自北京 ,郑州 ,商丘地区的 3个淡色库蚊地理种群的蚊虫 ,进行了有机磷和氨基甲酸酯类抗性水平的测定 ;利用淀粉凝胶电泳技术分析了 4个等位酶 ;甘油酶 3 磷酸脱氢酶 (GPD)、苹果酸酶 (ME)、苹果酸脱氢酶 (MDH)、羟酸酯酶 (EST) ;并通过 5个假定中性酶基因位点 (ME ,MDH 1,MDH 2 ,MDH 3和GPD)的基因型记录 ,利用biosys2软件分析了这 3个种群的遗传多样性。抗性水平的测定结果表明 :与北京敏感系相比 ,3个种群对敌敌畏、对硫磷的抗性水平较高 ,对仲丁威的抗性相对较低。淀粉电泳的结果表明 :北京种群中的高活性酯酶主要为Estβ11;郑州种群中主要为连锁形式存在的Estα8 β8、Estα2 β2和Estβ11;商丘种群中含有较高连锁存在的高活性的酯酶Estα8 β8、Estβ11和少量Estα9 β9。种群结构分析表明 :各种群间的遗传分化较低 ,Nm的间接计算值表明种群间的基因流动是频繁的。