我国大陆尖音库蚊复组对杀虫剂抗药性的分布研究

目的掌握我国大陆尖音库蚊组蚊对主要杀虫剂抗药性地理分布,探讨应对策略和措施,为蚊虫的控制和抗药性治理提供依据。方法通过万方医学网检索国内1994-2012年公开发表的有关尖音库蚊复合组的抗药性相关的论文进行收集,数据整理使用Excel 2003,绘制统计地图使用Maplnfo7.0。结果尖音库蚊对DDT、DDVP、马拉硫磷、仲丁威、氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯达到中等抗性水平以上的比例为55.6%、82.4%、22.7%、0、41.5%、64.4%和86.7%,达到高抗性的比例为22.2%、64.7%、0、0、12.2%、40.7%和33.3%。DDVP和溴氰菊酯的高抗性区域重叠率达到45.9%。结论大部分监测地区尖音库蚊组对菊酯类和有机磷类杀虫剂产生了较高的抗药性,对氨基甲酸酯类杀虫剂较敏感。有机磷类杀虫剂和拟除虫菊酯类杀虫剂的高抗性区域有一定的重叠性,需采取综合治理的策略。

不同地理种群尖音库蚊复组抗性动态和遗传多样性

通过生物测定、蛋白质电泳和等位酶分析等方法对5个不同地区的尖音库蚊复组蚊虫Culex pipienscomplex的抗性水平、种群中非特异性酯酶基因表型分布和种群遗传多样性进行了研究。不同地理种群的抗性检测结果表明:5个种群分别对敌敌畏、对硫磷、氯菊酯和溴氰菊酯的抗性较高,对残杀威、巴沙和胺菊酯的抗性较低;朝阳种群对敌敌畏抗性最高(55.7倍),武汉种群次之;佛山种群对氯菊酯和溴氰菊酯的抗性比率高达123倍和23.9倍。酯酶电泳结果显示:5个种群间酯酶多态性存在差异,广州和佛山两个库蚊种群酯酶表型多态性最高,有B1,A2-B2,A8-B8,A9-B9,B10和A11-B11等6种酯酶表型,提示高活性酯酶是主要的抗性机制。群体遗传学研究表明:每位点平均等位基因数(A)为2.76,平均多态位点百分率(P)为64.45%,平均预期杂合度(He)为0.1943,种群间遗传分化系数(Fst)值为0.10,平均基因流(Nm)=2.57,说明5个种群有较丰富的遗传多样性,种群内遗传多样性高于种群之间。据此推测,种群间可以通过迁徙等方式进行基因交流,使得遗传结构、抗性水平朝一致性方向变化。本研究对我国尖音库蚊复组蚊虫的综合治理有一定指导意义。

上海市冬季尖音库蚊复合组现状初步研究

为研究上海市冬季尖音库蚊复合组生态学，2012年12月中旬至2013年3月中旬，在上海市7个区县（3个郊区，4个市区），每旬开展一次冬季尖音库蚊复合组调查。结果发现郊区和市区地上建筑的尖音库蚊复合组进入越冬状态，而市区地下建筑的尖音库蚊属相当一部分没有进入越冬状态，且市区地下建筑的尖音库蚊复合组吸血率与郊区和市区地上建筑越冬的蚊虫没有显著差异。

我国尖音库蚊复合组蚊虫的杂交及其与Wolbachia感染的关系

为了了解我国尖音库蚊复合组蚊虫间杂交卵的不孵化现象和明确该现象与共生微生物Wolbachia感染的关系 ,对该复合组实验室种群 4个亚种进行了笼内杂交和抗生素处理后的杂交。试验表明 :在复合组蚊虫中骚扰库蚊Culexpipiensmolestus与淡色库蚊Cx.pipienspallens、致倦库蚊Cx.pipiensquinquefasciatus与尖音库蚊Cx .pipienspipiens之间存在有单向胞质不融合现象 ,骚扰库蚊的雄虫与尖音库蚊、致倦库蚊和淡色库蚊的雌虫杂交卵的孵化率分别为 0 0 6 %、 0 4 6 %和 0 19% ;该胞质不融合现象可以通过抗生素处理而消除 ,处理后骚扰库蚊雄虫与其余 3个亚种雌虫F3杂交卵的孵化率均有提高 ,分别为89 4 9% (t=3 90× 10 - 2 8<t0 0 1 =2 70 4 )、 2 3 39% (t =9 15× 10 - 7<t0 0 1 =2 6 6 0 )和 2 2 2 7% (t =5 0 8× 10 - 4<t0 0 1 =2 75 0 ) ,并可因抗生素处理而产生新的不融合类型。

我国尖音库蚊复合组蚊虫核糖体DNA第2内转录间隔区序列测定与分析

通过对我国尖音库蚊复合组蚊虫及三带喙库蚊核糖体DNA第二内转录间隔区 (rDNA ITS2 )的序列测定 ,表明rDNA ITS2序列在我国尖音库蚊复合组种内亚种间和亚种内的变异存在有重叠现象。分子系统关系分析没有发现与形态学亚种阶元分类地位的一致性 ,但在种间差异明显。

不同地理种群尖音库蚊复组杀虫药剂抗性及抗性酯酶

目的研究海南省三亚及海口市,广西壮族自治区南宁市、环江县,辽宁省葫芦岛市的尖音库蚊复组蚊虫对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性水平及与抗性有关的酯酶。方法生物测定和淀粉电泳技术。结果三亚市尖音库蚊复组蚊虫种群对DDVP、对硫磷、毒死蜱、邻仲丁基苯基甲基氨基甲酸酯和残杀威的抗性分别是敏感品系SLAB的20.5、10.0、4.7、1.7、3.9倍;海口市尖音库蚊复组蚊虫种群对以上5种杀虫药剂的抗性分别是敏感品系SLAB的8.3、6.6、2.5、1.7、3.7倍,略低于三亚市蚊虫种群对5种杀虫药剂的抗性水平;广西壮族自治区的2个种群的抗性非常低或未产生抗性;葫芦岛种群已产生中、低抗性;淀粉凝胶电泳显示海南省以抗性酯酶A2B2为主,葫芦岛市以B1为主,广西壮族自治区的2个种群酯酶基因呈现多态现象。结论5个地区蚊虫对所测杀虫剂均产生中、低抗性,对有机磷的抗性大于氨基甲酸酯类,高活性酯酶是主要的抗性机制。

不同地区尖音库蚊复合组抗药性的分子特征

通过生物测定、蛋白质电泳和单个蚊虫基因组Southern杂交三种方法对三个不同地区的尖音库蚊复合组蚊虫Culexpipienscomplex的抗性水平、抗性相关基因在种群中的分布及抗性分子特征进行了研究。采自山东高密、北京和云南昆明的尖音库蚊复合组蚊虫 4龄幼虫对敌敌畏、对硫磷 (有机磷类 )和仲丁威 (氨基甲酸酯类 )的抗性水平的测定结果表明 :与北京敏感系相比 ,高密种群对敌敌畏、对硫磷的抗性水平很高 ,北京种群对敌敌畏的抗性水平也很高 (约 30倍 ) ,三个种群对仲丁威的抗性与北京敏感系没有明显的区别。淀粉电泳的结果表明 :高密和北京种群中存在过量产生的非特异性酯酶Estβ11,昆明种群中存在过量产生的非特异性酯酶Estα2和Estβ2 ,单个蚊虫基因组Southern杂交的结果表明 :酯酶Estβ11。

Wolbachia的wsp基因片段在我国尖音库蚊复合组蚊虫中的PCR扩增

应用 Wolbachia的 wsp基因特异引物 ,通过 PCR方法对我国尖音库蚊复合组的 4个亚种的实验室种群以及 6个地理株种群进行了检测。结果都能扩增出 60 0 bp的特异性 DNA片段。表明 Wolbachia在我国尖音库蚊复合组蚊虫中的侵染较为普遍 。

复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型

目的应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法。方法根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型。结果酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp)。结论PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型。

我国尖音库蚊复合组的聚类分析

本文针对尖音库蚊复合组，选择了４个分类性状，包括雄蚊阳茎ＤＶ／Ｄ的比值、四龄幼虫呼吸管指数、四龄幼虫呼吸管１－Ｓ第１对毛的分枝数和第２对毛的分枝数，应用最小距离法对我国２２个地理株及尖音库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊的实验室杂交后代分别进行聚类分析，发现尖音库蚊乌鲁木齐株和骚扰库蚊北京株与其它株距离最远，在剩余的２０株蚊虫中，除思茅株外，聚为三类，分别代表分布在我国的淡色库蚊、致倦库蚊、以及淡色库蚊和致倦库蚊的中间型。在杂交后代的聚类中发现，尖音库蚊和致倦库蚊的杂交后代与淡色库蚊没有聚在一类。

尖音库蚊复合组（CulexpipiensComplex）生物分类学的研究：表皮碳氢化合物的气相色谱分析

本文报告了我国尖音库蚊复合组尖音库蚊、淡色库蚊和致倦库蚊表皮碳氢化合物的气相色谱分析，并与本复合组分布于日本的骚扰库蚊以及亲缘种迷走库蚊进行了比较。结果表明，尖音库蚊、淡色库蚊、致倦库蚊和骚扰库蚊表皮碳氢化合物的主要组分相同，含量存在着某些差异，与迷走库蚊相比则有较大的差异，而在一定程度上表现出复合组的特征。

杭州尖音库蚊复组蚊虫对杀虫剂的抗性和酯酶同工酶的研究

用生物测定和淀粉电泳技术对采自杭州市西湖芡的尖音库蚊复组蚊虫的抗性水平及与抗性有关的酯酶进行了研究。结果表明西湖区种群对DDVP、三氯杀虫酯、残杀威、溴氰菊酯、氯菊酯的抗性分别是上海敏感品系的5．35、1．69、4．73、4．8、2．65倍。在1997－1993 3年间，对5种杀虫药剂的抗性分析，其中对氯菊酯的抗性的逐年增高。1999年的LC50比1997年增高14．5％，而对溴氰菊酯的抗性则呈降低趋势，1998和1999年的抗性无变化，其LC50比1997年降低了36％，对残杀威的抗性1998和1999年比1997年均有提高，抗性水平分别提高了38％和36．2％；对DDVP和三氯杀虫酯的抗性则无明显变化。酯酶分析结果显示，该种群存在过量产生的非特异性酯酶Estβ1^1和Estα2/β2，存在着较大的中性多态性，在有机磷的选择下，这些中性多态性可能会成为基因扩增的潜在因素。

中国尖音库蚊复合组生物分类学的研究：雄蚊阳茎DV／D的数值分析

本文报道了我国２３个不同地区的尖音库蚊复合组（Ｃｕｌｅｘｐｉｐｉｅｎｓ ｃｏｍｐｌｅｘ）雄蚊阳茎ＤＶ／Ｄ的数值分析结果。经过多元相关与回归分析发现，雄蚊阳茎ＤＶ／Ｄ的比值与纬度、经度之间存在着负相关的关系，并建立了ＤＶ／Ｄ与纬度的单元回归方程，以及ＤＶ／Ｄ与纬度、经度之间的多元回归方程。根据ＤＶ／Ｄ＝０．５为区分淡色库蚊和致倦库蚊的一般标准，从回归方程中求得北纬３０°左右为我国淡色库蚊和致倦库蚊地理分布的理论分界线。

中国尖音库蚊复合组杂交的研究

本文对分布在我国的尖音库蚊复合组的尖音库蚊、致倦库蚊和淡色库蚊进行杂交研究，结果表明致倦库蚊与尖音库蚊及淡色库蚊以及后两者杂交可以产生能育的Ｆ１代，它们之间没有传统意义上的生殖隔离，致倦库蚊应为尖音库蚊的一个亚种，而不是如国外有些学者认为的独立种。另外，杂种Ｆ２代成活率很低，这有可能是尖音库蚊（广义）种下分化在遗传学上的反映。

我国不同地理株尖音库蚊复合组雄蚊尾器的分类学研究

本研究对我国22个不同地理位置的尖音库蚊复合组雄蚊尾器进行了观察分析。通过660片雄蚊尾器玻片标本显微镜下观察并测量雄蚊阳茎DV／D值。鉴定出内蒙古满洲里某医院地下井为骚扰库蚊；黑龙江省佳木斯抚远县黑瞎子岛，甘肃省嘉峪关市、张掖市、武威市、民勤县均为尖音库蚊。经相关与回归分析得出雄蚊阳茎DV／D值与纬度之间存在负相关，并建立单元回归方程，反映出致倦库蚊和淡色库蚊的地理分布特征，验证了尖音库蚊复合组雄蚊阳茎DV／D值随着地理纬度不同而变化。

中国尖音库蚊复合组（Culex pipiens Complex）生物分类学的研究──幼虫形态特征的数值分析

本文报道了１９９０年采自我国２１个不同地区的尖音库蚊复合组四龄幼虫形态分类的数值分析结果，经过多因素相关与回归分析发现，呼吸管指数与纬度、经度之间存在着正相关的关系，而呼吸管１－Ｓ第一对毛分枝数和第二对毛分枝数与纬度、经度之间存在着负相关的关系，并建立了上述分类特征与纬度、经度的多元直线回归方程。另外，综合上述三个分类特征，对典型的尖音库蚊、谈色库蚊和致倦库蚊进行了多元判别和典型变量分析。

中国尖音库蚊复合组支序系统学的研究

本文应用支序系统学原理和方法，采用形态和生态性状，对尖音库蚊复合组的４个成员进行了支序系统学研究。提出在尖音库蚊复合组中，尖音库蚊是原始的类群，骚扰库蚊为较进化的类群。

杭州地区尖音库蚊复合组的抗药性动态

用生物测定和淀粉电泳技术对采自杭州市和上海市的尖音库蚊复合组(Culex pipienscomplex)蚊虫的抗性水平及与抗性有关的酯酶进行了研究。抗性水平的测定结果表明:与S-LAB敏感系相比,杭州市种群对DDVP、对硫磷、毒死蜱、邻仲丁基苯基甲基氨基甲酸酯和残杀威的抗性分别是S-LAB敏感品系的3.9,7.6,1.6,1.6,2.5倍。利用淀粉凝胶电泳技术分析了野生种群中抗性羧酸酯酶(EST)等位酶的基因表型及其频率。4个种群中都存在着世界范围内广泛分布的过量产生的非特异性酯酶Estβ1和Estα2/β2,上海种群主要以高活性的酯酶Estβ11为主(98.3%),除了这些基因以外,2004年杭州市下城区又出现了1种新的酯酶基因(50%)。

中国尖音库蚊复组的研究

尖音库蚊复组(Culex pipiens complex)是库蚊属(Genus Culex)的重要类群之一。其共同特征是:喙全暗;各足股、胫节无淡色纵条,各跗节无淡色环;雄蚊阳茎中叶(背支)简单,肛侧片基侧臂不发达(图一).本复组包括模式种尖音库蚊[Culex(Culex) pipiens Linnaeus,1758],以及一些形态相似的亲缘种(sibling species)、亚种或“型”。其中的淡色库蚊和致倦库蚊广布于我国并已证实是我国班氏丝虫最重要的中间宿主和传播媒介,同时也被认为是乙型脑炎的传播媒介之一。

不同地理株尖音库蚊复组雄蚊尾器的光学镜和扫描电镜观察

本研究对烟台、济南、徐州、镇江、杭州、福州及厦门等不同纬度地区尖音库蚊复组的雄蚊尾器在光学镜下进行了观察。结果表明:在杭州以南地区,致倦库蚊为本复组的唯一成员,属南方组;而徐州及镇江地区的本复组成员中,尚包括淡色库蚊及中间型,与武汉地区的类似,统属中介组。济南以北地区的本复组蚊虫,仅有淡色库蚊,属于北方组。 通过光学显微镜和扫描电镜观察,进一步揭示了本复组雄蚊尾器的形态随纬度发生递交的现象;阳茎侧板中叶的形态特征是我国古北界与东洋界交错过渡地带本复组蚊虫的可靠鉴别依据。在过渡地带,所谓纯的淡色库蚊或致倦库蚊是很难得到的,这一假想在蚊虫抗性试验中具有实际意义。在扫描电镜下,还发现了在光学显微镜下未见过的一些特征,它们在分类学上的地位及其生理意义有待进一步探讨。但是,尾器的感觉毛数量多、分布广,可能在完成交配行为中具有重要意义。