雅鲁藏布江中游拉萨裸裂尻鱼环境DNA检测及生物量评估

建立快速和准确的环境DNA(eDNA)检测方法,可为鱼类的长期监测提供便利,为鱼类资源保护和管理提供技术支撑。2019年在雅鲁藏布江中游干流及拉鲁湿地和茶巴朗湿地采集了20种鱼和水样,针对拉萨裸裂尻鱼(Schizopygopsis younghusbandi younghusbandi)设计Cytb基因的特异性引物和探针,利用微滴式数字PCR(ddPCR)检测水样中e DNA拷贝数,并分析其与生物量和丰度之间的相关性。结果显示,正反向引物及探针序列与其他19种鱼之间的平均错配碱基数分别为6.8、6.9和3.6,且对其基因组DNA进行ddPCR扩增没有荧光信号。通过对比ddPCR和网捕2种方法,70%样点中检测结果相同,剩余30%样点都是网捕未捕获但ddPCR检出的情况。在拉鲁湿地和雅鲁藏布江干流的样点中,水样eDNA拷贝数与拉萨裸裂尻鱼生物量和丰度之间均具有显著的相关性,拉鲁湿地水样e DNA与二者的相关系数分别为0.987和0.647,雅鲁藏布江水样eDNA与二者的相关系数分别为0.786和0.756,表明eDNA技术是鱼类分布和生物量监测的有效方法。eDNA检测易受到近缘物种和水体理化性质的影响。

高糖环境下药桑提取物脱氧野尻霉素对MC3T3-E1细胞的影响

目的研究药桑提取物脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)在高糖环境下对MC3T3-E1细胞的增殖和成骨分化的作用。方法取P4代MC3T3-E1细胞,在50 mmol/L的高糖环境下通过细胞毒性检测试剂盒(Cell dountingkit-8,CCK-8)检测不同浓度的DNJ(10 mmol/L、1 mmol/L、100μmol/L、10μmol/L、1μmol/L、100 nmol/L、10 nmol/L、1 nmol/L)干预对MC3T3-E1细胞增殖的影响,筛选出后续实验研究的DNJ浓度。取培养至对数生长期的MC3T3-E1细胞,按不同干预方式分为:空白组(完全培养基)、高糖组(50 mmol/L糖浓度的完全培养基)、实验组[50 mmol/L糖浓度的完全培养基+不同浓度DNJ(100、10、1μmol/L)溶液]。使用流式细胞技术检测细胞的凋亡和活性氧,采用ELISA试剂盒检测细胞上清液中AGEs和IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,通过碱性磷酸酶染色及活性检测MC3T3-E1细胞的早期成骨能力的影响,通过茜素红染色和定量检测MC3T3-E1细胞的晚期成骨能力,采用RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax、Bcl-2、IGF-1、ALP、OCN、OSX、Col-1和Runx2的mRNA表达情况。结果高糖环境下,100、10、1μmol/L的DNJ可以促进MC3T3-E1细胞增殖。与高糖组相比,实验组凋亡率、活性氧含量、细胞上清液中AGEs、IL-1β、IL-6和TNF-α含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果表明,与高糖组相比,实验组Bax、IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达降低,Bcl-2、IGF-1、ALP、OCN、OSX、Col-1和Runx2的mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在高糖环境下,一定浓度范围内DNJ能够抑制MC3T3-E1细胞的凋亡和炎症因子的产生,促进成骨细胞的分化。

桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的开发现状与前景展望

1-脱氧野尻霉素(DNJ)作为桑资源中特有的物质,具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等生物活性,有较高的利用价值。为进一步促进DNJ的开发和利用,本文对现阶段DNJ的提取方法、生物活性以及应用领域进行整理,分析和展望了DNJ现阶段及未来的研究状况。发现随着DNJ提取工艺的进步,DNJ的提取效率在逐步提升,并且得益于DNJ所具备的降血糖活性、抗病毒活性、抗肿瘤活性与抗氧化和抗炎活性,使其在动物生产、医药、食品领域有着良好的应用前景。相信随着对DNJ研究与开发的深入,能使DNJ得到更充分的应用,从而推动桑资源的多元化利用。

软刺裸裂尻鱼耳石日轮及年轮沉积规律研究

研究利用软刺裸裂尻鱼(Schizopygopsis malacanthus)确证了耳石生长轮沉积规律,并在此基础上,探究了其生长轮与年轮关系,推算了第一年轮形成时间。研究结果表明:仔鱼微耳石第一轮纹在出膜后第二天形成,在实验条件下,轮纹沉积具有日周期性,生长轮为日轮;成鱼轮纹沉积具有年周期性,生长轮每年增加1轮。基于耳石日轮技术推算养殖和野生软刺裸裂尻鱼第一年轮形成时间分别为2021年1月28日至3月13日(n=40)和2017年3月8日至5月10日(n=75)。养殖和野生样本耳石轮纹数年际间的分析结果发现,软刺裸裂尻鱼耳石轮纹数和耳石年生长宽度随着年龄增加逐渐降低,耳石年生长面积随着年龄增加逐渐增加。这些结果揭示了软刺裸裂尻鱼耳石轮纹沉积规律,有助于增加年龄鉴定的准确性,进而为种群动态研究和渔业管理政策制定等提供参考。

拉萨裸裂尻鱼对光照颜色和强度的选择

通过自制的环形水槽研究了在不同底质和水流综合影响下拉萨裸裂尻鱼对光色和光强的偏好。结果显示,在动水有无底质条件下,拉萨裸裂尻鱼均偏好于蓝光或深蓝光(471.20~479.80 nm),次亮光(51.00 EV和62.10 EV);在静水有底质条件下主要偏好于暗光(43.70 EV),在无底质条件下偏好于次亮光(62.10 EV)。研究结果可为高原过鱼设施进口光照诱集鱼技术应用提供基础数据。

益母草碱、黄精多糖、脱氧野尻霉素联合用药抗血栓和降血糖疗效的评价

目的通过建立和应用斑马鱼Ⅱ型糖尿病合并血栓模型,对益母草碱、黄精多糖、脱氧野尻霉素的联合用药在降血糖和抗血栓方面进行疗效评价。方法在链脲佐菌素建立斑马鱼Ⅱ型糖尿病模型的基础上,分别采用苯肼、花生四烯酸和普纳替尼建立血栓模型,设置对照组、模型组、二甲双胍+阿司匹林组、联合药高中低浓度组,进行药物干预后,观察尾静脉血栓形成情况;采用试剂盒测定各组幼鱼的组织糖含量;采用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞进行定量分析,计算抑制血栓率;使用实时荧光定量聚合酶链反应检测相关血栓基因mRNA的表达。结果与模型组相比,联合用药能显著增加斑马鱼心脏红细胞染色强度、抑制血栓形成、下调血栓相关基因表达和降低组织糖含量。结论3种药物的联合使用可有效降低组织糖含量并具有抗血栓效果,在治疗Ⅱ型糖尿病和血栓药物开发方面具有巨大潜力。

桑叶中1-脱氧野尻霉素降糖机制研究进展

糖尿病是以血葡萄糖水平慢性增高为特征的代谢疾病群,严重危害人体健康,且其流行趋势日益严峻。通过饮食控制来防治糖尿病是较为温和安全的方法,其中对于食源性降糖活性成分的研究不断深入。桑叶具有良好的降糖效果,1-脱氧野尻霉素是桑叶的主要降糖成分,对其降糖机制已有较为广泛深入的研究。本文综述了1-脱氧野尻霉素调节血糖作用的主要机制,并针对1-脱氧野尻霉素以及桑叶的开发利用提出展望,为未来桑叶功能成分尤其是1-脱氧野尻霉素的相关研究提供了理论参考。

桑叶1-脱氧野尻霉素对新西兰白兔生长性能、肉品质和抗氧化性能的影响

试验旨在研究正常桑叶饲喂量下1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)对新西兰白兔生长性能、养分表观消化率、肉品质、肌肉脂肪酸组成和抗氧化性能的影响。选取36只45日龄体重相近[(1.05±0.04)kg]的新西兰白兔按饲粮中DNJ添加量(0、0.14、0.28 g/kg)随机分为对照组、L-DNJ组和H-DNJ组,每组12个重复,每个重复1只。预试期14 d,正试期28 d。结果表明:①与对照组相比,H-DNJ组兔平均体重、干物质和粗脂肪表观消化率显著降低(P<0.05),粗蛋白表观消化率显著增高(P<0.05);②与对照组相比,处理组兔肉红度a^(*)显著提高(P<0.05),粗脂肪含量显著降低(P<0.05),HDNJ组兔肉亮度L^(*)显著降低(P<0.05);③各组兔肉中棕榈酸(16:0)和亚油酸(C18:2n6c)含量最高,其次为油酸(18:1n9)和硬脂酸(18:0),H-DNJ组兔肉中饱和脂肪酸(SFA)含量显著降低(P<0.05),多不饱和脂肪酸(PUFA)含量显著提高(P<0.05);④处理组兔中肉谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著提高(P<0.05),H-DNJ组总抗氧化能力(T-AOC)显著提高(P<0.05)。综上所述,桑叶DNJ能够降低新西兰白兔对干物质和粗脂肪表观消化率,提高对粗蛋白表观消化率,影响生长性能。但适量添加可以改善兔肉质量,提高兔肉中PUFA含量和抗氧化能力,使其更有益人类健康并利于保存。

黄河裸裂尻鱼群体遗传结构和Cyt b序列变异

测定了来自黄河上游和柴达木盆地托索湖的裸裂尻鱼共16个个体的Cytb基因全序列(1141bp),探讨了种群结构和遗传多样性。用MEGA2.1软件分析了碱基组成和序列变异;以青海湖裸鲤、花斑裸鲤和极边扁咽齿鱼为外类群,用PAUP*4.0b10程序构建了单倍型NJ树;用Arlequin Ver.2000程序计算了群体间遗传变异值(Fst)和Nm值以及群体分化概率值。结果显示,来自柴达木水系托索湖的裸裂尻鱼没有形成单系群,Fst=0.204(P<0.05),Nm=1.95。初步判断,黄河和柴达木水系托索湖的裸裂尻鱼未显著分化,支持将柴达木裸裂尻鱼(Schizopygopsis kessleri)归并入黄河裸裂尻鱼(Schizopygopsis pylzovi)的形态学结果。两种群核苷酸多样度(π)分别为0.0012和0.0026,表现为较低水平。根据校正的分子钟推测,黄河和托索湖裸裂尻鱼群体分歧时间为距今7万年左右的更新世末期,结合地理分布的资料和古地质事件,对黄河裸裂尻鱼群体分布水系间的历史联系进行了分析。

1-脱氧野尻霉素衍生物的研究进展

1-脱氧野尻霉素(DNJ)是一种多羟基哌啶生物碱。DNJ及其衍生物具有降血糖、抗病毒、抑制肿瘤转移等作用。此文综述了近年来DNJ及其衍生物的研究进展。

脱氧野尻霉素抑制乙型肝炎病毒复制的体外实验研究

目的探讨脱氧野尻霉素（Deoxynojirimycin，DNJ）及其衍生物忖丁基-脱氧野尻霉素（N-butyl—De—oxynojirimycin，N—butyl—DNJ）的体外抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法以HepG22．2．15细胞为模型，与药物共培养观察9d，于第3、6、9d收集培养上清行乙型肝炎表面抗原及e抗原（HBsAg及HBeAg）、HBV DNA定量检测。结果培养第9d，1000μg／mL DNJ、100μg／mL N-butyl-DNJ具有较明显抑制病毒复制的作用，与对照组比较，差异均具显著性（均P=0．001）。结论DNJ及其衍生物在实验浓度下无明显和直接的细胞毒性作用，分别在1000μg／mL、100μg／mL具有较明显的抑制HBV复制的作用。

桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取和对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎性因子的影响

目的:对桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取条件进行优化后研究其对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡和炎性因子的影响。方法:建立1-脱氧野尻霉素的定量检测方法,探讨桑叶中1-脱氧野尻霉素的最佳提取条件。培养小鼠肾小球系膜(SV40 MES 13)细胞,并分为四组:正常对照组(PBS)、高糖组(30 mmoL/L葡萄糖)和1-脱氧野尻霉素组(2、50μM),给药结束后采用CCK-8法测定SV40 MES 13细胞的存活率,ELISA测定炎性因子单核细胞趋化蛋白1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)的水平。最后用Western blotting法检测细胞增殖蛋白Cyclin D1和PCNA的表达水平。结果:桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取条件最终优化为料液比1∶15 g/mL、pH值3.0和提取时间30 min。1-脱氧野尻霉素明显提高SV40 MES 13细胞的存活率,并下调炎性因子IL-6的表达水平,且高剂量的1-脱氧野尻霉素显著降低Cyclin D1和PCNA的表达。结论:选择合适的料液比、pH值和提取时间可优化桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取工艺,此外,1-脱氧野尻霉素具有改善高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡的作用,其作用机制与调控炎性因子及相关增值蛋白的表达有关。

不同养殖环境对黄河裸裂尻鱼苗生长及成活率的影响

黄河裸裂尻鱼是我国特有的黄河上游珍稀物种,近年黄河上游生态环境日益恶化,为挽救黄河裸裂尻鱼,而异地人工繁殖保种和提高繁殖成活率,是最为有效的技术途径。本试验通过加强黄河裸裂尻鱼鱼苗培育管理技术,探索不同养殖环境下的培育管理技术,投喂饵料及养殖环境的过渡技术,提高鱼苗成活率,优化黄河裸裂尻鱼鱼苗培育管理技术。试验结果表明:刚上浮鱼苗前期在池塘培育更有利于鱼苗开口摄食,体长相对增长率为68.6%、体重相对增长率为77.6%,肥满度为22.48,均比水族缸培育期间高;在池塘培育30 d后过渡到水族缸培育,水族缸培育阶段成活率为83.2%、89.5%、94.1%、93.1%,均比池塘培育阶段成活率高。

黄河裸裂尻鱼人工繁殖技术在生产实践中的应用

立足生产实践,具体阐述黄河裸裂尻鱼(Schigoygopsis pylzovi)人工繁殖技术的具体方法步骤、优缺点以及提高黄河裸裂尻鱼人工繁殖效率的措施。

1-脱氧野尻霉素的来源及合成研究进展

1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojirimycin,DNJ)是一种有效的α-糖苷酶抑制剂,具有显著的降血糖作用。野尻霉素最先从链霉菌中发现,而天然DNJ最先是从桑根皮中分离到的。在植物中,已从桑树(MorusL.)、鸭跖草(Commelina communis)、风信子(Hyacinthus orientalis)以及沙参属植物(Adenophora triphyllavar.japonica)中分离鉴定到DNJ,其中桑树中的DNJ含量最高,并且因桑品种、药用部位、季节气候、地理土壤、叶位和发育阶段等因素的不同而存在很大差异。在微生物中,已从多种链霉菌和芽孢杆菌中分离到DNJ,还发现从桑树中分离到的嗜麦芽寡养假单胞杆菌(Stenotrophomonas maltophilia)和藤黄微球菌(Micrococcus luteus)2种内生菌也能够产生DNJ,已对多种微生物产DNJ的发酵条件进行研究。在昆虫中,除家蚕(Bombyxmori)富含DNJ外,野桑蚕(Bombyxmandarina)、桑蟥(Rondotia menciana)、桑尺蠖(Phthonandria atrineata)、桑螟(Diaphani apy-loalis)等取食桑叶的单食性或寡食性昆虫也富含DNJ,昆虫体内的DNJ来源于食物,其中家蚕体内DNJ的含量因蚕品种、发育时期、组织器官以及饲料等因素的不同而异,家蚕随龄期进展存在着对DNJ的吸收富集和排泄的周期性变化。目前已经对链霉菌、芽孢杆菌和鸭跖草体内DNJ的生物合成途径进行了探索,发现不同物种体内DNJ的合成机制不同。另已探明了DNJ的3种主要合成方法,人工合成的一些DNJ衍生物已经应用于临床。

桑树中的1-脱氧野尻霉素含量变化规律研究

综合桑品种、桑树生长季节、桑树不同药用部位以及桑叶的不同发育阶段等因素探讨桑树(Morus L.)体内1-脱氧野尻霉素(1-deoxynojimycin,1-DNJ)的积累规律,期望发掘富含1-DNJ的生物资源。利用反相高效液相色谱法测定了18个代表性桑品种的摘芯芽和2个桑品种全年不同季节、不同发育时期的桑叶以及不同季节桑枝皮中1-DNJ的含量,并测定了与桑树亲缘关系相近的构树(Broussonetia papyrifera L.)等7种植物中的1-DNJ含量。在18个供试桑品种的摘芯芽中,1-DNJ含量以秋雨和沙2×伦教109最高,质量分数均达0.328 0%左右,黄鲁的1-DNJ含量最低。农桑14号和陕桑305两个桑品种冬、春季不同发育时期桑叶中的1-DNJ含量以冬芽最高,质量分数分别达到0.345 3%、0.255 7%,在开叶期和叶片成熟期较高,在缓慢生长期较低;不同季节桑叶中1-DNJ的含量均是嫩芽>嫩叶>成熟叶>老叶,其中嫩芽和嫩叶中1-DNJ含量以晚秋最高,成熟叶中以夏季最高,而老叶中的1-DNJ含量以春季最高;桑枝皮中1-DNJ的含量以中秋和晚秋期较高,夏季最低。测定的7种非桑属植物均不含1-DNJ。结果说明桑树是富含1-DNJ的主要植物资源,其中在桑园管理过程可以大量获得的桑树摘芯芽以及桑树伐条剪下的桑枝(桑皮)中均富含1-DNJ,具有重要的开发利用价值。

桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素的含量考察

目的建立桑叶中总生物碱和1-脱氧野尻霉素(DNJ)含量的测定方法,并考察不同采摘时间、不同种植基地及药用部位的桑叶药材中总生物碱和DNJ含量。方法采用雷氏盐比色法测定总生物碱含量;应用HPLC-ELSD测定DNJ含量。流动相为乙腈-水(80:20);流速:1.0mL.min-1;柱温30℃;进样量:20μL。漂移管温度55℃;载气(N2)压力:0.15MPa。结果本实验所建立的方法准确、重复性好。不同采摘时间、采摘部位的桑叶中二者含量差异较大,不同种植基地的桑叶中二者含量变化相对较小。结论测定结果表明,桑叶中DNJ和总生物碱的含量与采摘时间、种植基地及药用部位等密切相关,其中采摘季节、部位影响较大。

用反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量

以0.05 mol/L HC l为溶剂提取蚕粉和桑叶粉中的1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用9-芴基氯甲酸甲酯(FMOC)为衍化剂,在pH 8.5的硼酸盐缓冲液中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的DNJ-FMOC络合物,再用反相高效液相色谱-紫外检测法对其分离测定。结果表明,反应产物的色谱图分离效果良好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,加样回收率平均为100.7%。精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率试验表明,该方法稳定可靠,可以作为测定家蚕、桑叶及有关药物样品中DNJ含量的有效方法。

桑叶1-脱氧野尻霉素(DNJ)对α-蔗糖酶的抑制动力学研究

从桑叶中提取的1-脱氧野尻霉素(DNJ)作为糖苷酶抑制剂具有降血糖的功能。为了解明桑叶DNJ对α-蔗糖酶的作用机制,应用酶抑制动力学分析桑叶DNJ(纯度>95%)对α-蔗糖酶的抑制特性。通过建立的α-蔗糖酶酶促反应体系表明,在α-蔗糖酶质量浓度≤500μg/mL、反应时间8min以内时,反应体系呈现良好的线性趋势;抑制活性检测表明,桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显的抑制作用,其半抑制浓度(IC50)为5.67mg/mL;依据酶抑制动力学曲线特征推断桑叶DNJ对α-蔗糖酶具有明显可逆的非竞争性抑制作用,其抑制常数Ki为6.73mg/mL。

12个桑树品种桑叶中的1-脱氧野尻霉素含量测定与分析

基于开发我国桑树资源的药用保健功能的目的,采用柱前荧光衍生高效液相色谱法对云南省不同种的12个桑树品种桑叶中的1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)含量进行了检测与分析。结果表明:不同桑树品种桑叶中的1-DNJ含量有差异,其中开远蒙桑桑叶中的1-DNJ的质量比为4.070 mg/kg,其含量最高,极显著高于其他品种;水桑、开远鬼桑、河口长穗桑桑叶中的1-DNJ含量较高,显著高于其余品种;其余8个品种之间的差异不显著。