尼克酰胺N-甲基化酶基因多态性对血清同型半胱氨酸的影响

目的探讨尼克酰胺N-甲基化酶(NNMT)A/G基因多态性与血清总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系,及其与叶酸和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T多态性的相互作用。方法采用横断面研究,选择日本某公司健康男性员工221例(40～64岁)为研究对象,应用LightTyper溶解曲线法和PCR-RLFP的方法分别检测NNMT A/G和MTHFR/C677T基因型。结果NNMT A/G各基因型受检者的血清tHcy水平间差异无统计学意义(P=0.254)。低叶酸水平者中NNMT GG基因型者与A等位基因携带者(GG和AA+AG)的tHcy水平间差异有统计学意义(P=0.029),而这种差异在中、高叶酸水平者间均无统计学意义(P值分别为0.428、0.871);叶酸与NNMT A/G基因多态性存在相互作用(P=0.008)。低叶酸水平者NNMT A/G和MTHFR C677T两种基因型存在相互作用(P=0.034),携带NNMT GG基因的MTHFR TT基因型者其tHcy浓度与其他基因型个体间差异有统计学意义(P<0.001)。结论NNMTA/G多态性不是影响日本健康男性血清tHcy水平的独立危险因素,但其可能与叶酸、MTHFR C677T多态性存在相互作用而影响血清tHcy水平。

尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

尼克酰胺N-甲基化酶（nicotinamide N—methytransferase，NNMT）是S-腺苷-L一蛋氨酸依赖的胞质酶。其主要的生物学作用是参与生物转化，催化一些吡啶衍生物，如吡啶、喹林、β-咔林等的甲基化。这种酶存在人体内多种组织中，其中在肝脏组织中表达量最大，而在其他组织，如。肾脏、肺、骨骼肌、心脏、脑组织仅有微量表达。

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。

过表达NNMT对SMMC7721肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨尼克酰胺-N-甲基化酶(NNMT)对人肝癌细胞株SMMC7721恶性生物学行为影响。方法分别对转染NNMT基因SMMC7721/NNMT组(简称S/NNMT)、对照组SMMC7721细胞组(简称S)及转染pcDNA3.1空质粒SMMC7721/pcDNA3.1(简称S/P)组细胞进行MTT增殖实验、克隆形成实验、黏附实验、侵袭实验等,以研究过表达NNMT对细胞生物学行为的影响。结果 MTT法检测结果显示S/NNMT组细胞增殖速度、克隆形成率与S组、S/P组比较差异无统计学意义(P>0.05),S/NNMT组细胞异质黏附能力明显高于S组、S/P组细胞(P<0.001);Transwell侵袭力实验结果显示S/NNMT组细胞OD值明显高于其余两组(P<0.001)。结论 NNMT可以使肝癌细胞的恶性表形发生变化,使其侵袭转移能力增强。

固相萃取-HPLC快速测定血清中烟酸及其代谢产物

建立血清中烟酸(NA)、烟酰胺(NM)及其代谢产物N′-甲基尼克酰胺(NMN)、2-吡啶酮(2Py)的测定方法。采用高效液相色谱法(HPLC),以氨基固相柱萃取样品,0.04mol/L KH2PO4提取洗脱,同时测定血清中NMN、NA、2Py、NM的含量。校准曲线线性范围为0.5—30μg/mL,r≥0.9986。检出限为NMN 0.45μg/mL,NA 0.51μg/mL,2Py 0.15μg/mL,NM 0.20μg/mL。回收率为88.6%—105.1%,相对标准偏差(RSD)为1.3%—7.8%。本法简单快速,准确,灵敏,达到了实验目的和要求。